Uma correção foi feita em Protocolos de Preparação de Espécimes, Imagem e Análise para Microscopia de Varredura com Borda de Faca. O protocolo de coloração de Nissl foi modificado a partir de:
2. Preparação do espécime: Nissl
- O camundongo é profundamente anestesiado usando quetamina e xilazina injetadas por via intraperitoneal e, em seguida, perfundido transcardialmente com 50 mL de solução salina tamponada com fosfato em temperatura ambiente (pH 7,4), seguido por 250 mL de formalina tamponada neutra a 10% em temperatura ambiente (pH 7,4) e, finalmente, com 3,0 cm³ de tinta da China não diluída.
- A perfusão de todo o corpo com solução salina e fixador é necessária para remover o sangue do sistema cardiovascular e fixar os tecidos. A perfusão com tinta da China é necessária para preencher completamente a vasculatura do sistema cardiovascular.
- O cérebro resultante é então desidratado por meio de uma série de álcoois etílicos em concentrações crescentes (25%{}-100%) e posteriormente embutido em plástico araldite, seguindo o protocolo descrito nos itens 1.8-1.9 acima. Se o meio de inclusão for LR branco, segue-se o protocolo descrito no item 1.10 acima.
- O camundongo é profundamente anestesiado usando quetamina e xilazina injetadas por via intraperitoneal e, em seguida, perfundido transcardialmente com 50 mL de solução salina tamponada com fosfato em temperatura ambiente (pH 7,4), seguido por 250 mL de formalina tamponada neutra a 10% em temperatura ambiente (pH 7,4) e, finalmente, com 3,0 cm³ de tinta da China não diluída.
- A perfusão de todo o corpo com solução salina e fixador é necessária para remover o sangue do sistema cardiovascular e fixar os tecidos. A perfusão com tinta da China é necessária para preencher completamente a vasculatura do sistema cardiovascular.
- O cérebro resultante é então desidratado por meio de uma série de álcoois etílicos em concentrações crescentes (25%{}-100%) e posteriormente embutido em plástico araldite, seguindo o protocolo descrito nos itens 1.8-1.9 acima. Se o meio de inclusão for LR branco, segue-se o protocolo descrito no item 1.10 acima.
- O camundongo é profundamente anestesiado usando quetamina e xilazina injetadas por via intraperitoneal e, em seguida, perfundido transcardialmente com 50 mL de solução salina tamponada com fosfato em temperatura ambiente (pH 7,4), seguido por 250 mL de formalina tamponada neutra a 10% em temperatura ambiente (pH 7,4) e, finalmente, com 3,0 cm³ de tinta da China não diluída.
- A perfusão de todo o corpo com solução salina e fixador é necessária para remover o sangue do sistema cardiovascular e fixar os tecidos. A perfusão com tinta da China é necessária para preencher completamente a vasculatura do sistema cardiovascular.
- O cérebro resultante é então desidratado por meio de uma série de álcoois etílicos em concentrações crescentes (25%{}-100%) e posteriormente embutido em plástico araldite, seguindo o protocolo descrito nos itens 1.8-1.9 acima. Se o meio de inclusão for LR branco, segue-se o protocolo descrito no item 1.10 acima.
para:
2. Preparação do espécime: Nissl
- Este protocolo segue de perto o protocolo de Mayerich et al.7
- O camundongo é profundamente anestesiado usando quetamina e xilazina injetadas por via intraperitoneal e, em seguida, é realizada perfusão transcardial com 50 mL de solução salina tamponada com fosfato em temperatura ambiente (pH 7,4), seguida por 250 mL de paraformaldeído a 4% tamponado com fosfato e frio (pH 7,4).
- Em seguida, o camundongo é perfundido com 100 mL de uma solução de corante de tionina a 0,1% em água desionizada, e o corpo é colocado na geladeira (4 °C) por 24 horas.
- Após 24 horas, o cérebro é removido da calvária e colocado em uma solução fresca de tionina a 0,1%, permanecendo a 4 °C por 7 dias. A longa duração deste procedimento teve como objetivo garantir a completa infiltração da tionina na preparação em bloco.
- Em seguida, o cérebro é descorado e desidratado por meio de uma série crescente de etanóis, iniciando com etanol a 50% em água e aumentando até etanol a 100% ao longo de um período de 6 semanas. As mudanças de etanol de 50% para 70% são armazenadas na geladeira (4 °C) e todas as trocas de etanol acima de 70% são armazenadas em temperatura ambiente.
- Após três trocas de acetona (2 a 4 dias em cada solução em temperatura ambiente), o cérebro é então embutido em plástico araldite seguindo o protocolo descrito nos itens 1.8-1.9 acima. Se o meio de inclusão for LR white, segue-se o protocolo descrito no item 1.10 acima.