Summary
Neurale nethinde af en mus i alderen 8 dage er på toppen af en 4% gelatine blok. Efter isolering af fotoreceptorlaget (200 um) ved vibratome er fotoreceptorerne podes efter mekanisk og enzymatisk dissociation for kulturen. Fotoreceptorlaget kan anvendes til molekylære biokemiske analyser eller transplantation.
Abstract
Nethinden er en del af det centrale nervesystem, der er organiseret arkitektur med neuroner i lag fra fotoreceptorerne begge stænger og kegler i kontakt med retinal pigmenteret epitel i den fjerneste del på nethinden overvejer retning af lys, og ganglieceller på den mest proksimale afstand. Denne arkitektur tillader isolering af fotoreceptorlaget af vibratome skæring. Det dissekerede neurale nethinde af en mus i alderen 8 dage er fast indlejret i 4% gelatine på toppen af et udsnit på 20% gelatine fotoreceptorlaget nedad. Ved hjælp af en vibratome og et tveægget barberblad er 100 um tyk indre nethinde snit. Dette afsnit indeholder ganglieceller og det indre lag med især de bipolære celler. En mellemmand sektion 15 um kasseres før 200 um af den ydre retina indeholder fotoreceptorer udvindes. Gelatinen fjernes ved opvarmning til 37 ° C. Stykker af ydre lag er INCUBATed i 500 pi Ringers opløsning med 2 enheder af aktiveret papain i 20 minutter ved 37 ° C. Reaktionen standses ved tilsætning af 500 pi 10% føtalt kalveserum (FCS) i Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM), derefter 25 enheder DNAse I tilsættes før centrifugering ved stuetemperatur, vasket adskillige gange for at fjerne serum, og cellerne resuspenderes i 500 pi DMEM og podet ved 1 x 10 5 celler / cm2. Cellerne dyrkes til 5 dage in vitro, og deres levedygtighed scoret med levende / dead assay. Renheden af kulturen først bestemt ved mikroskopisk observation under eksperimentet. Renheden derefter valideres ved podning og fastsættelse celler på en histologisk objektglas og analyse under anvendelse af et kanin-polyklonalt anti-SAG, en fotoreceptor markør og muse-monoklonalt anti-Rho, en stang fotoreceptor specifik markør. Alternativt kan fotoreceptorlaget (97% stænger) anvendes til gen eller protein ekspression analyse og til transplantation.
Introduction
Nethinden er en integreret del af det centrale nervesystem, som har en konserveret arkitektur blandt hvirveldyr. Neuronerne i den neurale nethinde er organiseret i lag, med de mest fjernt for det indfaldende lys, fotoreceptorlaget i tæt kontakt med det retinale pigmenterede epithelium (RPE) på bagsiden af øjet. Rod og kegle photorecptors er lysfølsomme celler, der er afhængige af opsin følsomme molekyler for foton fange. Disse molekyler er omgivet på disken membraner af en cellulær struktur, som ligger på den ydre del af fotoreceptor, som peger i retning af RPE 1. Denne struktur, som oftest påvirkes meget tidligt i tilfælde af fotoreceptor degenerationer, fornyes med en sats på 10% hver dag. Den såkaldte indre lag indeholder de fleste af de andre neuroner som beregner det modtagne signal fra fotoreceptorerne, bipolar, amacrine og horisontale celler samt ganglieceller. Disse sidstnævnte med deres axonerdannelse af en stråle, som er synsnerven. Denne lagdeling er så bevaret, at biologerne har brugt udtrykket fortrængt amacrine celler, når der findes cellerne uden for den indre plexiform lag 2. Lag af neuroner er fordelt inden for et anker af radial Müller gliaceller. Bipolære celler link fotoreceptorer til ganglieceller. De er placeret mellem det ydre netformige lag og den indre plexiform lag. Ganglion celler danner den indre plexiform lag i forbindelse med de bipolære celler. De amacrin celler er navngivet som foreningens celler placeret i det indre plexiform lag mellem de bipolære celler og ganglieceller. Den ydre netformige lag indeholder horisontale celler. Denne unikke arrangement af neuronale lag af centralnervesystemet tillader isolering af fotoreceptorlaget fra det indre cellelag ved skæring flad monteret retina ved anvendelse af en vibratome.
