Monitoramento Funcionalidade e Morfologia da vasculatura Recrutado por fatores secretados por geradores de Células Tumorais de crescimento rápido

Shiran Ferber; Galia Tiram; Ronit Satchi-Fainaro

doi:10.3791/51525

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Artigo de método

Monitoramento Funcionalidade e Morfologia da vasculatura Recrutado por fatores secretados por geradores de Células Tumorais de crescimento rápido

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DOI:

10.3791/51525

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23 de novembro de 2014

Shiran Ferber^*¹ , Galia Tiram^*¹ , Ronit Satchi-Fainaro¹

¹Department of Physiology and Pharmacology, Sackler School of Medicine, Tel Aviv University

^* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Descrevemos um ensaio de tampão matrigel para ilustrar o potencial angiogênico de um conjunto de fatores secretados por células cancerígenas usando duas modalidades de imagem complementares, ultrassom e endomicroscopia. O matrigel, um gel imitador de matriz extracelular (MEC), é utilizado para introduzir o hospedeiro (camundongo) com fatores angiogênicos secretados para o meio condicionado (CM).

Resumo

O ensaio de tampão de Matrigel subcutânea em ratinhos é um método de escolha para a avaliação in vivo dos factores de pro- e anti-angiogénicos. Neste método, os factores desejados são introduzidos em gel de ECM que imitam a frio de líquido que, após a injecção subcutânea, solidifica para formar um ambiente que imita o meio cancro. Esta matriz permite a penetração das células hospedeiras, tais como células endoteliais, e portanto, a formação de vasculatura.

Aqui propomos um novo ensaio de tampão de Matrigel modificado, que pode ser explorada para ilustrar o potencial angiogénico de um conjunto de factores segregados pelas células cancerosas, por oposição a um factor específico (por exemplo, o bFGF e VEGF) ou agente. A ficha contendo gel ECM-mímica é utilizado para introduzir o host (ou seja, mouse) com um pool de fatores secretados para a CM de células de glioblastoma geradoras de tumor de crescimento rápido. Descrevemos previamente uma extensa comparação do potencial angiogénicoU-87 MG de glioblastoma humano e o seu clone de dormente-derivada, neste sistema modelo, que mostra a angiogénese induzida em células U-87 MG parentais. O CM é preparado pela filtragem media recolhidos a partir de placas de cultura de tecido confluente de qualquer linha celular seguintes 48 horas de incubação. Assim, ele contém apenas factores segregados pelas células, sem as próprias células. Aqui descrita é a combinação de duas modalidades de imagiologia, microbolhas de imagiologia de ultra-sons com contraste e intravital endomicroscopy desfibrado-confocal, para, um em tempo real caracterização precisa da extensão, a morfologia e funcionalidade dos vasos sanguíneos recentemente formados dentro das buchas.

Introdução

O ensaio de angiogénese bujão matrigel foi descrita pela primeira vez por Kibbey et al., Em 1992, em que foi utilizado para avaliar a estimulação de angiogénese pelo SIKVAV péptido (Ser-Ile-Lys-Val-Ala-Val) ^1. Em contraste com outros ensaios in vivo da angiogénese, como o rato da angiogénese da córnea ou de bico ensaios corioalantóicas de membrana, este ensaio é relativamente fácil de realizar ^2. O gel de ECM-mímica injectada pode conter células, pró-angiogénico ou um compostos e / ou factores anti-angiogénicos. Ao avaliar a actividade de um composto anti-angiogénico, o plug normalmente contém uma mistura de factor de crescimen....