Artigo de método

Métodos para caracterizar espontânea e surpreender-induzida Locomotion em um modelo de doença de Parkinson induzida por Rotenone de Drosophila

DOI:

10.3791/51625

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17 de agosto de 2014

 ,  , 
1Department of Biology, Colby College

Neste artigo

Resumo

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A doença de Parkinson é uma desordem neurodegenerativa que resulta da degeneração dos neurónios dopaminérgicos no sistema nervoso central, causando defeitos de locomoção. Modelos rotenona doença de Parkinson em Drosophila. Este documento descreve dois ensaios que caracterizam as deficiências de locomoção tanto espontâneas e induzidas por assustar causadas por rotenona.

Resumo

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A doença de Parkinson é uma desordem neurodegenerativa que resulta da degeneração dos neurónios dopaminérgicos no sistema nervoso central, principalmente na substantia nigra. A doença provoca deficiências motoras, que apresentam como rigidez, tremores e demência em humanos. Rotenone é um inseticida que causa dano oxidativo, inibindo a função da cadeia de transporte de elétrons na mitocôndria. É também usado para modelar a doença de Parkinson na Drosophila. As moscas têm uma resposta geotactic negativa inerente, o que os obriga a subir para cima ao ser assustado. Foi estabelecido que a rotenona causa defeitos de mortalidade e de locomoção primeiros que perturbam a capacidade das moscas para subir depois de terem sido aproveitado para baixo. No entanto, o efeito de rotenona em movimento espontâneo não está bem documentada. Este estudo descreve dois ensaios sensíveis, reprodutíveis e de alto rendimento para caracterizar deficiências induzida por rotenona ema curto prazo de sobressalto-locomoção induzida e locomoção espontânea de longo prazo em Drosophila. Estes ensaios podem ser convenientemente adaptados para caracterizar outros modelos de Drosophila de defeitos de locomoção e a eficácia de agentes terapêuticos.

Introdução

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Deficiências de locomoção são um dos principais sintomas de doença de Parkinson e são em grande parte causadas por deterioração dos neurónios dopaminérgicos da substância negra 1. Rotenone é um inseticida cetônico que tem sido estudado extensivamente para modelar déficits motores de Parkinson em Drosophila 2-6. Rotenone provoca danos oxidativos, bloqueando a via de fosforilação oxidativa, o que acaba por causar a morte de células 7. Neurónios dopaminérgicos são mais propensas a toxicidade de rotenona, fazendo com que os efeitos do produto químico principalmente motor baseado 2,7. Ao induzir sintomas da doença de Pa....

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Protocolo

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1 induzida por Startle Drosophila Ensaio locomoção

  1. Tratamento de Drogas
    1. Sedate para imobilizar o número desejado (aproximadamente 8-12) de 1-3 dias de idade do sexo masculino voa usando CO 2 e transportá-los para os frascos que contêm o alimento suplementado com a droga. Nota: Um outro anestésico por exemplo, éter ou gelo podem ser usados ​​para sedar moscas para permitir a contagem e manuseamento.
    2. Permitir moscas para se recuperar de sedação por 20 minutos (ou até que a recuperação), com o frasco em posição horizontal (para evitar moscas ficar preso em alimentos) e em seguida, coloque o frasco na posição ver....

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Resultados

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Induzida por Startle Drosophila Ensaio locomoção

De tipo selvagem, Canton-S, as moscas apresentaram uma resposta negativa geotactic robusta com apenas cerca de 88% e 5% das moscas nas partes superior e inferior, respectivamente, do aparelho duplo frasco após 30 segundos (Figura 1). Moscas expostos a 125 mM e 250 mM rotenone por 3 dias apresentaram um ligeiro decréscimo no número de moscas na parte superior e ligeiro aumento no número de mos.......

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Discussão

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Neste estudo, são descritos dois procedimentos para medir tanto a locomoção espontânea a longo prazo e a locomoção induzida pelo sobressalto a curto prazo num modelo de doença de Parkinson induzida por Drosophila rotenona. Pode-se também medir essas características de locomoção em moscas expostas a outros agentes farmacológicos conhecidos para modelar a doença de Parkinson, por exemplo, paraquat 14, modelos genéticos da doença de Parkinson, por exemplo, alfa-sinucleína mutantes

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Divulgações

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Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

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Os autores gostariam de agradecer Qiuli Wang, Language Resource Center, Colby College, de assistência técnica, com processamento de vídeo e Eric Thomas, do departamento de música, Colby College, para fornecer a música de fundo. Este projecto foi apoiado por doações do Centro Nacional de Pesquisa de Recursos, INBRE (P20RR016463-12), do Instituto Nacional de Ciências Médicas Gerais (P20 GM103423-12), os cidadãos Institutes of Health and Science Division Grant, Colby College (STA). JL e LWM foram apoiados por bolsas do Fundo Escolar Verão, Colby College.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Frascos estreitos padrãoGenesee Scientific32-120
RotenonaSigmaR8875Armazene em freezer, faça fresco para cada experimento
Dimetil Sulfóxido (DMSO)SigmaD8418Solvente para rotenona
Meio instantâneo de DrosophilaCarolina Biological Fórmula 4-24
Monitor de atividade de Drosophila (DAM)Tubos tricinéticosDAM2trikinetics.com
DAM Tubostricinéticos5 X 65 mm
Receita de rotenona + alimento (dose de 125 mM)Faça 62,5 mM de solução estoque de rotenona em DMSO dissolvendo 25 mg de rotenona em 1 ml de DMSO; Para uma dose de 125 mM, adicione 10 mM de estoque de rotenona em DMSO a 5 ml de água.

Referências

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  1. Olanow, C. W., Tatton, W. G. Etiology and pathogenesis of Parkinson's disease. Annual review of neuroscience. 22, 123-144 (1999).
  2. Coulom, H., Birman, S. Chronic exposure to rotenone mod....

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