Oprindeligt blev denne teknik anvendt til at isolere fotoreceptorer til transplantation i øjet af RD1 mus, en model af den menneskelige retinitis pigmentosa (RP) 3. The RD1 mus bærer en recessiv mutation i Pde6b gen, der koder for stangen-specifik phosphodiesterase beta underenhed. Recessive mutationer i dette gen resulterer i RP i mennesker 4. Efter stang fotoreceptorer har degenereret, at patienten mister nattesyn, og overraskende kegle fotoreceptorer, som ikke udtrykker det muterede gen, degenereret som andet trin. Fordi kræves keglerne for farvesyn og synsstyrke, patienterne bliver gradvist blind og en effektiv behandling af sygdommen har endnu ikke udviklet. Ved podning fotoreceptorlaget fra en vildtype mus kegle degeneration af værtens mus forsinkes 3,5. Stængerne tabt i stangen-kegle degenerative model kunne ikke erstattes af en transplantation, fordi den synaptiske forbindelse mellem stænger og bipolære celler kun kan opnås på et bestemt tidspunkt af retinal udvikling, præget af udbruddet af NRL udtryk 6. Laget af fotoreceptorer introduceres ved kirurgi i sub-retinal plads af stangen-mindre RD1 nethinde, mellem RPE og den ydre retina, der svarer til kun 3% af de resterende fotoreceptorer, kegler. To uger efter operation, 40% af keglerne fra dyret transplanteret med en normal fotoreceptorlaget overlevede sammenlignet med dyr transplanteret med en normal lag af indre retinale celler eller til sham-opererede dyr. Topografi kegle overlevelse, spredt ud over hele overfladen af det muterede retina placeret ved positionen af transplanteret væv indikerer, at den beskyttende virkning skyldes en diffunderbart molekyle 7.
Dernæst anvendte vi et co-dyrkningssystem samt konditionerede dyrkningsmedier at validere, at den beskyttende virkning beror på sekretionen af et protein af stænger 8,9. Vi hypotesen, at dette protein bliver exprsmelteostpro- løbende og specifikt af stænger, og at deres død i første fase af sygdommen vil udløse sekundær kegle degeneration ved tabet af et beskyttende signal fra stænger i en ikke-celle selvstændigt 10. På grund af vigtigheden af kegle medieret centrale syn i primater denne formodede protein vil være en yderst relevant terapeutisk værktøj til RP. Bevarelse keglerne i RP ville teoretisk forhindre alt 1,5 millioner patienter på verdensplan at blive blind 11. Vi har anvendt et højt indhold screening tilgang og en kegle-beriget kultur model til at identificere et cDNA, der koder Rod-afledt Cone Levedygtighed Factor (RdCVF) fra en retina cDNA-bibliotek 12. RdCVF er splejset produkt af NXNL1 genet, som interessant er homolog til genet, der koder for thioredoxin proteiner involveret i redox homeostase 13. Den anden splejset produkt af genet, RdCVFL er et enzym, der beskytter sit mål, tau-proteinet mod oxidativ dAmage 14. Administration af RdCVF forhindrer sekundære degeneration af kegler og tabet af deres visuelle funktion i en recessiv og dominerende model RP 12,15. Dette viser to vigtige aspekter af denne innovative terapeutiske strategi 16. For det første kan den anvendes i de fleste RP tilfælde i et gen-uafhængig måde. For det andet er i strid med konkurrerende faktor CNTF, RdCVF overlevelse er forbundet med opretholdelsen af synsfunktionen 17. Fraværet af funktionel effekt kan forklare årsagen til den manglende kliniske fordel af administrationen af CNTF til RP patienter 18. RdCVF er sandsynligvis en af de vigtige overlevelse signalet mellem stave og kegler, da kegle redning in vitro inhiberes af RdCVF immunodepletion 12. Desuden afbrydelse af stangen afledt kegle levedygtighed genet fører til fotoreceptor dysfunktion og tilbøjelighed til oxidativ stress 19.
