Intralinfática imunoterapia e vacinação em camundongos

Resumo

Vacinação profilática e terapêutica, muitas vezes não estimulam fortes respostas imunes, devido à semana de drenagem da vacina para os gânglios linfáticos e, consequentemente, fraco envolvimento das células do sistema imunológico. Por injecção directa de vacina para os nódulos linfáticos, assim chamada injecção intralinfática, a eficácia da vacina pode ser fortemente melhorada e as doses de vacina podem ser reduzidos.

Resumo

Vacinas são tipicamente injectado subcutaneamente ou intramuscularmente para estimulação de respostas imunes. O sucesso desta requer drenagem eficiente da vacina para os nódulos linfáticos onde as células apresentadoras de antigénio pode interagir com os linfócitos para a geração das respostas imunitárias desejadas. A força e o tipo de respostas imunitárias induzidas também depender da densidade ou da frequência de interacções bem como o microambiente, especialmente o teor de citocinas. Como apenas uma fração mínima de vacinas perifericamente injetados atinge os gânglios linfáticos, a vacinação de camundongos e humanos foram realizados por injecção directa da vacina em linfonodos inguinais, ou seja, injeção intralinfática. No homem, o procedimento é guiada por ultra-sons. Nos ratos, uma pequena (5-10 mm) incisão é feita na região inguinal de animais anestesiados, o nó de linfa é localizada e imobilizada com uma pinça, e um volume de 10-20 mL da vacina é injectada sob controle visual.A incisão é fechada com um único ponto com suturas cirúrgicas. Os ratinhos foram vacinados com ADN de plasmídeo, ARN, péptidos, proteínas, partículas, e bactérias, bem como adjuvantes, e foi observada forte melhoria da resposta imune contra todos os tipos de vacinas. O método intralinfática da vacinação é especialmente adequada em situações onde a vacinação convencional produz imunidade insuficientes ou quando a quantidade de vacina disponível é limitado.

Introdução

As vacinas são tipicamente injectados por via subcutânea ou intramuscular para a estimulação de respostas imunitárias. O sucesso deste procedimento requer a drenagem eficiente da vacina para os nódulos linfáticos onde as células apresentadoras de antigénio pode interagir com os linfócitos para a geração de t-e as respostas de células-B. Além disso, a força e o tipo de respostas imunitárias induzidas também depender da densidade ou da frequência de tais interacções, bem como o próprio microambiente, especialmente o teor de citocinas. Como apenas uma pequena fração de uma vacina injetada em um tecido periférico atinge um gânglio linfático, a vacinação de camundongos e ....

Protocolo

1. Anestesia dos Ratos

1. Prepare os anestésicos pela mistura de quetamina (anestésico dissociativo) e xilazina (sedativo e analgésico) em salina. As concentrações de cetamina e xilazina na solução final é de 12,5 e 2 mg / ml, respectivamente.
2. Injectar os anestésicos para a ratinhos por via intraperitoneal usando uma seringa com uma agulha G 25-30. Use 0,1 ml/10 g de peso corporal.
3. Aplique uma pomada oftálmica para os olhos dos ratos, a fim de evitar que resseque das córneas.
4. Assegurar que o mouse é suficientemente anestesiados por beliscar o seu pé ou dedo do pé com a pinça. Se o rato não reage com reflexos para o aperto, proced....

Resultados

O procedimento de injeções intralinfática em ratos, apesar da natureza cirúrgica, é direto e relativamente rápido. Uma pessoa treinada pode realizar o procedimento em 3-4 min. A incisão que é fechada com um ponto de cura normalmente dentro de dois dias (Figura 1)

Intralinfática vacinação ou imunização foi realizada com o ARNm, ADN plasmídeo, peptídeos, proteínas, vírus e bactérias. Figura 2 ilustra a produção de anticorpos após a imunização com a proteína a .......

Discussão

Imunização intralinfática e imunoterapia demonstraram ser apropriados para a estimulação de ambas as respostas de anticorpos e respostas de células-T. Como demonstrado neste vídeo-artigo, o procedimento de vacinação é intralinfática um método rápido e fácil para estimular fortes respostas imunitárias em ratinhos. Um cirurgião treinado pode realizar o procedimento durante 3-4 min. A sessão também pode ser compartilhada entre dois cirurgiões onde normalmente é fazer a anestesia ea sutura eo segundo cirurgião está fazendo .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Cetamina (Ketasol-100)	Graeub AG, Suíça		Anestésicos
Xilazina (Rompun)	Bayer, Alemanha		Anestésicos
Viscotears Eye-Gel	Novartis, Suíça		Para evitar que os olhos sequem durante a anestesia.
BD Micro-Fine 0,5 ml	BD Medical, França		29 G Seringas de insulina com agulhas permanentemente fixadas
6-0 Dermalon Monofilament Nylon	Covidien, MA, USA		Para suturas (0,7 métricas, 18 G, 45 cm, Azul)
Pinça curva, 4,5 in	Polymed, Suíça		Para incisão e fixação de linfonodo
Tesoura cirúrgica reta, 4,5 in	Polymed, Suíça		Para incisão
Porta-agulhas, 5,5 em	Polymed, Suíça		Para fechar a incisão com sutura