Nós desenvolvemos um método simples, confiável e relativamente barata para a intubação traqueal em ratos através de laringoscopia direta utilizando um otoscópio com um espéculo 2,0 mm. Esta técnica é não traumático e pode ser usado para as medições repetidas em experiências crónicas. Achamos superior à traqueostomia ou relatado anteriormente técnicas não cirúrgicas.
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Artigo de método
Entubação endotraqueal em Ratos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Ratos, ambos do tipo selvagem e transgênica, são o modelo de mamíferos capital em pesquisa biomédica atualmente. Intubação e ventilação mecânica são necessários para experimentos com animais inteiros que necessitam de cirurgia sob anestesia profunda ou medidas de função pulmonar. A traqueostomia tem sido o padrão para entubar as vias aéreas nestes ratos para permitir a ventilação mecânica. A entubação orotraqueal foi relatado, mas não tem sido utilizada com sucesso em muitos estudos, devido à dificuldade técnica substancial ou uma necessidade de equipamento altamente especializado e caro. Aqui nós relatamos uma técnica de laringoscopia direta utilizando um otoscópio equipado com um espéculo 2,0 mm e com um cateter intravenoso 20 G como um tubo endotraqueal. Nós temos usado esta técnica extensivamente e de forma confiável para entubar e realizar avaliações precisas da função pulmonar em camundongos. Esta técnica tem se mostrado segura, com praticamente nenhuma perda de animais em mãos experientes. Além disso, esta técnicapode ser utilizado para estudos repetidos de ratinhos em modelos crónicos.
Introdução
O rato de laboratório suplantou praticamente todas as espécies como o principal modelo de mamíferos de biologia e pathobiology. O rato de laboratório é a menor espécie de mamíferos que tem sido clara e exaustivamente demonstrado ser de valor como um modelo da doença humana e provou inestimável em avanços de nossa compreensão da biologia humana e doenças. O tempo de gestação curto e substancialmente menor custo tem permitido o desenvolvimento e estudo de ratinhos nulos e transgénicos como uma ferramenta comum em pesquisa biomédica. No entanto, o tamanho do rato de laboratório média (20-25 g) tem limitado o seu estudo em estudos com base fisiológica ou cirurgicamente e....
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Protocolo
1. Preparação animal
- Obter ratos que estão com mais de 8 semanas e mais de 20 g (camundongos menores podem ser entubado por um especialista).
- Anestesia
- Injectar ratinhos com 20 mg / kg, cada uma, de cetamina e xilazina intraperitonealmente como uma pré-anestésica. (Esta dose é insuficiente para anestesiar totalmente o mouse, mas facilita a transferência, após intubação, a ventilação mecânica.) No entanto, o ajuste das doses podem ser necessárias de acordo com a resposta do anestésico, em consulta com o veterinário institucional.)
- Induzir a anestesia em ratos com 3,5% de isoflurano / oxigênio em uma câmara de indução para 90-120....
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Resultados
Intubação com a técnica acima é confiável e rápido. O posicionamento adequado do tubo endotraqueal é mais facilmente verificado observando borbulhamento de gases expirados a partir do membro expiratório submersa do circuito do ventilador (geralmente numa armadilha de PEEP) e desvios negativos sobre a pressão das vias respiratórias traçando (Figura 1). Os desvios negativos sobre o rastreamento de pressão nas vias aéreas são as mais confiáveis. Outros têm utilizado o movimento de uma pequena gota de fluid.......
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Discussão
Neste relatório nós descrevemos uma técnica simples e confiável para entubar ratos que é não traumática e pode ser usado repetidamente no mesmo animal. Esta técnica pode ser realizada com laboratório simples ou equipamentos médicos que podem ser comprados por uma módica quantia. A técnica de laringoscopia directa, originalmente relatado por Hastings e colegas 4, pode também ser usado para uma variedade de fins, mas principalmente para administrar com precisão as substâncias de ensaio para o trato respiratório.......
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Divulgações
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.
Agradecimentos
A Grant Mérito do Departamento de Assuntos de Veteranos e uma bolsa T32-HL098062 do NHLBI dos Institutos Nacionais de Saúde apoiaram este trabalho. Queremos agradecem o conselho de Randolph H. Hasting, MD, Ph.D. e os conselhos e apoio da Unidade de Medicina Veterinária do Sistema de Saúde VA San Diego.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Cabeça do otoscópio operacional | Welch Allyn | 21700 | $188.98 |
| Alça do otoscópio | Welch Allyn | 71000 | $112.20 |
| Espéculo reutilizável | Welch Allyn | 22002 | $3.98 |
| Fórceps fino | Miltex | 18-779 | $107.18 |
| Suporte de grampo pequeno para segurar o otoscópio | |||
| Vaporizador de isoflurano (circuito múltiplo com manuseio de gases residuais a vácuo) | Summit Medical | $ 3.000 | |
| Flexivent (ventilador animal) | SCIREQ | $ 35.000 | |
| Cateter intravenoso (20 G, 1 pol) | BD | 381233 | $ 9,62 |
| Tubo de polietileno (PE10) (0,011 em ID, 0,024 em OD) 100 pés | Intramedic, Clay-Adams | 427401 | $ 115,70 |
| Cetamina 100 mg / ml (10 frasco de ml) | Butler | 23061 | $10.00 |
| Xilazina (frasco de 100 ml) | Vedco | 24105 | $20.00 |
| Isoflurano (frasco de 250 ml) | $15.00 | ||
| Brometo de vecurônio 10 mg/10 ml | Pfizer | NDC 0069-0094-01 | $15.00 |
Referências
- Rockman, H. A., et al. Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy. Proc. natl. Acad. Sci. U.S.A. 88, 8277-8281 (1991).
- Watanabe, A., Hashimoto, Y., Ochiai, E., Sato, A., Kamei, K.
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Reimpressões e permissões