Anvendelsen affotoreceptorlaget er til grund for identifikationen af RdCVF og en ny redox signal involveret i neurodegenerative sygdomme 20. Dette håndskrift beskriver den protokol, der anvendes til at isolere og kultur celler fra fotoreceptorlaget at karakterisere aktiviteten af RdCVF. Fotoreceptorerne kan opretholdes i kultur i 5 til 7 dage 21. Denne teknik kan også anvendes til at studere ekspressionen af fotoreceptor specifikke gener.
Protocol
BEMÆRK: Proceduren blev godkendt af den etiske komité Darwin fra University Pierre og Marie Curie (CE5 / 2009/048)
1. Fremstilling af gelatineopløsning, Instrumenter, Vibratome, Kultur Medier og Kultur Plate
- Forbered en 20% gelatineopløsning mindst én dag før forsøget.
- Under hætten, tilsættes 500 pi gentamycin [10 mg / ml] til en 500 ml flaske indeholdende CO 2 uafhængigt medium (CO 2 -i).
- I et separat bægerglas tilsættes 20 ml CO2-I (fra trin 1.1.1) og opvarmes ved 95 ° C på en varmeblok under konstant omrøring i 15 minutter. Overhold en farveændring til gul, hvilket indikerer, at løsningen er klar til videre brug.
- 4 g gelatine og gradvist dårlig afvejes til opløsningen fremstillet ovenfor (trin 1.1.2) med øget omrøring og opvarmning ved 95 ° C i 45 minutter til opnåelse af en gul farve opløsning. Lad gelatine Opløsningen afkøles underhætten ca. 5 min.
- Hæld 4 ml af gelatineopløsningen i et 35 mm diameter dyrkningsskåle uden at indføre luftbobler. Hold skålen ved 21 ° C i 30 minutter. Dæk retter med plastfolie, og drej retterne på hovedet. Eventuelt gemme retter på 4 ° C i op til 2 måneder før brug.
- Forbered en 4% gelatine-opløsning.
- Under hætten, tilsættes 25 ml af CO 2 -i medium i en steril plastbeholder og varme ved 42 ° C på en varmeblok. Fjern mediet fra varmeblokken og gradvist tilsættes 1 g gelatine til det varme medium og omrøres. Hurtigt returnere beholderen på varmeblok (42 ° C), og hold den varm under processen.
- Etablering af vibratome apparat:
- Fjern skåle indeholdende 20% gelatine-opløsning opbevaret ved 4 ° C. Skær gelatine med en skalpel. Vend gelatine skive og holde det på det sorte støtte skive af vibratome hjælp af en dråbe super lim.
- Bryde et barberblad i to halvdele, og sæt den ene halvdel i vibratome holder beholderen. Sæt den sorte support disk vibratome apparatet. Tænd sorte knop til højre side. Fastgør bedrift beholder på hovedet af den vibratome. Tilføj tilstrækkelig mængde CO 2 -i medium i vibratome tanken at dække gelatine blok.
- Tænd for vibratome og skære tre 100 um skiver gelatine blok. Hold gelatine blok til videre brug.
- Forbered 40 ml dyrkningsmedium:
- Forbered Dulbeccos modificerede Eagle medium (DMEM) med 10% af føtalt kalveserum (FCS) under kølerhjelmen. Forbered 1 mg / ml poly-D-lysin ved anvendelse af phosphatbuffer saltvand (PBS) pH 7,4.
