O ultrassom transabdominal é descrito como um meio eficaz e não invasivo para avaliar o estado reprodutivo no cervo muntjac de Reeves. Esses métodos podem ser utilizados para alcançar o diagnóstico precoce da gravidez e avaliar a viabilidade fetal. As aplicações futuras desta técnica incluem a estimativa da idade gestacional e os efeitos da doença materna no desenvolvimento fetal.
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Ultrassom transabdominal para diagnóstico de gravidez no Cervo Muntjac de Reeves
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Resumo
Resumo
O deer muntjac de Reeves (Muntiacus reevesi) é uma pequena espécie cervid nativa do sudeste da Ásia, e atualmente está sendo investigada como um modelo potencial de transmissão da doença de prípcional e patogênese. A transmissão vertical é uma área de interesse entre pesquisadores que estudam doenças infecciosas, incluindo a doença de príptica, e essas investigações exigem métodos eficientes para avaliar os efeitos da infecção materna no desempenho reprodutivo. O exame ultrasonográfico é uma ferramenta bem estabelecida para diagnosticar a gravidez e avaliar a saúde fetal em muitas espécies animais1-7, incluindo várias espécies de cervidscultivados 8-19, no entanto essa técnica não foi descrita no veado muntjac de Reeves. Aqui descrevemos a aplicação de ultrassom transabdominal para detectar a gravidez em muntjac faz e avaliar o crescimento e desenvolvimento fetal ao longo do período gestacional. Com esse procedimento, os animais gestantes foram identificados até 35 dias após o emparelhamento doe-buck e este foi um meio eficaz para monitorar a gravidez com segurança em intervalos regulares. Os objetivos futuros deste trabalho incluirão o estabelecimento de referências normais de medição fetal para estimativa da idade gestacional, determinação da sensibilidade e especificidade da técnica para o diagnóstico da gravidez em vários estágios da gestação e identificação de variações no crescimento e desenvolvimento fetal em diferentes condições experimentais.
Introdução
O exame ultrasonográfico é um método bem descrito de diagnóstico de gravidez em bovinos1, ovinos2,3, cabras4,cavalos5, animaiscompanheiros 6,7e outras espécies animais domésticos. Esta modalidade de imagem também foi identificada como uma ferramenta valiosa para a detecção da gravidez e a estimativa da idade fetal em várias espécies de cervids cativos, incluindo veadosfallow 8-11, veado vermelho12-16, veado de ika hokkaido17e rena18,19. Em muitos casos, a ultrassonografia tem produzido taxas de precisão mais altas do que outros mecanismos de detecção da gravidez, como progesterona sémum ou análise de glicoproteína associada à gravidez9,18. Além disso, a visualização ultrasonográfica do trato reprodutivo pode fornecer informações adicionais sobre viabilidade fetal, idade gestacional e identificação de anormalidades no desenvolvimento que de outra forma seriam difíceis de avaliar. A utilidade da ultrassonografia para avaliação do estado reprodutivo sugere que essa metodologia deve ser adaptada a outras espécies nas quais são utilizados programas de reprodução ativa.
O cervo muntjac de Reeves(Muntiacus reevesi)é uma pequena espécie cervid nativa do sudeste da Ásia20. Embora o ciclo reprodutivo desses animais não seja bem caracterizado em seus territórios nativos, estudos de populações selvagens em partes do sul da Inglaterra melhoraram a compreensão de seus padrões de reprodução20. Ao contrário da maioria dos cervids, o muntjac de Reeves parece procriar o ano todo, sem picos aparentes de fawning sazonal20-22. Muntjac fêmea tipicamente dá à luz um único fawn após um período de gestação de 210 dias, e entra de forma confiável em um estrus pós-parto dentro de 24 horas20-22. Será que isso não concebe durante este período pós-parto retornará a estrus aproximadamente 24-25 dias depois20. Em situações cativas, a reprodução é tipicamente alcançada por moradias com um ou mais homens intactos. Este sistema produz taxas de concepção satisfatórias e requer pouca habilidade técnica para o pessoal, porém as datas exatas de reprodução são difíceis, se não impossíveis, de determinar.
