Tumores humanos transplantados em ratos imunodeficientes são ferramentas valiosas para o estudo da biologia do câncer. Protocolos específicos para gerar xenoenxertos subcutâneos e intra-hepáticos a partir de células de carcinoma hepatocelular humano ou fragmentos do tumor são descritos. A regeneração hepática induzida por hepatectomia parcial em ratos destinatário é apresentado como uma estratégia para facilitar o enxerto intra-hepática.
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Artigo de método
Geração de subcutânea e intra-hepática Humanos carcinoma hepatocelular Xenoenxertos em Immunodeficient Ratos
Neste artigo
Resumo
Resumo
In vivo modelos experimentais de carcinoma hepatocelular (HCC) que recapitulam a doença humana fornecer uma plataforma valiosa para a pesquisa em fisiopatologia da doença e para a avaliação pré-clínica de novas terapias. Nós apresentamos uma variedade de métodos para gerar subcutânea ou ortotópicos xenoenxertos de carcinoma hepatocelular humano em ratinhos imunodeficientes que pode ser utilizado em uma variedade de aplicações de pesquisa. Com um foco sobre o uso de tecido do tumor primário de pacientes submetidos à ressecção cirúrgica como ponto de partida, descrevemos a preparação de suspensões de células ou fragmentos tumorais para xeno. Descrevemos as técnicas específicas para estes tecidos de xenoenxerto i) por via subcutânea, ou ii) intrahepatically, quer por implantação directa de células tumorais ou fragmentos para o fígado, ou indirectamente através de injecção de células no baço do rato. Os requerentes também descrevem a utilização de ressecção parcial do fígado nativo do rato na altura do xeno-enxerto como uma estratégia parainduzir um estado de regeneração hepática ativa no rato destinatário que pode facilitar o enxerto intra-hepática de células tumorais humanas primárias. Os resultados esperados destas técnicas são ilustradas. Os protocolos descritos foram validados utilizando amostras HCC humanos primário e xenotransplantes, que normalmente executam menos robusta do que as linhas de células de carcinoma hepatocelular humano bem estabelecidas que são amplamente utilizados e freqüentemente citados na literatura. Em comparação com linhagens de células, discutimos os fatores que podem contribuir para a relativamente baixa chance de enxerto HCC primário em modelos de xenotransplante e comentar sobre as questões técnicas que podem influenciar a cinética de crescimento de xenotransplante. Sugerimos também os métodos que devem ser aplicados para garantir que xenografts obtidos assemelham-se com precisão os tecidos HCC-pai.
Introdução
O carcinoma hepatocelular (HCC) é o quinto tipo de câncer mais comum no mundo eo mais rapidamente crescente causa de morte por câncer na América do Norte. O fator de risco mais prevalente para HCC é a cirrose hepática, ocorrendo com mais freqüência devido a hepatite crônica viral, abuso de álcool, doença auto-imune, ou distúrbios metabólicos hereditários 1.
Apesar da carga de doença pesada imposta pelo HCC em populações em todo o mundo, a fisiopatologia da HCC é relativamente mal entendido em comparação a outros cânceres comuns como colorretal, de mama ou câncer de próstata. Por exemplo, os eventos moleculares e celulares espec....
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Protocolo
Uma visão geral esquemática do protocolo é apresentado na Figura 1.
1. Processamento das Amostras HCC Humano
Obter espécimes HCC humana primárias com o consentimento do paciente por escrito e com a aprovação do conselho de ética em pesquisa institucional. Estes protocolos têm sido realizados em nossa instituição com a aprovação do Conselho de Ética de Pesquisa University Health Network, em conformidade com todas as diretrizes institucionais, nacionais e internacionais para o bem-estar humano.
Coletar amostras de CHC frescos o mais rápido possível após o procedimento ....
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Resultados
A Figura 3 demonstra a aparência típica de um xenoenxerto de carcinoma hepatocelular humano por via subcutânea e a aparência histopatológica correspondente do tumor. O desenvolvimento e o crescimento de xenoenxertos subcutâneos pode ser prontamente monitorizada por análise diária de ratos receptores. O intervalo de tempo entre xeno e desenvolvimento de um tumor pode variar muito, dependendo do tipo de tecido (fragmento do tumor vs suspensão de células), a fonte de tecido (amostra primária paciente, xeno.......