- I en 96-brønds plade tilsættes 2 ug / cm2 af poly-D-lysin at overtrække bunden af brøndene. Inkubér pladen i 45 minutter ved 37 ° C inden for 5% CO 2-inkubator. Efter inkubation fjernes PBS og erstat med 200 pi/ Brønd DMEM og sted igen ved 37 ° C i 5% CO 2-inkubator før brug.
2. Dissektion af Hele Retina
- Enucleate musen:
- Sacrifice musen ifølge det europæiske direktiv 2010/63: ved cervikal dislokation. Skær hovedet med buede-saks og læg den i en 100 mm diameter petriskål efter at have desinficeret øjet med desinfektionsmiddel.
- Fjern øjet efter at have løsrevet synsnerven ved at inddele det meget forsigtigt med en buet greb. Derefter placere begge øjne i en 35 mm petriskål indeholdende steril CO 2 -i medium ved 21 ° C.
- Fjernelse af nethinden:
- Lav et hul på niveau med øjet-led ved hjælp af en 18 G nål for at kunne indføre saksen i øjeæblet. Indførelse lige saks inde i hullet og forsigtigt skære sclera under iris på hele omkredsen af øjeæblet at fjerne ciliære legeme.
- Opsving øjeæblet og skræl det som en "orange". Frigør nethinden fra sclera og retinal pigmenteret (RPE). Frigør nethinden stadig fastgjort ved niveauet af synsnerven meget forsigtigt med fine buede-saks.
- Frigør resterende glaslegemet fra periferien mod midten af nethinden med to fine greb. Sørg for at alle glaslegemet fjernes fuldstændigt for at tillade udfladning af nethinden.
- Skær enden af en plastik pipette og overføres nethinden til en 35 mm diameter petriskål indeholdende CO 2 -i medium med plastik pipette.
3. Forsegling af fladskærms-Mounted Retina onto Gelatine Block
- Fjern 20 - 30 ml CO 2 -i medium fra vibratome tank (gelatine blok er gratis) for at tillade forseglingen af fast monteret nethinden.
- Overfør nethinden til en glasplade med en plastik pipette og tilsæt en dråbe CO 2 -i medium før overførsel til gelatinen skive med fotoreceptoren nedad på gelatine skive.
- Fastgør nethinden til gelatine blok ved forsigtigt at injicere varmet 4% gelatine på den ene side af blokken mellem retina og gelatine blok og samtidig uddrive varm gelatine på den anden side.
- Aspirer 4% gelatine med en Pasteur pipette. Vent i 10 minutter for at tillade total forsegling. Tilføj CO 2 -i medium at fordybe blokken og bladet helt.
4. Skæring nethinden
BEMÆRK: Dette trin er kritisk for at opnå et lag af fotoreceptorceller uden at de andre retinale celler (figur 1).
- Fra øverst til gelatine blokken skæres 100 um serielle sektioner for at nå nethinden. Derefter skæres 100-120 um sektioner af det indre lag. Afhængig af anvendelsen, kan dette lag kasseres eller opbevaret i flydende nitrogen. Kontroller, at hastigheden af vibratome er meget langsom (1 eller 2) under sektionering af det indre lag eller fotoreceptorer lag.
- Udfør mellemprodukt 15 um sektioner af nethinden, der svarer til grænsefladen mellem det indre og det ydre retina. Overhold dette afsnit under et mikroskop. Fraværet af blodkar indikerer, at den ydre nethinde er blevet nået.
- Skær 200 um af den ydre retina (fotoreceptorlaget) med gelatine og overføre det til en 35 mm diameter fad fyldt med 3 ml CO 2 -i medium. Holde den på is, indtil alle fotoreceptorlaget sektioner alle nethinder opnås.
5. dissociering fotoreceptorceller
- Tag skålen (ES) indeholdende fotoreceptorlaget (r) og sætte det (dem) i en inkubator ved 37 ° C i 10 min.
