Os animais selvagens são comumente parasitados por uma ampla gama de helmintos. Os quatro principais tipos de helmintos são "lombrigas" (nematóides), "vermes de cabeça espinhosa" (acantocéfalos), "vermes" (trematódeos) e "tênias" (cestóides). Aqui descrevemos como os helmintos são coletados de um animal vertebrado e como eles são preservados e taxonomicamente identificados.
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Artigo de método
Coleta e identificação de helmintos da vida selvagem
Neste artigo
Resumo
Resumo
Animais selvagens são comumente parasitados por uma ampla gama de helmintos. Os quatro principais tipos de helmintos são "lombrigas" (nematóides), "vermes de cabeça espinhosa" (acantocéfalos), "vermes" (trematódeos) e "tênias" (cestóides). O método ideal para coletar helmintos é examinar um hospedeiro que está morto há menos de 4-6 horas, já que a maioria dos helmintos ainda estará viva. Uma necropsia completa deve ser realizada e todos os principais órgãos examinados. Os órgãos são lavados sobre uma peneira de 106 μm em água corrente e o conteúdo examinado em um microscópio estereoscópico. Todos os helmintos são contados e um número representativo é fixado (em etanol a 70%, formalina tamponada a 10% ou álcool-formalina-ácido acético). Para a identificação das espécies, os helmintos são eliminados em lactofenol (nematóides e pequenos acantocéfalos) ou corados (trematódeos, cestóides e grandes acantocéfalos) usando hematoxilina de Harris ou carmim de Semichon. Os helmintos são ligados às espécies examinando diferentes estruturas (por exemplo, espículas masculinas em nematóides ou o rostelo em cestóides). Os protocolos descritos aqui podem ser aplicados a qualquer animal vertebrado. Eles exigem alguma experiência no reconhecimento dos diferentes órgãos e na capacidade de diferenciar helmintos de outros detritos teciduais ou conteúdos intestinais. Coleta, preservação e coloração são técnicas simples que requerem equipamentos e reagentes mínimos. A identificação taxonômica, especialmente para espécies, pode ser muito demorada e pode exigir a submissão de espécimes a um especialista ou análise de DNA.
Introdução
Os vertebrados são parasitados por quatro grupos principais de helmintos (vermes). Dois dos grupos, trematódeos, ou vermes, e cestóides, ou tênias, se enquadram no filo Platyhelminthes. Os outros dois grupos são os nematóides, ou lombrigas, (Nematoda) e os acantocéfalos, ou vermes de cabeça espinhosa (Acanthocephala). Muitos desses parasitas têm sido documentados como causas de morbidade e mortalidade em aves e mamíferos silvestres1,2.
A maioria dos helmintos tem ciclos de vida complexos envolvendo mais de um hospedeiro1,2 . Por exemplo, os trematódeos têm um ou dois hospedeiros intermediários (geralmente invertebrados....
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Protocolo
Os animais usados nos experimentos a seguir foram encontrados mortos como atropelamentos.
1. Necropsia Animal e Triagem de Órgãos Principais para Coleta de Helmintos
- Posicione o animal em uma superfície plana e examine todas as aberturas externas, incluindo orelhas, cavidade oral e olhos com uma lupa quanto à presença de nematóides (redondos) e trematódeos (planos e não segmentados) (ver Figura 1).
- Se estiver trabalhando com pássaros, lave com água da torneira para umedecer as penas antes de dissecar.
- Usando uma lâmina afiada ou faca e com o auxílio de um par de pinças de dissecação, faça uma....
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Resultados
Utilizando os métodos descritos acima, foi realizada uma pesquisa sobre os helmintos da musaranha-mascarada, Sorex cinereus, no condado de Missoula, Montana, entre 2007 e 2011. Um total de 56 musaranhas foi coletado em armadilhas de queda e examinado dentro de 2 horas após a morte. A prevalência geral de infecção foi de 96%; apenas 2 musaranhas estavam livres de parasitas. Quinze espécies de helmintos foram identificadas, incluindo 9 espécies de cestódeos e 6 espécies de nematódeos. Uma espécie do gênero de cest.......
