A avaliação da fisiologia respiratória, tradicionalmente invocado técnicas, que exigem contenção ou sedação do animal. Unrestrained pletismografia de corpo inteiro, no entanto, fornece uma análise precisa, não-invasivo, quantitativo de fisiologia respiratória em modelos animais. Além disso, a técnica permite a avaliação repetida respiratório de ratos permitindo estudos longitudinais.
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Artigo de método
Medir a função respiratória em ratos usando Unrestrained pletismografia de corpo inteiro
Neste artigo
Resumo
Resumo
A disfunção respiratória é uma das principais causas de morbidade e mortalidade no mundo e as taxas de mortalidade continuam a subir. A avaliação quantitativa da função pulmonar em modelos de roedores é uma ferramenta importante para o desenvolvimento de futuras terapias. Comumente utilizadas técnicas de avaliação da função respiratória, incluindo pletismografia invasivo e de oscilações forçadas. Embora essas técnicas fornecem informações valiosas, a coleta de dados pode ser repleta de artefatos e variabilidade experimental, devido à necessidade de anestesia e / ou instrumentação invasiva do animal. Em contraste, a desenfreada pletismografia de corpo inteiro (UWBP) oferece uma maneira precisa, não-invasivo, quantitativo por que analisar parâmetros respiratórios. Esta técnica evita o uso de anestesia e apoios, o que é comum para as técnicas tradicionais de pletismografia. Este vídeo vai demonstrar o procedimento UWBP incluindo o equipamento configurado, calibração e pulmão gravação função. Eleirá explicar como analisar os dados recolhidos, bem como identificar os outliers experimentais e artefatos que resulta da circulação de animais. Os parâmetros respiratórios obtidos utilizando esta técnica incluem o volume corrente, volume minuto, ciclo inspiratório, fluxo inspiratório ea relação entre tempo de inspiração para tempo de expiração. Não UWBP não dependem de habilidades especializadas e é barato para executar. Uma característica fundamental do UWBP, e mais atraente para os potenciais utilizadores, é a capacidade de executar medidas repetidas da função pulmonar no mesmo animal.
Introdução
A disfunção pulmonar é uma das principais causas de morbidade e mortalidade no mundo. A condição é caracterizada por troca de oxigênio inadequada, sinônimo de tosse, dores no peito e dispnéia. Contas de doença respiratória para ~ 10% de mortalidade em todo o mundo 1. Segundo a Organização Mundial de Saúde, as taxas de mortalidade são definidos a subir devido à persistência do tabagismo, poluição e irritantes ocupacionais. UWBP é uma adição útil para o estudo da fisiologia pulmonar, que complementa fortemente bioquímicos tradicionais e análises histológicas 2. Outros procedimentos utilizados para a avaliação de pulmão não oferecem as mesmas vanta....
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Protocolo
NOTA: O seguinte procedimento experimental foi aprovado pelo Comitê de Ética Animal da Universidade de Monash e conduzida de acordo com o Código brasileiro de Prática para o Cuidado e Utilização de Animais para Fins Científicos (2006). Fêmea Adulta C57BL / 6 utilizados para gerar os resultados representativos foram obtidos a partir dos Serviços Animais Monash. Os ratinhos foram alojados em um agente patogénico livre, a temperatura e humidade ambiente específico controlado com um ciclo de luz-escuro de 12 h. Estes ratos tiveram livre acesso a comida e água.
1 Configuração inicial
- Conecte o laptop / desktop para a máquina de aquisição de dados para a....
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Resultados
Quando este procedimento foi seguido corretamente, um traço oscilante consistente é criado no software de análise de dados. O procedimento prevê um traço respiratória em poucos minutos após a configuração com cálculos simples de computação para determinar parâmetros respiratórios indicados. Figura 5 representa um traço respiratória adequada de um controle (saudável) do mouse. Dados oscilante adequado é produzido quando o animal não está em movimento activamente.
UWBP é uma a.......
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Discussão
A técnica descrita aqui é um método não-invasivo para avaliação de parâmetros respiratórios de ratos sem restrições e não anestesiados. Os pontos fortes deste protocolo incluem sua simplicidade e precisão para medir a função pulmonar longitudinalmente com artefatos mínimos. Existem, no entanto, algumas limitações e passos críticos para ser notado sobre o procedimento. Em primeiro lugar e mais importante, o mouse deve manter a calma dentro da câmara por um período mínimo de cinco segundos. Adicionado estresse pode atrapa.......
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Divulgações
Os autores declaram que não têm interesses conflitantes. Os autores não têm conflitos a divulgar.
Agradecimentos
Gostaríamos de agradecer ao Prof. David Walker por sua assessoria técnica e fornecimento de equipamentos no desenvolvimento desta técnica. Este trabalho é apoiado pelo Programa de Apoio à Infraestrutura Operacional do Governo de Victoria. Este trabalho foi parcialmente apoiado pelo Programa de Apoio à Infraestrutura Operacional do Governo de Victoria.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Software LabChart 7 (para Macintosh) | ADINSTRUMENTS | MLU60/7 | usado na etapa 4 do protocolo |
| PowerLab 8/30 (modelo ML870) | ADINSTRUMENTS | PL3508 | |
| Octal Bridge Amp (modelo ML228) | ADINSTRUMENTS | FE228 | |
| Cabo BNC preto para BNC (1 m) | ADINSTRUMENTS | MLAC01 | |
| Macintosh OS | Apple Inc. | Mac OS X 10.4 ou posterior | |
| Termômetro retal digital Surgipack | Vega Technologies | MT-918 | |
| Transdutor de pressão volumétrica de grama PT5A | Grass Instruments Co. | Número do modelo PT5A; nº de série L302P4. | |
| Seringa de 1 ml | Becton Dickinson (BD) | 309628 | |
| Pipetas de seringa serológica de 5 ml | Greiner Bio One | 606160 | Conectada por meio de tubo de plástico |
| Balanças | VWR International, Pty Ltd | SHIMAUW220D | Qualquer balança com resolução de 0,1 grama |
| HM40 Medidor de umidade e temperatura | Vaisala | HM40A1AB | |
| Barômetro | Barômetro Mundo | 1586 | |
| Tubulação de laboratório | Dow Corning | 508-101 | Usado para conectar a coluna de água à seringa e ao transdutor de pressão |
| Câmara cilíndrica de perspex | Dynalab Corp. | Câmara cilíndrica construída sob medida com dimensões internas da seguinte forma: 50 mm (l) x 1.500 mm (l). Existem duas tampas para cada lado, com dimensões de 80 mm (l) x 80 mm (w). Cada tampa tem um orifício circular de 60 mm de largura cortado na face da tampa com 50 mm de profundidade. Isso permite que a câmara se encaixe na tampa. Um anel de borracha é encaixado ao redor de cada orifício da tampa onde a câmara se encaixará. Para fixação da seringa e do transdutor de pressão, as aberturas têm 5 mm de diâmetro. Para fixação da sonda de umidade, as aberturas têm 25 mm de diâmetro. | |
| 80% de etanol (4 L) | VWR International, Pty Ltd | BDH1162-4LP |
Referências
- World Health Organization, World Health Statistics. , WHO, Geneva, Switzerland. (2008).
- Jones, C. V., et al. M2 macrophage polarization is associated with alveolar formation during postnatal lung development. Respir. Res. 14 (41), 14-41 (2013).
- Campbell, E., et al.
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Reimpressões e permissões