- Ved hjælp af pincet forsigtigt adskille fotoreceptorlaget fra gelatine og overføre det i en ny skål fyldt med 3 ml Ringers opløsning. Gentag dette trin (5.2) for hvert præparat fotoreceptorlaget.
- Inkuber 2 enheder papain med 25 pi aktivator-opløsning (1,1 mM EDTA; 5,5 mM L-cystein, 60 uM β-mercaptoethanol) i en 5 ml polypropylen sterilt rør og inkuberes det 30 minutter ved 37 ° C inden for 5% CO 2-inkubator . Aktiveringen af papain opnås ved 37 ° C. Under denne inkubering skære fotoreceptorlaget i 2 mm 2 stykker (ikke for lille) og overføre disse stykker i en 5 ml rør.
- Skyl nethinden to gange med 1,5 ml opløsning Ringers opløsning efterfulgt af tyngdekraften sedimentering. Fjern alle resterende Ringers opløsning fra røret med prøven.
- Tilføj 475 pi Ringers opløsning til røret indeholdende aktivt papain og blandes. Føj denne løsning på rør indeholdende nethinden.
- Inkuber rør med nethinden i 20 minutter ved 37 ° C inden for 5% CO 2-inkubator. Reaktionen standses ved tilsætning af 1 ml 10% FCS i DMEM. Tilsæt 25 U deoxyribonuklease I (DNAse I) til fordøjet DNA fra døden celler. Homogeniseres forsigtigt cellesuspensionen ved hjælp af en 1 ml-pipette. Spin ved 50 x g i 6 min ved stuetemperatur.
- Supernatanten at fjerne spor af serum og tilføje DMEM-medium med supplementer (se tabel specifik reagents_equipment) til celle-pellet og resuspender omhyggeligt cellesuspensionen med en 1 ml pipette. Spin ved 50 x g i 6 min ved stuetemperatur. Gentag dette trin (5.7) en gang mere.
6 Dyrkning fotoreceptorceller
- Fotoreceptorlaget en mus på PN8 indeholder omkring 1 til 1.500.000 celler ved anvendelse af denne teknik. Seed de fotoreceptorceller ved 1x 10 5 celler / cm2 i en dyrkningsplade med dyrkningsmedium og dyrke cellerne i 5 dage ved 37 ° C inden for 5% CO 2-inkubator. Fortsæt til immunokemi og Western blotting undersøgelse efter metoder, som de antistof leverandører På dag 5.
BEMÆRK: skridt til at standse den kultur og de indledende test er beskrevet i henvisning 21.
Representative Results
Bortset fra transplantation har fotoreceptor lagene også blevet anvendt til at studere celle-signalering ved at pode celler til fremstilling fotoreceptor kulturer 12,22. Derudover bruges de til at studere genekspression og døgnrytme 23,24. Vi har anvendt cellen fotoreceptorlaget fra en vildtype-mus på post-natal dag 8 til fremstilling fotoreceptorer kulturer i fravær af FCS og opretholdt cellerne i 5 dage ved 37 ° C i en inkubator med 5% CO 2 (figur 1E ). Cellerne blev derefter fikseret under anvendelse af 4% paraformadehyde og derefter fortsatte til immuncytokemisk analyse under anvendelse af fremgangsmåder, der er fastsat af antistoffet leverandørerne enten med monoklonalt muse-anti-RHO (1: 250, Millipore Mab5316) eller kanin polyklonalt anti-SAG (1: 200, en generøs gave Igal Gery og David Hicks). Vi anvendte anti Rho og anti-SAG (selv anti-SAG label kegler og stænger) som følge af det faktum, at anti-SAG er en tidligere markering, end anti-RHO. Andelen af cells positive for anti-RHO antistof er lavere end dem, positive for anti-SAG-antistoffer (figur 2). Dette kan forklares ved, at SAG er stangen arrestin også udtrykt af kegler, der gør 3% af fotoreceptorer i den isolerede lag, eller alternativt ved, at der under postnatale modning af nethinden, ekspressionen af SAG forud at Rho 25,26.
