Isquemia Photothrombotic: Um Modelo de lesão cortical fotoquímica Minimamente Invasiva e reprodutível para mouse Estudos curso

Resumo

Fototrombose é uma técnica rápida, minimamente invasiva para induzir pequena e bem delimitada infarto em áreas de interesse de maneira altamente reprodutível. É particularmente adequado para o estudo de respostas celulares e moleculares subjacentes plasticidade cerebral em ratinhos transgénicos.

Resumo

O modelo de acidente vascular cerebral photothrombotic visa induzir um dano isquêmico dentro de uma determinada área cortical, por meio de foto-ativação de um corante sensível à luz anteriormente injetado. Após iluminação, o corante é activado e produz oxigénio singuleto que danifica os componentes das membranas das células endoteliais, com subsequente agregação de plaquetas e formação de trombos, a qual, eventualmente, determina a interrupção do fluxo sanguíneo local. Esta abordagem, inicialmente proposto por Rosenblum e El-Sabban em 1977, foi posteriormente melhorado por Watson em 1985, em cérebro de rato e definir a base do modelo atual. Além disso, o aumento da disponibilidade de linhas de camundongos transgênicos contribuiu ainda mais para aumentar o interesse no modelo fototrombose. Resumidamente, um corante fotossensível (Rosa de Bengala) é injectado intraperitonealmente e entra na corrente sanguínea. Quando iluminada por uma fonte de luz fria, o corante torna-se activada e induz lesão endotelial com a activação de plaquetas e trombose, resultando em locaisinterrupção do fluxo sanguíneo. A fonte de luz pode ser aplicada sobre o crânio intactos, sem necessidade de craniotomia, o que permite direccionamento de qualquer área cortical de interesse de uma forma reprodutível e não-invasiva. O rato é então suturada e permitiu acordar. A avaliação do dano isquémico pode ser rapidamente realizada por cloreto de trifenil-tetrazólio e de coloração com violeta cresil. Esta técnica produz enfarte de pequena dimensão e aos limites bem delimitadas, o que é altamente vantajosa para a caracterização de células precisas ou estudos funcionais. Além disso, é particularmente adequado para estudar as respostas celulares e moleculares subjacentes plasticidade cerebral em ratinhos transgénicos.

Introdução

No início do século 21, acidente vascular cerebral isquêmico é uma doença devastadora que representa a segunda causa de incapacidade a longo prazo e ^uma a segunda causa de mortalidade no mundo, no qual AVC foi responsável por aproximadamente 5,7 milhões de mortes em 2004 ^2. Apesar dos muitos esforços que foram colocadas em, ainda não existe um tratamento eficaz disponível para melhorar a recuperação funcional após o acidente vascular cerebral. Os modelos animais de acidente vascular cerebral são amplamente utilizados no campo da pesquisa do curso, pois permitem a modelagem da patofisiologia da lesão isquémica e testar a eficácia de diferentes es....

Protocolo

1. Pré-cirurgia

1. Pesar Rose Bengal em um tubo de 1,5 ml e dissolvem-se em solução salina estéril até atingir uma concentração final de 15 mg / ml. Filtrar através de um filtro de esterilização de 0,2 um e armazenar no escuro à temperatura ambiente até dois meses.
2. Esterilizar todos os instrumentos cirúrgicos em autoclave. A área cirúrgica deve ser higienizado menos de uma hora antes do início da cirurgia.
3. Anote o peso do corpo do mouse para ajustar a dose de Rosa Bengala para ser injetado. Nós injetado 10 ml / g de peso de animais em mulheres camundongos CD1 12 semanas de idade, no presente protocolo. A quantidade de Rosa de Bengala neces....

Resultados

Este protocolo irá produzir uma lesão cortical que já é visível após dissecação do córtex para o olho nu (Figuras 1A-1C). A lesão photothrombotic desenvolve em superficiais e profundas camadas corticais em que o tecido é suficientemente transparente para permitir a foto-ativação da Rosa Bengala. Medição do grau de enfarte cerebral pode ser realizada rapidamente através de coloração histológica com cloreto de trifenil-tetrazólio (TTC) em tecido fresco ou de violeta cresil, após fixação em 4% de paraforma.......

Discussão

As modificações e substituições

Por causa de seu pico de absorção em 562 nm, um laser de luz verde de uma lâmpada de arco de xenônio filtrada foi originalmente escolhido para irradiar o fotossensível Rosa Bengala. Apesar da excitação do laser ainda mediada recently5 foi utilizado, pode ser substituída pela lâmpada de luz fria também assegurar excitação corante ^10,15. Fibras ópticas de luz fria são mais fáceis de manipular e menos dispendiosa do que as fontes de laser. No entanto, dev.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Soluções e produtos químicos
Rose Bengal	Sigma, Itália	330000
Isoflurano Vet	Merial	103120022
Betadine	Asta Medica
Paraformaldeído	Sigma-Aldrich	158127
Material e equipamento cirúrgico
Fluosorber Filtro	Havard aparelho	340415
150W iluminador de fibra óptica	Fotônico	PL3000
Controlador de Temperatura para Placa TCAT-2DF	Aparelho Havard	727561
Instrumento Estereotáxico	Stoelting	51950
Microscópio operacional	Takagi	OM8
Almofada
de oxigênio e gás
	Instrumento		Torneiras de fibra óptica e máscara são feitas sob medida

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