Um Ensaio Comportamental simples para Teste de Função Visual em Xenopus laevis

Summary

Girinos de Xenopus laevis preferem nadar no lado branco de um tanque preto / branco. Este comportamento é guiado pela sua visão. Com base nesse comportamento, apresentamos um ensaio simples para testar a função visual de girinos.

Abstract

Medição da função visual nos girinos do sapo, Xenopus laevis, permite a triagem para a cegueira de animais vivos. A resposta optocinéticos é, um comportamento reflexiva à base de visão que tem sido observada em todos os vertebrados testados. Girino olhos são pequenos para que a resposta da cauda da aleta foi usada como medida alternativa, o que requer um técnico treinado para registrar a resposta sutil. Foi desenvolvido um ensaio de comportamento alternativo, baseado no facto de que os girinos preferem nadar no lado branco do tanque, quando colocado num tanque com lados tanto a preto e branco. O ensaio aqui apresentado é uma alternativa de baixo custo, simples que cria uma resposta que pode ser facilmente medido. A instalação consiste em um tripé, webcam e tanques de teste aninhados, prontamente disponível na maioria dos laboratórios de Xenopus. Este artigo inclui um filme que mostra o comportamento de girinos, antes e depois do corte do nervo óptico. A fim de testar a função de um olho, também incluem represenresultados representativa de um girino em que cada olho sofreu axotomia da retina em dias consecutivos. Estudos futuros poderia desenvolver uma versão automatizada deste ensaio para testar a visão de muitos girinos de uma só vez.

Introduction

Xenopus laevis foram utilizados como um organismo modelo para estudar a formação do olho. Os olhos se desenvolvem rapidamente, crescendo para a maturidade em menos de uma semana para testar genes ou vias que têm um efeito sobre o desenvolvimento visual e função. Para testar a função visual, a resposta optocinéticos optomotor e tem sido usado em peixes-zebra e girinos de Xenopus, respectivamente, ^{de 1,2.} Porque os olhos de girinos de Xenopus são relativamente menores do que peixe-zebra, este ensaio requer o uso de equipamento especializado e pessoal treinado para detectar o comportamento sutil cauda-flip e olho-movimento em Xe....

Protocol

Animal Care

A Xenopus laevis girinos utilizados neste estudo foram cultivados, criados e tratados de acordo com procedimentos aprovados pelo Upstate Medical University IACUC eo Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório.

1. Instalação Pré-comportamento: Os girinos

1. Obter embriões de Xenopus fertilizados a partir de uma fonte disponível comercialmente ou fertilizar os oócitos in vitro, como descrito anteriormente ^6.
2. Coloque blastula de embriões em estágio placa neural em 18 ˚ C em 60 milímetros placas de Petri contendo 0,1 X MMR [10 Modificado esto....

Results

Relatórios anteriores demonstraram que os girinos de Xenopus premetamorphic preferir nadar no lado branco de um tanque de preto / branco e chamou este ensaio, o Fundo Preferência de cor Ensaio ³ Mudamos este ensaio, a fim de testar a função visual de ambos os olhos de girinos em menos do que uma semana. Desta forma, os olhos podem ser recolhidos para exame histológico.

Mostramos aqui como a resposta é devido a pistas visuais. No Movie 1, os girinos nos pa.......

Discussion

Relatamos aqui um ensaio comportamental guiada pela visão simples que pode ser facilmente realizado em menos de uma semana pelo pessoal de laboratório minimamente treinados. Enquanto outros ensaios requerem equipamento especializado e experiência em comportamento animal, este ensaio permite um teste rápido para determinar a função visual. Outro ensaio comportamental, o ensaio de evitação visual, foi desenvolvida para determinar a forma como o tectum contribui para a percepção visual em Xenopus ^10. Es.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tanque Flexível de 1/2 Galão com Tampa	eNasco	SB19271M	Tamanho: 5-3/8" x 7" x 3-3/4"
Fita
Papel
Grande plataforma inoculante	VWR	50809-022	Tamanho: Diâmetro 114.3 x  H 76.2 mm (4 1/2  x  3")
Durasorb underpad	VWR	82004-836	Tamanho: 43.2 x 60.1 cm (17 x 24")
Kimwipe	Krackeler Scientific, Inc.	1945-34155-CS
Tripé		Várias
câmeras iSight ou webcam	Apple	M8817LL/A	Bom para girinos maiores, mas os pequenos são difíceis de ver
Computador portátil	Apple/PC	Vários	Usamos um MacBook de 13", Intel Core 2 Duo de 2 GHz rodando MacOSX Lion 10.7.5
MiniDV filmadora handycam	SONY	DCR-HC42	Conectado por firewire ao computador com um FireWire 400 de 6 e 4 condutores alfa
Estação Handycam	SONY	DCRA-C121	Isso pode ser usado para conectar firewire à câmera
QuickTime Player software	Quicktime	Versão 10.1
26 G Agulha (5/8" de comprimento)	VWR	BD305115
Dumont #5 Fórceps
Descartáveis
Sulfato de gentamicina [50 mg/ml]	Fisher Scientific	17-528Z	Armazenado em RT
Sylgard 184 elastômero de silicone	Fisher Scientific	NC9644388
Instant ocean	Doctors Foster e Smith	CD-116528	Solução estoque = 100 g/L armazenado em RT
Fosfato de sódio dibásico	Sigma Aldrich	S0876	Solução estoque = 0,4 M armazenado em RT
In vitro embriões fertilizados	eNasco	LM00490MX	100 embriões/unidade