Fotoreceptorlaget blev også anvendt til at overvåge specifikke ekspression af gener af fotoreceptorer af vildtype nethinden og hjernen af dyr på 35 dage RNA blev fremstillet under anvendelse af CsCl ultracentrifugering 27 og hybridiseret til muse DNA-chip array. De budbringere for rhodopsin (RHO), er S-arrestin (Sag) og kegle-transducin (Gnat2) udtrykt specifikt i nethinden i forhold til hjernen (figur 3A). Udtrykket er fremtrædende i fotoreceptorlaget (PR) end i hele retina, som omfatterden indre nethinde lag viser, at disse gener udtrykkes endog af fotoreceptorer. For Gnat2, den relative ekspression sammenlignet med Rho og Sag viser, at det udtrykkes af kegler, der er indeholdt i den isolerede fotoreceptorlaget. Ekspressionen af recoverin (Rcvrn) i fotoreceptorlaget sammenlignet med hele retina forøges (figur 3B).
Fotoreceptorlaget blev også anvendt til at overvåge ekspressionen af RHO og GNAT2 hjælp western blotting efter metoder, der er fastsat af antistoffet leverandører, og at sammenligne den indre nethinde lag (figur 4). Bemærk fraværet af RHO og GNAT2 28 markører af stave og tappe henholdsvis hele nethinden og i nethinden i RD1 musen på postnatal dag 35.
Figur 1. Skematisk visning af vibratome sektionering af muse nethinden. (A) Installation af den flade monteret retina med fotoreceptoren nedad på gelatine skive. (B) Afdeling af den indre nethinde med vibratome klinge. (C) Afsnit af den ydre nethinde tilføjet af gelatine. (D) Kontrol af tilstedeværelsen af fotoreceptor på kanten af fragmentet af nethinden efter isolering af fotoreceptorlaget. Scale bar anvendes til grøn fluorescens anvendes af et hvidt lysmikroskop. De fotoreceptorer er placeret i kanten af billedet. (E) kunstigt fotoreceptorceller (post-fem døgn). (F) Højere forstørrelse af panel E.
Figur 2. Differentiel ekspression af RHO og SAG i muse fotoreceptor kultur. (A) Farvning af kerner (blå), (B) SAG farvning (grøn), (C) RHO farvning (rød). (D) flettede billede. Fordi farvning af SAG udtrykkes tidligere end RHO farvning er kun to celler dobbelt mærket SAG og RHO (se *). Scale bar:. 23 um Klik her for at se en større udgave af dette tal.
Figur 3. Sammenligning af ekspressionen af tre gener i hjernen og hele nethinden og fotoreceptorer i de vildtype dyr på 35 dage. (A) Rhodopsin (Rho), S-arrestin (SAG) og kegle-transducin (Gnat2). (B) calbindin (Calb1) og Recoverin (Rcvrn). Dataene vises som relativ udtryk. Den relative udtryk er et udtryk værdifremstillet af microarray data efter normaliszation med softwaren Robust Multi-matrix Gennemsnit (RMA) til rådighed i videndatabase KBaSS (http://kbass.institut-vision.org/KBaSS/).