Muntjac são comumente usados em estudos citogenéticos devido à ampla gama de números de cromossomo diploides e alta taxa de diversificação karyotípica entre as diferentes espécies23. Esses animais também estão sendo investigados atualmente como modelo de patogênese e transmissão da doença de prígion, com particular interesse colocado no estudo da transmissão vertical da doença de desomânudo crônico (CWD) em cervids. A importância do muntjac em várias aplicações de pesquisa diferentes sugere que tecnologias reprodutivas aprimoradas devem ser estabelecidas para complementar os procedimentos investigativos atuais. Especificamente, mecanismos não invasivos para avaliar o período gestacional poderiam potencialmente elucidar variações críticas no desempenho reprodutivo e no crescimento e desenvolvimento fetal em diferentes condições experimentais. Além disso, o desenvolvimento de referências de medição fetal em tempo real seria potencialmente valioso na estimativa da idade gestacional em situações em que as datas de reprodução não podem ser determinadas. Estudos anteriores descreveram mecanismos para o uso de medidas fetais, como comprimento de alcatra -coroa (CRL), profundidade torácica (CD) e comprimento da cabeça (HL) para estimar o estágio aproximado da gestação nas espécies cervid11-14, 16,17. Além disso, alguns desses estudos também estabeleceram diretrizes descrevendo quando marcos específicos do desenvolvimento, como a mineralização esquelética ou batimentos cardíacos fetais, podem ser identificados8-19. Embora esses dados possam ser úteis para ajudar a orientar a análise de ultrassom reprodutivo no muntjac, a maioria das outras espécies cervidas estudadas têm tamanho corporal muito maior e períodos gestacionais mais longos, reduzindo o valor translacional desses estudos para aplicações de muntjac.
O protocolo aqui descrito descreve a ultrassonografia transabdominal do muntjac feminino para fins de diagnóstico e monitoramento da gravidez. A execução bem-sucedida deste protocolo pode facilitar a detecção precoce da gravidez e a avaliação do crescimento e desenvolvimento fetal. Esta técnica possui aplicações valiosas na condução de estudos que investigam a reprodução, no desenvolvimento do útero, ou transmissão vertical de doenças infecciosas em um pequeno modelo cervid e também pode ser útil para fins clínicos em operações de reprodução em cativeiro.
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Protocolo
1. Preparação Processual
Todos os procedimentos animais descritos foram revisados e aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade estadual do Colorado, uma Associação de Avaliação e Acreditação de Cuidados Animais Laboratoriais (AAALAC), instituição credenciada pela Intl.
- Antes do exame, imobilize os animais usando protocolos adequados de sedação ou anestesia para proporcionar relaxamento e permitir o posicionamento adequado. Um manipulador restringe o veado enquanto uma segunda pessoa administra a sedação ao animal.
Nota: Os autores encontraram a seguinte combinação para fornecer sedação eficaz nesta espécie: butorphanol (0,45 mg/kg), azaperona (0,035 mg/kg) e medetomidina (0,04 mg/kg), administrada intramuscularmente nos músculos glúteos. - Uma vez que a doe tenha atingido um plano de sedação que permite o manuseio compatível, posicione-a em uma recumbência dorsal ou lateral em uma mesa de exame ou dentro de um cocho V. Eleve ligeiramente a cabeça, pescoço e tórax (aproximadamente 20-30°) para reduzir o risco de regurgitação e aspiração de conteúdo rumenal e facilitar a ventilação adequada durante o procedimento.
