Síntese e fabricação de fibras longas electrospun abrangendo uma área maior depósito através de um coletor recém-concebido a partir de um polímero biodegradável romance chamado poli (glicerol-dodecanoato) (PGD) foi relatado. As fibras eram capazes de suportar o crescimento de células derivadas de células-tronco pluripotentes.
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Artigo de método
Electrospun fibrosa Andaimes de Poli (glicerol-dodecanedioate) para Engenharia Neural tecidos de rato as células estaminais embrionárias
Neste artigo
Resumo
Resumo
Para aplicações de engenharia de tecidos, a preparação de scaffolds biodegradáveis e biocompatíveis é a tarefa mais desejável, mas desafiador. Entre os vários métodos de fabricação, electrospinning é o mais atractivo, devido à sua simplicidade e versatilidade. Além disso, nanofibras electrospun imitar o tamanho da matriz extracelular natural, assegurando um apoio adicional para a sobrevivência e crescimento das células. Este estudo mostrou a viabilidade da fabricação de fibras longas, abrangendo uma área maior depósito de um polímero biodegradável e biocompatível romance chamado poli (glicerol-dodecanoato) (PGD) 1, usando um coletor recém-projetado para electrospinning. PGD exibe propriedades elásticas originais com propriedades mecânicas semelhantes às dos tecidos nervosos, assim, ele é adequado para aplicações de engenharia de tecidos neurais. A síntese e fabricação set-up para fazer materiais fibrosos andaimes era simples, altamente reprodutível e barato. Em biocompatibilidadeteste, as células derivadas de células estaminais embrionárias de ratinho podia aderir e crescer nas fibras PGD electrospun. Em resumo, este protocolo fornecido um método de fabricação versátil para fabricação de fibras PGD electrospun para suportar o crescimento de células da linhagem neurais derivadas do rato de células-tronco embrionárias.
Introdução
Eletrofiação é um dos métodos de processamento eficazes para produzir suportes de fibra de tamanho micro-a-nanómetro. O princípio básico de electrospinning envolve um cone de Taylor de uma solução que é realizada ao nível do orifício de uma agulha através da aplicação de alta tensão entre a ponta da agulha e de um colector ligado à terra. Quando a repulsão electrostática na solução vence a tensão superficial, um jacto de fluido carregado é ejectado para fora da ponta da agulha, se desloca através do ar com a evaporação do solvente, e é, finalmente depositada sobre o colector ligado à terra. A bomba de seringa fornece um fluxo contínuo de uma solução que emerge da fie....
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Protocolo
1. Setup Electrospinning Collector
- Corte o papel alumínio em uma peça retangular.
- Dobre o pedaço retangular em uma tira retangular, e anexá-lo perpendicular a uma placa de metal plana com fita adesiva (Figura 1). Nota: O tamanho da esteira de fibras dependem do comprimento e da largura da tira. Assim, as dimensões da tira pode ser ajustada conforme necessário.
2. Solução polimérica Preparação
- Mistura de glicerol e ácido dodecanóico (ADD) em razão molar de 1:1, num copo de 120 ° C durante 100 horas para se obter polímero de DGP.
- Dissolve-se o poli (óxido de etileno) (PEO) e d....
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Resultados
Os principais componentes do electrospinning são mostrados na Figura 1. Uma esteira de fibras de tamanho grande foi tipicamente obtida através da tira perpendicularmente ligada folha de alumínio e uma chapa de metal plana. Figura 2 mostra o desenho do colector e o tapete de fibra de electrospinning. A largura e o comprimento pode ser ajustado para diferentes aplicações. O comprimento da fibra feito com polímeros de PGD e mistura solução basal é de até 10 cm. A morfologia das fibras elec.......
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Discussão
As limitações de coletores simples ou as complexidades de colecionadores que são usados atualmente para eletrofiação aumentar a restrição de se obter o comprimento desejado e tamanho do tapete de fibra para algumas aplicações rotativas. Além disso, a transferência de fibras do coletor de terra para o prato de cultura ou outros substratos é um desafio 5. Neste relatório, um coletor recém-concebido, feito, simplesmente anexando uma tira de folha de alumínio para o coletor de castigo, foi capaz de obter grande.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Este trabalho foi realizado utilizando as instalações do Departamento de Engenharia Biomédica da Universidade Internacional da Flórida.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Glicerol | Sigma-Aldrich | G7757 | |
| Ácido dodecanodióico | Sigma-Aldrich | D1009 | |
| Gelatina | Sigma-Aldrich | D1890 | |
| Poli (óxido de etileno) (PEO) | Sigma-Aldrich | 182028 | |
| Riboflavina | Sigma-Aldrich | 132350250 | 0,10% |
| Células-tronco | embrionárias de camundongoGlobalStem | GSC-5002 | |
| Matrigel | Becton Dickinson | 356234 | |
| DMEM/F12 | Thermo Scientific | SH30272.02 | |
| N2 suplemento | Invitrogen | 17502048 | 1% |
| FGF2 | Stemgent | 03-0002 | 10 ng/ml |
| Accutase | Invitrogen | A11105-01 | |
| Solução salina tamponada com fosfato (PBS) | Invitrogen | 10010-031 | |
| Resazurin fluorescência corante | Sigma-Aldrich | 62758-13-8 | |
| SV Sistema de Isolamento Total de RNA | Promega | Z3100 | |
| GoScript Sistema de Transcrição Reversa | Promega | A5000 | |
| GoTaq qPCR Master Mix | Promega | A6001 | |
| Bomba de seringa | Fisher scientific | 14-831-200 | |
| Spellman High Voltage Electronics Corporation | SL30 | ||
| Luz UV | Philips | 308643 | 15W/G15T8 |
| Synergy HT Leitor de Microplacas Multimodo | BioTek | ||
| Perkin Elmer GeneAmp PCR System 9600 | Perkin Elmer | 8488 | |
| StepOne Sistema de PCR em Tempo Real | Applied Biosystems | 4376357 |
Referências
- Migneco, F., Huang, Y. -C., Birla, R. K., Hollister, S. J. Poly (glycerol-dodecanoate), a biodegradable polyester for medical devices and tissue engineering scaffolds. Biomaterials. 30, 6479-6484 (2009).
- Reneker, D. H., Yarin, A. L. Electrospinning jets and polymer ....
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Reimpressões e permissões
