Descoberta de Novos intracelulares Patógenos por amebas Coculture e Abordagens de amebas de enriquecimento

Resumo

Cocultura amebas é um sistema de cultura de células usando as amebas aderente para crescer selectivamente patogénios intracelulares capazes de resistir as células fagocíticas, tais como amebas e macrófagos. Representa, portanto, uma ferramenta-chave para descobrir novos agentes infecciosos. Enriquecimento amebas permite a descoberta de novas espécies de amebas e das suas bactérias intracelulares específicos.

Resumo

Patógenos intracelulares como legionella, micobactérias e organismos Chlamydia-como são difíceis de isolar, porque eles geralmente crescem pouco ou nada em meios seletivos que são normalmente utilizados para cultivar bactérias. Por esta razão, muitos destes patógenos foram descobertos apenas recentemente, ou na sequência de surtos importantes. Estes patógenos são frequentemente associados com amebas, que servem como-célula hospedeira e permitir a sobrevivência eo crescimento das bactérias. Pretendemos aqui para dar uma demonstração de duas técnicas que permitem o isolamento e caracterização de patógenos intracelulares presentes em amostras clínicas e ambientais: a co-cultura amebas eo enriquecimento amebas. Cocultura amebas permite a recuperação de bactérias intracelulares, inoculando a amostra investigada para um relvado amebas que podem ser infectadas e lisadas por bactérias intracelulares presentes na amostra. Enriquecimento amebas permite a recuperação de amebas presente numa amostra clínica ou ambiental. ThÉ possível levar à descoberta de novas espécies de amebas, mas também de novas bactérias intracelulares crescem especificamente nestas amebas. Juntas, essas duas técnicas ajudam a descobrir novas bactérias intracelulares capazes de crescer em amebas. Devido à sua capacidade para infectar as amebas e resistir a fagocitose, estas bactérias intracelulares também pode escapar a fagocitose pelos macrófagos e, assim, ser patogénico para eucariotas superiores.

Introdução

Antes do advento de diagnóstico molecular, os microrganismos presentes em nichos ambientais ou em amostras clínicas foram frequentemente detectado cultivando-os em diferentes meios selectivos, principalmente em agar em pratos de Petri. O fenótipo das colónias de bactérias e a sua actividade metabólica depois deixada classificação bacteriana ao nível da espécie. Caldo também pode ser usado para aumentar a sensibilidade de detecção. No entanto, ambas as técnicas não permitem a recuperação de bactérias que crescem lentamente ou não em todos nestes meios. Esta é a razão pela qual abordagens moleculares são tão amplamente utilizados hoje em dia. No entanto, a detecção de ....

Protocolo

1. Amebas Coculture

1.1 Preparação da amostra

1. Amostra ambiental
   1. As amostras de água
      Filtra-se a amostra de água (500 ml a 1 litro), por meio de uma membrana de 0,22 de tamanho de poro. Em seguida, agitar a membrana nos ameba salinas PAS médias de página (120 mg de NaCl, 4 mg de _MgSO4 • 7H ₂ O, 4 mg de CaCl ₂ • 2H ₂ O, 142 mg de Na ₂ HPO _4, e 136 mg de KH ₂ PO ₄ em 1 L de água destilada).
   2. As amostras sólidas
      Ressuspender as amostras sólidas como amostras do solo ....

Resultados

Utilizando co-cultura amebas e enriquecimento amebas, toda uma gama de bactérias do ambiente e / ou patogénicos foram descobertos (Tabela 1).

Co-cultura de amebas foi utilizada pelo nosso grupo e outros, para analisar amostras ambientais, estações de tratamento de água e sistemas de distribuição de água. Uma ampla gama de microorganismos pode ser isolado, com esta técnica. As bactérias mais comuns isoladas por co-cultura amebas são membros do gênero Mycobacterium qu.......

Discussão

Co-cultura de amebas e enriquecimento amebas são métodos eficientes que permitiram o isolamento de muitas novas espécies de bactérias e amebas. Os resultados obtidos com estes métodos confirmam a presença ubíqua de ambos amebas e bactérias resistentes ameba do ambiente, e mais interessante em redes de água feitos pelo homem, que são considerados para ser controlada por meio de tratamentos químicos tais como a cloração e ozonização. Co-cultura de amebas e enriquecimento amebas são ferramentas essenciais para isolar e cul.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Glicose monohidratada	Merck, Darmstadt, Alemanha	108342
0,22 μ m membrana de tamanho de poro	Merck Millipore, Darmstadt, Alemanha	SCVPU11RE
peptona de proteose	Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ	211693
extrato de levedura	Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ	212750
Frascos de cultura celular	Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ	353135
Kova slide	Hycor, Indianápolis, IN	87144
microplacas de cultura de células	Corning Inc, Corning, NY	3524
Kit de coloração Diff-Quik	Siemens Healthcare diagn., Munique, Alemanha	130832
Fucsina Ziehl	Fluka, St-Louis, MI	21820
fucsina básica	Sigma, St-Louis, MI	857843
Fenol	Sigma, St-Louis, MI	P1037	Oxalato verde de malaquita corrosivo e mutagênico
	Fluka, St-Louis, MI	63160
Solução de paraformaldeído a 16%	Ciências de Microscopia Eletrônica, Hatfield, PA	15710
Saponina	Sigma, St-Louis, MI	84510