Figur 4. Angivelse af RHO og GNAT2 i det ydre nethinde fra en vildtype nethinden postnatal dag 35. Fravær af deres udtryk i den indre nethinde og i nethinden i RD1 musen på postnatal dag 35. ACTB, beta actin. Klik her for at se en større udgave af dette tal.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cytidine 5′-diphosphocholin* | Sigma-Aldrich | C0256 | 4.7 µM Cytidine 5′-diphosphocholin |
| Cytidine 5′-diphosphoethanolamine* | Sigma-Aldrich | C0456 | 2.7 µM Cytidine 5′-diphosphoethanolamine |
| Linoleïc acid/ bovine serum albumin (BSA)* | Sigma-Aldrich | L8384 | 100 µg/ml linoleïc acid/ bovine serum albumin (BSA) |
| Triiodo-L-thyronine* | Sigma-Aldrich | T6397 | 0.03 µM Triiodo-L-thyronine |
| 96-well plates | Greiner bio-one | 655-095 | |
| Binocular microscope | Leica | MZ-75 | |
| CO2 independent (CO2-i) | Life Technologies | 18045054 | |
| DMEM | Life Technologies | 41966029 | |
| Forceps n°5 Dumont | Bionic | 11254-20 | |
| Gelatin from porcin skin type A | Sigma-Aldrich | G2500 | |
| GeneChip | Affymetrix | U74v2 | |
| Gentamicin solution | Life Technologies | 15710049 | |
| Hydrocortison* | Sigma-Aldrich | H0888 | 0.55 µM hydrocortison |
| Insulin* (I) | Sigma-Aldrich | I1884 (ITS) | 0.86 µM insulin (I) |
| Papain | Worthington-biochem | WOLS03124 | |
| Poly-D-lysine | Sigma-Aldrich | P-6407 | |
| Progesterone* | Sigma-Aldrich | P7556 | 2.0 µM progesterone |
| Prostaglandin* | Sigma-Aldrich | P5172 | 0.28 µM prostaglandin |
| Putrescine* | Sigma-Aldrich | P5780 | 182 µM putrescine |
| Scalpel Albion | EMS | 72000 | |
| Scissor | Moria | 15396-00 | |
| Sodium pyruvate* | Sigma-Aldrich | S8636 | 1 mM sodium pyruvate |
| Sodium selenite* (S) | Sigma-Aldrich | I1884 (ITS) | 0.29 µM Na2SeO3 (S) |
| Taurine* | Sigma-Aldrich | T8691 | 3 mM taurine |
| Transferrin* (T) | Sigma-Aldrich | I1884 (ITS) | 0.07 µM transferrin (T) |
| Vibratome apparatus | Leica | VT1000-S | |
| * Supplements | |||
References
- The Organization of the Retina and Visual System. Webvision. Kolb, H., Nelson, R., Fernandez, E., Jones, B. , (2014).
- Perez De Sevilla Muller, L., Shelley, J., Weiler, R. Displaced amacrine cells of the mouse retina. J Comp Neurol. 505 (2), 177-189 (2007).
- Mohand-Said, S., et al. Photoreceptor transplants increase host cone survival in the retinal degeneration (rd) mouse. Ophthalmic Res. 29 (5), 290-297 (1997).
- Daiger, S., Sullivan, L., Bowne, S. RetNet, the Retinal Information Network. , The University of Texas Health Science Center. Houston, TX. Available from: https://sph.uth.edu/retnet (2014).
- Mohand-Said, S., Hicks, D., Dreyfus, H., Sahel, J. A. Selective transplantation of rods delays cone loss in a retinitis pigmentosa model. Arch Ophthalmol. 118 (6), 807-811 (2000).
- MacLaren, R. E., et al. Retinal repair by transplantation of photoreceptor precursors. Nature. 444 (7116), 203-207 (2006).
- Yang, Y., et al. Transplantation of photoreceptor and total neural retina preserves cone function in P23H rhodopsin transgenic rat. PLoS One. 5 (10), (2010).
- Mohand-Said, S., et al. Normal retina releases a diffusible factor stimulating cone survival in the retinal degeneration mouse. Proc Natl Acad Sci USA. 95 (14), 8357-8362 (1998).
- Fintz, A. C., et al. Partial characterization of retina-derived cone neuroprotection in two culture models of photoreceptor degeneration. Invest Ophthalmol Vis Sci. 44 (2), 818-825 (2003).