Nota: Na maioria dos cervids ou outras espécies ruminantes, o ultrassom abdominal é realizado em animais em pé; no entanto, o pequeno tamanho e considerações comportamentais desta espécie requer sedação pesada para exame e posicionamento severo é, portanto, mais difícil e pode impedir uma técnica de imagem eficaz. Posicionar o animal no meio do caminho entre a recumência severa e lateral pode ser ideal para reduzir o risco de regurgitação e hipoventilação e deve ser considerado, se possível. Em qualquer posição recumbente, é fundamental monitorar cuidadosamente as respirações dos animais e parar imediatamente o exame e colocar o animal em recumbência severa se for notada regurgitação ou hipoventilação. - Se necessário, corte os cabelos da área do abdômen a serem examinados para obter o contato adequado entre a pegada do transdutor e a pele.
Nota: No início da gestação, evidências de gravidez podem ser detectadas no abdômen caudal perto das glândulas mamárias. Esta região do muntjac é tipicamente sem pelos e, portanto, a barba pode não ser indicada neste momento. À medida que o feto cresce e o útero distendência para ocupar uma posição mais craniana no abdômen, o recorte do cabelo será necessário antes da imagem. Deve-se tomar cuidado para evitar causar qualquer trauma mecânico na pele, incluindo lacerações de lâminas de barbear ou lesões térmicas de cortadores elétricos. - Posicione a unidade de ultrassom em um local que permita ao técnico visualizar facilmente o monitor durante a realização do exame com sua mão dominante. Insira informações de identificação animal (nome, número de identificação, etc.) no sistema para rotular automaticamente imagens salvas e loops de vídeo.
2. Exame de Ultrassom Reprodutivo Transabdominal
- Aplique uma quantidade generosa de gel de acoplamento acústico no abdômen caudal.
- Coloque um transdutor linear curvo de 5-10 MHz na pele do abdômen caudal, imediatamente craniano para o púbis, e mova-o lentamente em uma direção craniana para avaliar as estruturas dentro da cavidade pélvica. Escaneie os quadrantes esquerdo e direito do abdômen caudal para avaliar ambos os chifres do útero bicornuato do muntjac.
Nota: O ultrassom abdominal abrangente envolve avaliação de todas as vísceras abdominais, incluindo fígado, rins, baço, trato gastrointestinal, bexiga urinária e trato reprodutivo. Para efeitos deste protocolo, somente o exame da gravidez será discutido detalhadamente; no entanto, o aparecimento normal de outros órgãos abdominais caudais deve ser reconhecido, pois essas estruturas provavelmente serão encontradas durante o curso do estudo. Os órgãos mais comumente vistos neste local incluem segmentos do trato gastrointestinal, da bexiga urinária e do trato reprodutivo. Os intestinos grosso e pequeno são identificados pela aparência caracteristicamente em camadas da parede intestinal. O lúmen pode ou não ser pronunciado dependendo do tipo e quantidade de conteúdo, que pode incluir partículas fluidas, gasas, mucosas ou alimentares. A bexiga urinária pode ser difícil de identificar a menos que distendida com urina, e as camadas da parede da bexiga são significativamente menos distintas do que as dos intestinos. Além do útero, os ovários também podem ser encontrados no ultrassom do trato reprodutivo do muntjac feminino. Os ovários aparecerão como estruturas vazias perto do polo caudal dos rins, e sua aparência pode mudar ao longo do ciclo estrous. A presença de múltiplos folículos maduros e cheios de fluidos dentro do córtex é sugestiva de estrus.
Nota: Ao girar e/ou "abanar" a cabeça de digitalização do transdutor, as estruturas podem ser avaliadas em planos transversais ou sagitos.- Se necessário para diferenciar um útero gravid da bexiga urinária, esvazie a bexiga manualmente aplicando pressão suave no abdômen caudal ou colocando um cateter urinário e repetindo o exame.
Nota: A expressão manual da bexiga só deve ser tentada quando o animal estiver em posição severa ou vertical, o que facilita uma orientação mais natural das vísceras abdominais e reduz o risco de trauma para outras estruturas. O útero também pode ser diferenciado da bexiga urinária, avaliando a espessura da parede do órgão. A espessura típica de uma bexiga moderadamente distendida é de aproximadamente 1,4 mm24,enquanto os autores descobriram que a parede mais muscular do útero gravid no muntjac geralmente mede entre 7-8 mm.
