Protocolos para preparação eficiente de amostras homogêneas de ácaros, infestação de plantas experimentais e avaliação de danos às plantas, como requerido para estudos de interação planta-praga foram desenvolvidos.
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Artigo de método
Aplicação de duas avistou Ácaro
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Neste artigo
Resumo
Resumo
O ácaro-rajado, Tetranychus urticae, é um herbívoro de artrópodes polífagas onipresente que se alimenta de uma notavelmente ampla gama de espécies, com mais de 150 de valor econômico. É uma das principais pragas das culturas de estufa, especialmente em Solanaceae e Cucurbitaceae (por exemplo, tomates, beringelas, pimentos, pepinos, abobrinha) e plantas ornamentais de efeito estufa (por exemplo, rosas, crisântemos, cravos), culturas anuais (como o milho, o algodão, soja e açúcar de beterraba) e em culturas perenes (alfafa, morangos, uvas, frutas cítricas, e ameixas) 1,2. Além do polyphagy extremo que torna uma importante praga agrícola, T. urticae tem uma tendência para desenvolver a resistência a uma vasta gama de insecticidas e acaricidas que são usados para o seu controlo 3-7.
T. urticae é um excelente organismo experimental, uma vez que tem um ciclo de vida rápido (7 dias a 27 ° C)e podem ser facilmente mantidas a uma densidade elevada no laboratório. Métodos de Ensaio para a expressão do gene (incluindo a hibridização in situ e a coloração do anticorpo) e para inactivar a expressão dos genes endógenos de ácaros de aranha com RNA de interferência foram desenvolvidos 8-10. Recentemente, toda a seqüência do genoma de T. urticae foi relatado, criando uma oportunidade para desenvolver este herbívoro de pragas como um organismo modelo com recursos equivalentes genômicos que já existem em algumas de suas plantas hospedeiras (Arabidopsis thaliana eo Solanum lycopersicum tomate) 11. Juntos, esses organismos modelo pode fornecer insights sobre bases moleculares das interações planta-praga.
Aqui, um método eficiente para a coleta rápida e fácil de um grande número de ácaros adultos do sexo feminino, a sua aplicação em uma planta hospedeira experimental ea avaliação dos danos planta devido à alimentação ácaro são descritos. O protocolo apresentado enables recolha rápida e eficiente de centenas de pessoas, em qualquer estádio de desenvolvimento (ovos, larvas, ninfas, machos adultos e fêmeas) que pode ser utilizado para aplicação experimental subsequente.
Introdução
Interação planta-praga é um tema de grande importância científica e econômica. Foi estudado historicamente usando as duas plantas de cultivo (como o tomate) e da planta modelo, A. thaliana. Em ambos os casos, a suscetibilidade da planta de herbívoros pode ser medido diretamente por meio de avaliação de fenótipo da planta após o ataque herbívoro ou indiretamente, por meio da avaliação do desempenho de pragas.
Medidas diretas de suscetibilidade da planta foram utilizados anteriormente para um número de espécies de insetos-praga usando uma variedade de métodos. Por exemplo, pragas de larvas de lepidópteros é medido como uma estimati....
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Protocolo
1. Manutenção da Mite População Aranha
NOTA: Ácaros são criados na Califórnia feijão vermelho (Phaseolus vulgaris).
- Cultivar plantas a partir de sementes de feijão por 2-3 semanas antes da infestação.
- Intermix essas plantas com plantas infestadas; ácaros adultos vão colonizar rapidamente o material vegetal fresco.
- Remover velhas plantas de feijão infestados cada 7-10 dias, substituindo-os com plantas frescas.
2. Coleta Adulto Feminino Ácaros
- Mite coleção usando o método de lavagem
- Para a coleta de ácaros, coloque uma planta de feijão fresco em c....
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Resultados
Usando 20 a 30 plantas de feijão infestados, pode-se coletar cerca de 2.000 ácaros adulto do sexo feminino usando peneiras. O tempo necessário para infestar 10 plantas com 20 ácaros por planta é de aproximadamente 15 minutos se estiver usando um pincel para transferir ácaros. Combinações de coleta e os métodos de aplicação são mostrados na Figura 2.
Este protocolo gera resultados reprodutíveis de danos às plantas, demonstrando que os ácaros coletados são do estado fisiológic.......
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Discussão
Este vídeo demonstra protocolos utilizados para isolar e infestam plantas com grandes números de ácaros fêmeas adultas. Embora nós apresentamos esse protocolo usando A. thaliana, ele pode ser usado para qualquer sistema de interação planta-ácaro aranha e atualmente está sendo aplicado com sucesso também em plantas de tomateiro e videira (Vitis vinifera). Os rendimentos de protocolo de resultados reprodutíveis, indicando que os ácaros coletados são do estado fisiológico comparável (Figura 3).
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Este projeto foi financiado pelo Governo do Canadá através do Genome Canada e do Ontario Genomics Institute (OGI-046), e Ontario Research Fund–Global Leadership in Genomics and Life Sciences GL2-01-035 (para M.G. e V.G.). T.V.L. é pós-doutorando do Fundo para Pesquisa Científica Flandres (FWO).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Material vegetal: | |||
| Feijão vermelho da Califórnia | Stokes, Thorold, ON, Canadá | com 2 semanas de idade, bem infestado de ácaros 2 ou 3 dias antes do uso. Outras cultivares de Phaseolus vulgaris podem ser utilizadas. | |
| Produtos químicos: | |||
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P9416 | 1% solução de estoque preparada para simplificar a alíquota |
| Água | da torneira À temperatura ambiente, o calor e o frio afetam a taxa de sobrevivência e o desempenho dos ácaros | ||
| Outros materiais e equipamentos: | |||
| Bandeja | |||
| Conjunto de tesouras | |||
| Copos | |||
| Toalhas | |||
| de papel Conjuntos de peneiras | Fabricado internamente | Estão disponíveis instruções detalhadas | |
| Escova | |||
| Pipetas | |||
| pipeta | 0,2 e 1 ml | ||
| Tubos de centrífuga de 1,5 ml | |||
| Bomba | Bomba tipo aquário com fluxo de ar invertido. A linha de vácuo pode ser usada. A queda de pressão necessária é de aprox. 2-4 psi | ||
| Scanner Estereoscópio | |||
| Epson | V30 | Qualquer scanner de mesa que permita o grau necessário de controle sobre a qualidade da digitalização. Usamos o Epson V30 para nossos experimentos. | |
| Computador | Windows ou OS X PC compatível com hardware de scanner e software Adobe Photoshop. | ||
| Adobe Photoshop software | Adobe Systems Inc., San Jose, CA, EUA | vários | Qualquer versão com a ferramenta Histograma incluída. |
Referências
- Jeppson, L. R., Keifer, H. H., Baker, E. W. Mites injurious to economic plants. , University of California Press. (1975).
- Migeon, A., Dorkeld, F. Spider Mites Web: a comprehensive database for the Tetranychidae. http://www.montpellier.inra.fr/CBGP/spmweb. , (2013).
- Croft, B. A., Van....
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Reimpressões e permissões
