A coleta de leite de modelos animais facilita vários caminhos de pesquisa: compreensão da imunidade passiva, identificação de patógenos responsáveis pela transmissão vertical e, por meio do uso de camundongos transgênicos, até mesmo produção comercial de proteínas encontradas no leite materno humano. Aqui ilustramos um método simples para coleta de leite em camundongos e veados muntjac de Reeves.
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Artigo de método
Métodos de coleta de leite para Ratos e Reeves Muntjac cervos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Modelos animais são comumente usados em laboratórios de pesquisa para realizar o que normalmente seria considerado impraticável no hospedeiro nativo de um patógeno. A coleta de leite de animais permite aos cientistas a oportunidade de estudar muitos aspectos da reprodução, incluindo transmissão vertical, imunidade passiva, biologia da glândula mamária e lactação. A obtenção de volumes adequados de leite para esses estudos é uma tarefa desafiadora, especialmente a partir de modelos animais de pequeno porte. Aqui ilustramos um método barato e fácil para coleta de leite em camundongos e veados muntjac de Reeves que não requer equipamento especializado ou treinamento extensivo. Este método específico requer dois pesquisadores: um para extrair o leite e estabilizar o animal, e outro para coletar o leite em um recipiente apropriado de um modelo Muntjac ou de camundongo. O modelo de camundongo também requer o uso de um pipetador P-200 e pontas de pipeta correspondentes. Embora esse método seja de baixo custo e relativamente fácil de executar, os pesquisadores devem ser informados de que a anestesia do animal é necessária para uma coleta ideal do leite.
Introdução
Os modelos animais fornecem informações sobre a patologia da doença que não pode ser adquirida através da análise in vitro. Para obter os resultados mais eficazes, é importante o uso de um modelo animal, que está intimamente relacionado com a doença e da espécie de interesse. Por exemplo, o muntjac Reeves (Muntiacus reevesi), um pequeno cervo asiáticos 1,2 e camundongos transgênicos que expressam a proteína príon cervídeos (CerTgPrP) 3 são modelos animais úteis para as espécies de cervídeos. Ambas as espécies são polyestrous, permitindo reprodução durante todo o ano e, portanto, uma fonte consistente de tecidos e fluidos relaci....
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Protocolo
1. Rato ordenha Protocolo
Os métodos descritos neste protocolo foram aprovados pelo IACUC.
1. Separação da Barragem de Offspring
- Selecione a barragem a ser ordenhadas. Escolha uma barragem com uma ninhada de 4 ou mais filhotes que é de 8-12 dias após o parto para fornecer leite máxima coleção, embora coleção é possível a qualquer momento ponto pós parto até 21 dias.
- Separe a barragem de sua ninhada, pelo menos 2 horas antes da ordenha.
Nota: Caso um desejo de leite mais de uma barragem em um determinado período de tempo, é aceitável para abrigar as barragens separados na mesma gaiola c....
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Resultados
Mouse
A partir de nossas experiências, nós determinamos que é possível recolher cerca de 100-400 mL de leite de um rato de laboratório, dependendo de diversas variáveis. Estas variáveis incluem: 1) a quantidade de tempo reservado para a coleta, 2) a dose de ocitocina administrada, 3) quantos filhotes da barragem é atualmente de enfermagem e 4) o período de tempo após o parto. Os nossos estudos mostraram que o rendimento mais elevado é obtido quando os reservatórios são sep.......
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Discussão
Mouse
Existem vários factores a ter em consideração aquando da recolha de leite de um rato, incluindo 1) a quantidade de tempo reservado para a coleta, 2) a dose de ocitocina administrada, 3) quantos filhotes da barragem é atualmente de enfermagem e 4) a quantidade de tempo que se passou desde o parto, no momento da coleta. Usando estudos anteriores como diretrizes, partimos para otimizar as condições de produção de leite.
Pesquisas anteriores já.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Esses experimentos foram financiados pelo NIH grant #RAI093634A. Expressamos imensa gratidão a Jenny Powers, DVM, PhD, por sua ajuda na ordenha muntjac.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Materiais— Cetamina de camundongo | |||
| (KetaVed 100 mg/ml) (dose: 80-100 mg/kg) | MWI/Vedco | 011075 | |
| Xilazina (TranquiVed 100 mg/ml) (dose: 5-10 mg/kg) | MWI/Vedco | NADA 139236 | |
| Lubrificante ocular | MWI/Apexa | 701013 | |
| Ocitocina (2 UI/kg) | Vet One | 501013 | |
| Materiais— Muntjac | |||
| Midazolam (1-2 mg / kg) | Amerisource Bergen Drug Corp | 924326 | Opcional: o pesquisador pode usar o Midazolam sozinho ou a combinação de BAM como anestésico |
| Tartarato de butorfanol (Torbugesic) (0,45 mg / kg) | Fort Dodge Animal Health | NADA 135-780 | |
| Tartarato de Azaperona (0,25 mg / kg) | ZooPharm | ||
| Medetomadine HCl (0,07 mg / kg) | ZooPharm | ||
| Cloridrato de Antipamezol (Antisedan) (dose: 0,25 mg/kg) | Orion Corporation | NADA 141-033 | |
| Oxitocina (10 UI/kg) | Vet One | 501013 | |
| Equipamento— Mouse | |||
| P-200 Pipetman | Gilson | F123601 | |
| 200 μ l pontas de pipeta | Light Labs | B-2004-SH | |
| Seringas de 1 ml | MWI | 005427 | |
| 27 G agulhas | MWI | 002031 | |
| Equipamento— Tubos cónicos Muntjac | |||
| 15 ml | VWR | 21008-918 | |
| 22 G agulhas | MWI | 873 | |
| seringas luer lock de 3 ml | MWI | 001377 |
Referências
- Dueling, S. Muntiacus reevesi. Animal Diversity Web. , Available from: http://animaldiversity.ummz.umich.edu/accounts/Muntiacus_reevesi (2004).
- Pei, K., Taber, R., O'Gara, B., Wang, Y. Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China. Mammalia. 59
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Reimpressões e permissões