Nota: A gravidez precoce é difícil de diagnosticar definitivamente devido à falta de estruturas fetais identificáveis, e de fato a primeira indicação de gravidez pode ser simplesmente um pequeno bolso fluido no abdômen caudal. Se visto neste momento, o embrião em desenvolvimento aparecerá como uma estrutura hiperecóica, ovalicada à amorfa dentro do útero(Figura 1).
- Se necessário para diferenciar um útero gravid da bexiga urinária, esvazie a bexiga manualmente aplicando pressão suave no abdômen caudal ou colocando um cateter urinário e repetindo o exame.
- Faça ajustes na profundidade, frequência e ganho conforme necessário para melhorar o contraste e os detalhes da imagem.
Nota:frequências mais altas estão associadas a comprimentos de onda mais curtos, necessários para uma melhor resolução de imagem. A maioria dos transdutores são capazes de operar dentro de uma faixa de frequências (por exemplo, 6-10 MHz)24. A frequência pode ser ajustada usando os controles do scanner na unidade de ultrassom, e o aumento da frequência resultará em uma imagem mais clara. O aumento da frequência reduz simultaneamente a profundidade da penetração de ondas sonoras; portanto, a redução da frequência pode ser necessária para visualizar estruturas mais profundas, mas a resolução pode ficar comprometida24. Por essa razão, é importante selecionar a maior frequência possível para alcançar a profundidade do tecido desejada. Os ajustes nos controles de ganho alterarão a amplificação das ondas sonoras que retornam ao transdutor dos tecidos e afetarão o grau de contraste na imagem24. O ganho deve ser ajustado a um ponto onde o contraste ideal entre tecidos hiperecóicos e hipoecóicos é alcançado, e essas configurações podem precisar ser ajustadas dependendo das estruturas que estão sendo imagens.
3. Obtenção de Medidas Fetais
Nota: A idade gestacional em muitas espécies animais domésticas pode ser estimada utilizando faixas de referência estabelecidas para medidas fetais obtidas a partir do exame de ultrassom. As medidas mais utilizadas incluem comprimento reto de alcatra (SCRL), profundidade do peito (CD) e comprimento da cabeça (HL)17. Embora dados suficientes ainda não tenha sido coletados para desenvolver diretrizes de idade gestacional confiáveis no cervo muntjac de Reeves, as medidas podem ser coletadas para começar a estabelecer essas referências. A frequência cardíaca fetal (FHR) tem sido mostrada em outras espécies de cervid e ruminante para aumentar linearmente à medida que a gestação progride até um certo ponto (tipicamente em torno do dia 60 da gestação), momento em que a frequência cardíaca começa a diminuir17. A FHR pode ser usada para estimar a idade gestacional em conjunto com outras observações de ultrassom, porém é mais comumente utilizada como medida de viabilidade fetal17,24. A FHR foi calculada no muntjac de Reeves já em 35 dias após o acasalamento.
- Para medir o SCRL, localize o útero no monitor e faça ajustes finos na posição do transdutor até que se obtenha uma visão sagital de todo o feto(Figuras 2 e 3). Congele a imagem e meça a distância entre o aspecto mais dorsal do crânio e a base do sacro (Figuras 2 e 3).
- Para medir o CD, obtenha uma visão sagital do feto (a mesma imagem pode ser usada para medir SCRL) e meça a distância entre os aspectos dorsal e ventral do tórax (Figuras 2 e 3).
- Para medir a HL, utilizando a mesma visão sagital do feto descrita para as medidas scrl e CD, meça a distância da crista occipital até a base do nariz (Figuras 2 e 3).
- Para calcular a frequência cardíaca fetal, identifique o coração dentro da cavidade torácica do feto visualizando suas contrações rítmicas. Calcule a frequência cardíaca contando o número de contrações (batimentos cardíacos) que ocorrem dentro de um período de 1 minuto de tempo.