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Discussão
É extremamente difícil identificar parasitas helmínticos, mesmo para gênero, com base em material pobre. Cestóides e trematódeos, em particular, tendem a morrer e se deteriorar rapidamente após a morte do hospedeiro. A taxonomia dos cestóides depende muito do número, tamanho e forma dos ganchos rostelares, que muitas vezes se perdem no material congelado. O mesmo se aplica a certos trematódeos com espinhos ao redor da ventosa oral, como equinostomas e heterofídeos, que também são freqüentemente perdidos. Por causa de sua.......
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Divulgações
Não temos nada a divulgar
Agradecimentos
Os autores gostariam de agradecer ao Dr. Joe N. Caudell, biólogo de doenças do Programa de Serviços de Vida Selvagem APHIS do USDA de Indiana na Universidade de Purdue, por fornecer espécimes usados para a coleta de helmintos para a produção deste vídeo. Jennifer Serafin preparou todas as soluções químicas.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Fixação | |||
| Álcool-Formalina-Ácido Acético (AFA) | Fisher Scientific | A407-1 (etanol) F75F-1GAL (formaldeído) BP2401500 (ácido acético glacial) | Etanol 85% (85 ml) + formaldeído 37% (10 ml) + ácido acético glacial (5 ml) |
| Etanol para abate e preservação a longo prazo | Fisher Scientific | A407-1 | Etanol 100% (70 ml) + água destilada (30 ml) |
| Etanol para fixação e estudos de DNA | Fisher Scientific | AC61511-0010 | Etanol 80-90% (80-90 ml) + água destilada (20-10 ml), respectivamente |
| Tamponado com formalina | Fisher Scientific | SF100-4 | Formalina 10% (10 ml) + água destilada (90 ml) |
| Glicerina-álcool | Fisher Scientific | A407-1 (etanol) AC15365-1000 (glicerina) | Etanol 70% (95 ml) + glicerina (5 ml) |
| Limpeza, coloração e montagem | |||
| Etanol para desidratação durante a coloração | Fisher Scientific | A407-1 | Etanol 80%, 95%, 100% (80 ml, 95 ml, 100 ml) + água destilada (20 ml, 5 ml, 0 ml) |
| Lactofenol | Fisher Scientific | R400-27-Fenol | |
| Fisher Scientific | A931I-1 (fenol) A407-1 (etanol) | Fenol 100% (80 ml) + etanol 100% (20 ml) | |
| Harris' Hematoxilina | Fisher Scientific | S25347 (hematoxilina) A407-1 (etanol) A567-500 (sulfato de alumínio e amônio) S25553 (iodato de sódio) | Hematoxilina (5 g) + etanol 100% (50 ml) + sulfato de alumínio e amônio (100 g) + iodato de sódio (0,37 g) + água destilada (1.000 ml) |
| Semichon' s carmim acético | Fisher Scientific | BP2401500 (ácido acético glacial) S25236 (carmim) A407-1 (etanol) | Ácido acético glacial (100 ml) + carmim (1,5 g) + água destilada (100 ml). Aqueça em banho-maria fervente por 15 min e deixe esfriar. Filtre para fazer a solução estoque. Misture 1:2 com álcool 70% para colorir. |
| Xileno | Fisher Scientific | X4-4 | Use apenas sob um exaustor químico. |
| Salicilato de metila | Fisher Scientific | S25437-Etanol | |
| básico | Fisher Scientific | A407-1 (etanol) S25159A (hidróxido de amônio concentrado) | Etanol 70% (100 ml) + hidróxido de amônio (0,1 ml) |
| Ácido etanol | Fisher Scientific | A407-1 (etanol) SA9233-100 (ácido clorídrico) | Etanol 70% (99,5 ml) + ácido clorídrico (0,5 ml) |
| Bálsamo do Canadá | Fisher Scientific | B10-100 | - |
Referências
- Atkinson, C. T., Thomas, N. J. Parasitic Diseases of Wild Birds. Hunter, D. B. , John Wiley & Sons, Blackwell Press. Hoboken, New Jersey, USA. (2009).
- Parasitic Diseases of Wild Mammals. Samuel, W. M., Pybus, M. J., Kocan, A. A. , Second Edition, Iowa State University Press. Ames, Iowa, USA. (2001).
- Yamaguti, S. Parts 1 and 2. The Digenetic Trematodes of Vertebrates.
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Reimpressões e permissões