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Discussão
Nós descrevemos uma variedade de técnicas para estabelecer subcutânea e intra xenoenxertos de carcinoma hepatocelular humano em ratinhos imunodeficientes que pode ser aplicado a uma ampla variedade de questões experimentais e ensaios. Enquanto xenoenxertos subcutâneos têm sido amplamente utilizados para o estudo de vários aspectos da biologia HCC, xenoenxertos intra raramente são descritos na literatura. Além disso, a maioria dos estudos que descrevem a utilização de xenoenxertos geraram estes a partir de linhas celular.......
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Divulgações
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado por uma Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde Fase 1 Clínico-Scientist Award (AG) de e uma subvenção de funcionamento da Sociedade de Pesquisa do Câncer (AG). Os autores agradecem ao Dr. John Dick por seu apoio a este projeto.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Dulbecco’ s Mod. Eagle Medium/Ham’ s F12 50/50 Mix x1 (DMEM-F12) | WISENT Bioproducts | 319-075-CL | |
| Colagenase TypeIV | Sigma-Aldrich | C5138 | |
| Dispase II | Stemcell Technologies | 7923 | |
| Matriz Matrigel | Becton-Dickinson Biosciences | 354234 | |
| Solução de formalina tamponada a 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 0,9 | |
| % de solução salina Solução (NaCl), estéril | Marca da casa | 1011-L8001 | |
| Esfoliante cirúrgico Betadine | Purdue Pharma | NPN 00158313 | |
| Buprenorfina (Temegesic) NR 0,3 mg/ml | Reckitt Benckiser | ||
| Isoflurano USP, 99,9%, anestésico inalatório | Pharmaceutical Partners of Canada Inc. | M60302 | |
| Tear-Gel | Novartis Pharmaceuticals | ||
| Composto de seção congelada | VWR | 95057-838 | |
| Criomolde, Tecido -Tek | Sakura Finetek | 4566 | |
| Agulha de deslizamento de precisão 18G 1 ½ | de Precisão 305196 | da Becton-Dickinson Biosciences | |
| 27G ½ | 305109 | da Becton-Dickinson Biosciences | |
| , 3/10 cc U-100, 29G½ | Becton-Dickinson Biosciences | 309301 | |
| lâmina cirúrgica No.10 | Feather Safety Razor Co. | 08-916-5A | |
| #5-0 Sutura cirúrgica de seda macia, agulha de ponta cônica de 3/8" | Syneture | VS-880 | |
| Fita cirúrgica Transpore | 3M Health care | 1577-1 | |
| Aplicador de algodão | Medpro | 018-425 | |
| Surgicel, celulose regenerada oxidada | Ethicon | 1951 | |
| Filtro de células 100 μ m nylon | Becton-Dickinson Biosciences | 352360 | |
| Iluminação de ampliação com base móvel | Benson medical Industries Inc. | modelo: RLM-CLT-120V | |
| Petridish estéril 100x20 mm | Sarstedt | 821474 | |
| Pinça de tecido, 1x2 dentes, 4-1/2" | Almedic | A10-302 | |
| Pinça de curativo Adson 4-3/4" | Almedic | A10-220 | |
| Pinça de curativo para os olhos, serrilhada, reta, 4" | Almedic | A19-560 | |
| Pinça hemostática Hartman, curva, Tesoura | Almedic | A12-142 | |
| ", curva, tesoura de íris | Almedic | A8-690 | |
| 4", reta, chave | Almedic | A8-684 | |
| Almedic | A17-228 | 5-1/2 |
Referências
- El-Serag, H. B. Hepatocellular carcinoma. N. Engl. J. Med. 365, 1118-1127 (2011).
- Li, Y., Tang, Z. Y., Hou, J. X. Hepatocellular carcinoma: insight from animal models. Nat. Rev. Gastroenterol Hepatol. 9, 32-43 (2012).
- Tateishi, R., Omata, M.
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Reimpressões e permissões