Nota: Se a unidade de ultrassom que está sendo usada tiver recursos do Doppler, esse recurso poderá ser empregado para ajudar ainda mais a distinguir o coração de outros movimentos fetais não específicos. - Verifique se todas as imagens salvas e loops de vídeo incluem todas as informações de identificação necessárias, incluindo nome ou número de animais, data, medidas e etiquetas de estrutura apropriadas.
4. Conclusões e Recuperação Processual
- Remova todo o gel de contato de ultrassom residual do abdômen do animal usando um pano macio ou toalhas de papel. Limpe o gel do transdutor antes do armazenamento.
- Se utilizar o protocolo de sedação descrito na etapa 1.1, administre atipamezole subcutânea em uma dose de 0,25 mg/kg para reverter os efeitos da medetomidina. Se usar um protocolo de sedação diferente no qual um antagonista está disponível, administre este agente ao animal de acordo com doses publicadas na conclusão do procedimento para acelerar a recuperação.
- Coloque o muntjac em uma superfície de cama macia em recumbência popal, com a cabeça ligeiramente elevada para reduzir o risco de regurgitação e aspiração de conteúdo rumenal. Monitore o animal de perto até que esteja totalmente recuperado e capaz de ambular ao redor do recinto sem assistência.
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Resultados
Usando o protocolo descrito aqui, a gravidez pode ser diagnosticada e monitorada no veado muntjac da Reeve com técnicas minimamente invasivas. O ponto de tempo mais antigo que a gravidez poderia ser detectada pelos autores foi de aproximadamente 35 dias após o comportamento observado de acasalamento.
Nos estágios iniciais da gestação, a gravidez foi diagnosticada visualizando um útero cheio de fluidos identificado como um espaço anecóico no abdômen caudal. Dentro do útero, o embrião em desenvo...
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Discussão
Este protocolo descreve a aplicação da ultrassonografia transabdominal para diagnóstico de gravidez no cervo muntjac de Reeves. Consistente com outros estudos de ultrassom, equipamentos adequados e proficiência técnica são imprescindíveis para um exame reprodutivo bem sucedido do doe muntjac. Uma revisão cuidadosa da anatomia básica dos mamíferos, os princípios físicos do ultrassom diagnóstico e a aparência ultrasonográfica típica das vísceras abdominais ajudarão na redução dos diagnósticos equivocados. Além disso, a sel...
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Os autores desejam agradecer a Jeanette Hayes-Klug e Kelly Anderson pela gestão da colônia muntjac, Dr. Alan Young por nos apresentarem ao muntjac e ao Sr. Cleve Tedford da Cervid Solutions Inc. por fornecerem a semente muntjac para este projeto. Este trabalho foi apoiado pela concessão do NIH R01AI093634.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Tartarato de butorfanol (Torbugesic) (0,45 mg / kg) | Fort Dodge Animal Health, Fort Dodge, Iowa | NADA 135-780 | |
| Tartarato de azaperona (0,035 mg / kg) | ZooPharm | ||
| Medetomidina HCl (0,04 mg / kg) | Gel | ||
| Medline, Mundelein, Illinois | MDS092005 | ||
| Cloridrato de atipamezol ( Antisedan) (0,25 mg/kg) | Orion Corporation, Espoo, Finlândia | NADA 141-033 | |
| Cocho em V (opcional) | N/A | N/A | O Animal pode ser apoiado em decúbito dorsal em uma mesa de exame padrão ou outra superfície sem o uso de um cocho em V |
| Tesouras elétricas ou lâminas de barbear para depilação | Oster, McMinnville, Tennessee | 78005-140 | |
| Sistema de ultrassom: Ultrassom portátil Ibex Pro | E.I. Medical Imaging, Loveland, CO | Transdutor Ibex Pro | |
| 5-10 MHz: CL3.8 5-2.5 MHz 60 mm matriz linear curva | E.I. Medical Imaging, Loveland, CO | 290420 | |
| Seringas de 3 ml | Covidien | 1.18E+09 | |
| 22 G agulhas | Covidien | 8.88E+09 |
Referências
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Reimpressões e permissões
