Cecal ligadura e punção induzida Sepsis como um modelo para estudar a autofagia em Ratos

Ilias I. Siempos; Hilaire C. Lam; Yan Ding; Mary E. Choi; Augustine M. K. Choi; Stefan W. Ryter

doi:10.3791/51066

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Artigo de método

Cecal ligadura e punção induzida Sepsis como um modelo para estudar a autofagia em Ratos

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DOI:

10.3791/51066

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9 de fevereiro de 2014

Ilias I. Siempos¹^,³ , Hilaire C. Lam¹ , Yan Ding² , Mary E. Choi² , Augustine M. K. Choi¹ , Stefan W. Ryter¹

¹Department of Medicine, Division of Pulmonary and Critical Care Medicine, Brigham and Women's Hospital, ²Department of Medicine, Renal Division, Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, ³First Department of Critical Care Medicine and Pulmonary Services, University of Athens Medical School, Evangelismos Hospital, Athens, Greece

Neste artigo

Resumo

Sepse experimental pode ser induzida em camundongos usando a ligadura e punção do ceco método (CLP). Protocolos correntes para avaliar a autofagia in vivo no contexto de sepsia induzida por CLP são aqui apresentados: Um protocolo para medir autofagia utilizando ratinhos (GFP)-LC3, e um protocolo para medir a formação de autophagosome por microscopia electrónica.

Resumo

Sepse experimental pode ser induzida em camundongos usando a ligadura e punção do ceco método (CLP), que causa a sepse polimicrobiana. Aqui, um protocolo é fornecido para induzir sepsia de gravidade variável em ratinhos utilizando a técnica de CLP. A autofagia é uma resposta do tecido fundamental para o estresse ea invasão do patógeno. Dois protocolos correntes para avaliar a autofagia in vivo no contexto de sepsia experimental também são aqui apresentados. (I) camundongos transgênicos expressando a proteína fluorescente verde proteína de fusão (GFP)-LC3 são submetidos a CLP. Realce localizada do sinal GFP (puncta), tal como ensaiado ou com imuno-histoquímica ou confocal, pode ser utilizado para detectar a formação de autophagosome aumentado e, assim, a activação da via alterada autofagia. (II) aprimorado vacúolo autofágico (autophagosome) formação por área de tecido da unidade (como um marcador de estimulação autofagia) pode ser quantificado usando microscopia eletrônica. O estudo das respostas autofágicos a sepse é uma amostra críticaonent de compreensão dos mecanismos pelos quais os tecidos respondem à infecção. Os resultados da pesquisa nesta área pode vir a contribuir para a compreensão da patogênese da sepse, o que representa um grande problema em medicina intensiva.

Introdução

Sepse, uma resposta inflamatória sistêmica à infecção, representa uma das principais causas de morte em pacientes criticamente doentes ^1. Infecções intra-abdominais, muitas vezes levando à sepse polimicrobiana, são responsáveis por 20% dos casos de sepse, que têm uma mortalidade significativa de até 60% ^2. Mortalidade associada à sepse resulta principalmente de disfunção de múltiplos órgãos com falência de órgãos posterior ^3,4. Investigações adicionais sobre o mecanismo patogênico da doença é urgentemente necessária para promover o desenvolvimento de novas terapias e mais eficazes.

O método de ligadura e....