Avaliação da Murino exercício de resistência sem o uso de um choque grade: uma alternativa para o exercício forçado

Resumo

Um método para avaliar a resistência ao exercício em camundongos de laboratório sem o uso de uma grade de choque é demonstrado. Este método é um refinamento humano que pode diminuir os efeitos de confusão do estresse nos parâmetros experimentais.

Resumo

Usando modelos de ratos de laboratório, as vias moleculares responsáveis ​​pelos benefícios metabólicos do exercício físico estão começando a ser definido. O método mais comum para avaliar exercícios de resistência em ratos utiliza forçado correr em uma esteira motorizada equipada com uma grade de choque. Animais que parar de correr são empurrados pela correia em movimento esteira dentro de uma grade que proporciona um choque elétrico no pé; para escapar do estímulo negativo, os ratos voltar a correr na esteira. No entanto, o comportamento de evitação e estresse psicológico devido ao uso de um aparelho de choque pode interferir na quantificação de correr resistência, bem como medidas de confundir os níveis hormonais e de citocinas no soro pós-exercício. Aqui, vamos demonstrar e validar um método sofisticado para medir resistência em execução no ingênuos C57BL / 6 de laboratório em uma esteira motorizada sem a utilização de uma grade de choque. Quando os ratos são preacclimated para a esteira, eles correm voluntariamente com a marcha velocidades específicas para cada mouse. Utilização da rede de choque é substituído por encorajamento suave por um operador humano, usando um depressor de língua, juntamente com a sensibilidade à disposição para ser executado voluntário da parte do rato. Endpoints claras para quantificar o tempo de colocação à exaustão para cada rato correndo são definidos e refletida em sinais comportamentais de exaustão, tais como postura espalmadas e dificuldade para respirar. Este método é um refinamento humano que também diminui os efeitos de confusão do estresse sobre os parâmetros experimentais.

Introdução

A obesidade, resistência à insulina e diabetes tipo 2 são doenças metabólicas inter-relacionadas que exercem efeitos profundos sobre a saúde de ambos os EUA e as populações em todo o mundo ^1-4. Exercícios de endurance pode prevenir, bem como tratar, estas condições ^5,6. Além disso, a avaliação da velocidade da marcha e resistência são utilizados testes clinicamente como diagnóstico para fragilidade, sarcopenia, e as consequências de outras doenças tais como a doença pulmonar obstrutiva crônica, em seres humanos ^7.

As vias bioquímicas subjacentes aos efeitos benéficos do exercício físico sobre a composição ....

Protocolo

O procedimento aqui descrito foi aprovado pelo Comitê de Som Animal Care Institucional e Uso do VA Puget, e está em conformidade com o Manual do ILAR para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório.

1. Experimental Preparação

1. Decida de antemão se o sangue ou coleta de tecido logo após o exercício é necessário, e em caso afirmativo, determinar o intervalo pós-exercício para a condução de tais procedimentos. Exemplos incluem a determinação do hormônio induzido pelo exercício ou a liberação de citocinas na circulação (necessitando de coleta de sangue), a determinação da expressão induzida exercício de espécies de mRNA de interesse ....

Resultados

Este procedimento para a medição da resistência de exercício reflete com precisão o perfil molecular e metabólica de diferentes estirpes de ratinhos C57BL / 6, que diferem na expressão da citocina IL-15, ^16,17. Camundongos transgênicos que superexpressam IL-15 (IL-15 TG ratos) apresentam aumento significativamente os tempos de execução para a exaustão em comparação com os controles da mesma ninhada, enquanto os ratos que carecem de IL-15 (IL-15 KO) apresentam reduziu significativamente os tempos de execução a.......

Discussão

Descrito aqui é um método para avaliar a corrida de resistência voluntária em ratos de laboratório usando uma esteira motorizada sem o uso de uma grade de choque. Este método pode revelar diferenças entre as sub-linhas de ratinhos C57BL / 6, que diferem na expressão da citocina IL-15, que por sua vez faz com que as diferenças na expressão de factores que estão na base de endurance ^16,17. Em consonância com os princípios da "Três Rs" no laboratório de ciência animal, este método pode ser usado como u.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Esteira Aberta para Roedores Exer-3/6	Columbus Instruments, Columbus OH	1050RM	Este número de catálogo é para modelos sem grade de choque. As grades de choque podem ser removidas manualmente de modelos mais antigos (Eco 3/6)
Sani Cloth Germicidal Towlettes	PDI- Professional Disposables, Inc., Orangeburg, NY	geralmente encomendado através de instalações locais	Contém 10% de álcool isopropílico; qualquer produto equivalente pode ser usado.
Abaixadores de língua	Qualquer fornecedor
Temporizador de laboratório	Qualquer fornecedor
de camundongos IL-15 TG*	JAX, Bar Harbor, ME	011002	Transgene Murine IL-15 expresso a partir de promotor de actina alfa-esquelética humana modificado com sequência de sinal alterada para facilitar a secreção.
Camundongos C57BL/6J (tipo selvagem)*	JAX, Bar Harbor, ME	000664	Camundongos controle para camundongos IL-15
TG IL-15 KO	Taconic Farms, Germantown, NY	4269-M	Camundongos "knockout" homozigotos de IL-15 em C57BL/6 fundo
C57BL/6NTac (tipo selvagem)*	Taconic Farms, Germantown, NY	Camundongos de controle B6-M	para IL-15 KO
*Opcional; linhas e tratamentos de camundongos podem ser específicos para o experimento protocolo.

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