- Cronin, T., Leveillard, T., Sahel, J. A. Retinal degenerations: from cell signaling to cell therapy; pre-clinical and clinical issues. Curr Gene Ther. 7 (2), 121-129 (2007).
- Wright, A. F.
- Leveillard, T., et al. Identification and characterization of rod-derived cone viability factor. Nat Genet. 36 (7), 755-759 (2004).
- Lillig, C. H., Holmgren, A. Thioredoxin and related molecules--from biology to health and disease. Antioxid Redox Signal. 9 (1), 25-47 (2007).
- Fridlich, R., et al. The thioredoxin-like protein rod-derived cone viability factor (RdCVFL) interacts with TAU and inhibits its phosphorylation in the retina. Mol Cell Proteomics. 8 (6), 1206-1218 (2009).
- Yang, Y., et al. Functional cone rescue by RdCVF protein in a dominant model of retinitis pigmentosa. Mol Ther. 17 (5), 787-795 (2009).
- Bennett, J. Strategies for delivery of rod-derived cone viability factor. Retina. 25 (8 Suppl), S47 (2005).
- Komaromy, A. M., et al. Transient photoreceptor deconstruction by CNTF enhances rAAV-mediated cone functional rescue in late stage CNGB3-achromatopsia. Mol Ther. 21 (6), 1131-1141 (2013).
- Birch, D. G., Weleber, R. G., Duncan, J. L., Jaffe, G. J., Tao, W. Randomized trial of ciliary neurotrophic factor delivered by encapsulated cell intraocular implants for retinitis pigmentosa. Am J Ophthalmol. 156 (2), 283-292 (2013).
- Cronin, T., et al. The disruption of the rod-derived cone viability gene leads to photoreceptor dysfunction and susceptibility to oxidative stress. Cell Death Differ. 17 (7), 1199-1210 (2010).
- Leveillard, T., Sahel, J. A. Rod-derived cone viability factor for treating blinding diseases: from clinic to redox signaling. Sci Transl Med. 2 (26), 26ps16 (2010).
- Fontaine, V., Hicks, D., Dreyfus, H. Changes in ganglioside composition of photoreceptors during postnatal maturation of the rat retina. Glycobiology. 8 (2), 183-190 (1998).
- Fontaine, V., Kinkl, N., Sahel, J., Dreyfus, H., Hicks, D. Survival of purified rat photoreceptors in vitro is stimulated directly by fibroblast growth factor-2. J Neurosci. 18 (23), 9662-9672 (1998).
- Reichman, S., et al. The homeobox gene CHX10/VSX2 regulates RdCVF promoter activity in the inner retina. Hum Mol Genet. 19 (2), 250-261 (2010).
- Sandu, C., Hicks, D., Felder-Schmittbuhl, M. P. Rat photoreceptor circadian oscillator strongly relies on lighting conditions. Eur J Neurosci. 34 (3), 507-516 (2011).
- Dorrell, M. I., Aguilar, E., Weber, C., Friedlander, M. Global gene expression analysis of the developing postnatal mouse retina. Invest Ophthalmol Vis Sci. 45 (3), 1009-1019 (2004).
- Brooks, M. J., Rajasimha, H. K., Roger, J. E., Swaroop, A. Next-generation sequencing facilitates quantitative analysis of wild-type and Nrl(-/-) retinal transcriptomes. Mol Vis. 17, 3034-3054 (2011).
- Delyfer, M. N., et al. Transcriptomic analysis of human retinal surgical specimens using jouRNAI. J Vis Exp. (78), (2013).
- Ying, S., et al. A CAT reporter construct containing 277bp GNAT2 promoter and 214bp IRBP enhancer is specifically expressed by cone photoreceptor cells in transgenic mice. Curr Eye Res. 17 (8), 777-782 (1998).
