Técnicas de coleta de sangue não terminal em cobaias

Resumo

Apesar de ser um modelo conhecido, a cobaia representa atualmente um nicho em ciências experimentais em animais e dados limitada disponível sobre a execução da maioria dos procedimentos. Apresentamos aqui quatro abordagens diferentes para não-terminal em técnicas de amostragem de sangue vivo em qualquer cobaias conscientes ou anestesiados.

Resumo

As cobaias possuem várias semelhanças biológicas para os seres humanos e são validados modelos animais experimentais ^1-3. No entanto, o uso de cobaias representa atualmente uma área relativamente estreita de dados de pesquisa e descritivos sobre metodologia específica é correspondentemente escasso. As características anatômicas de cobaias são um pouco diferentes de outros modelos de roedores, daí modulação de técnicas de amostragem para acomodar as diferenças espécie-específicos, por exemplo., Em comparação com camundongos e ratos, são necessários para obter amostras suficientes e de alta qualidade. Como tanto a longo e curto prazo em estudos in vivo, muitas vezes requerem repetidas sangue amostragem a escolha da técnica deve ser bem considerado, a fim de reduzir o estresse e desconforto nos animais, mas também para garantir a sobrevivência, bem como o cumprimento dos requisitos de tamanho da amostra e acessibilidade. Amostras de sangue venoso pode ser obtido em uma série de sites em cobaias por exemplo., A safena e jugularveias, cada uma das técnicas que contém tanto vantagens como desvantagens ^4,5. Aqui, apresentamos quatro técnicas de amostragem de sangue diferentes para ambos cobaias conscientes ou anestesiados. Os procedimentos são todos os procedimentos não-terminal na condição de os volumes de amostra e número de amostras não exceder as diretrizes para coleta de sangue em animais de laboratório ^6. Todos os métodos descritos têm sido exaustivamente testado e aplicado para repetido em amostras de sangue vivo em estudos dentro do nosso centro de pesquisa.

Introdução

A cobaia um modelo experimental animal valioso e validado devido a um número de semelhanças biológicos para os seres humanos, tais como a exigência de uma fonte dietética de vitamina C, a lipoproteína plasmática comparável enzimas que metabolizam e perfis de lipoproteína, bem como semelhanças compartilhadas com placentação humana e desenvolvimento pré-natal ^1-3,7,8. Isso faz com que a cobaia um modelo atraente e adequado para estudar os efeitos de doenças associadas à dieta, como a doença não alcoólica do fígado gorduroso, doenças cardiovasculares e efeitos putativos de deficiência de vitamina C, mas também o efeito de, por exemplo., A intervenção dietética materna sobre o desenvolvimento prole.

Coleta de sangue repetida muitas vezes é necessária tanto em curto e longo prazo em estudos in vivo. Devido às diferenças anatómicas específicas de espécies é necessário modulação da técnica de amostragem, a fim de obter amostras de sangue em cobaias, em comparação com outros modelos de roedores ^{4,5. Isto inclui a variação ao longo de veias e artérias, e também que as cobaias não tem uma cauda, ​​assim, ter diferentes requisitos e opções de amostragem e de manuseamento. Amostragem do safena ou veia do tarso, induz o mínimo de desconforto e estresse no animal e não requer anestesia 3,9. Esta técnica permite que as amostras de pequenas quantidades de sangue (100-400 ul), por exemplo, repetido., Para determinar os marcadores bioquímicos no plasma. Se um tamanho ainda mais pequeno da amostra é suficiente (50-100 ul), este pode facilmente ser obtido por punção da veia da orelha. Esta técnica também pode ser levada a cabo em animais conscientes e é útil, por exemplo, quando a medição da glucose no sangue 10,11. A amostragem a partir da veia jugular permite a recolha de maiores quantidades de sangue (1-2 ml), mas requer anestesia.}

Aqui, apresentamos quatro técnicas de amostragem de sangue diferentes para ambos cobaias conscientes ou anestesiados. O procedures são todos os procedimentos não-terminal na condição de os volumes de amostra e número de amostras não exceder as diretrizes para coleta de sangue em animais de laboratório ^6. É no interesse da boa ciência, bem como de bem-estar animal que o estresse deve ser reduzido ao mínimo. Consequentemente, apenas bem treinados e pessoal competente deve executar os procedimentos com animais.

Protocolo

Os procedimentos mostrados foram realizados de acordo com protocolos aprovados pelo animal dinamarquês Experimentação Inspecção no âmbito do Ministério da Alimentação, Agricultura e Pescas.

1. Sangue Amostragem do lateral safena ou Tarsal Veia

1. Execute este procedimento sem anestesia e com a ajuda de um investigador, uma manipulação a cobaia, e uma coleta de amostra.
2. Raspar a região tarsal da perna com um barbeador elétrico até que as veias são visíveis. Certifique-se de que a área é grande o suficiente para evitar interferir com a pele no local de punção.
3. Coloque a perna em um banho de água morna e esfregue suavemente a perna, fazendo com que as veias mais dilatada e evidente.
4. Limpe a perna com uma toalha limpa e desinfectar o local da punção com gaze ou um chumaço de algodão umedecido com álcool 70%.
5. Contenha a cobaia e estender a perna para baixo, aplicando pressão suave imediatamente acima do joelho to fornecer estase.
6. Por punção da veia com uma agulha de 21 G ou lanceta. Recolha de sangue, por exemplo., Usando um tubo de recolha ou capilar. Gentilmente manipular a perna para ajudar o fluxo de sangue.
7. Solte estase, uma vez que a amostra foi obtida. Aplique um pedaço de gaze ou algodão, com uma leve pressão ao local da punção até que o sangramento parou.
8. Retorne o animal para sua gaiola e monitor por 5-10 min para assegurar a hemostasia.

2. coleta de sangue da veia da orelha

1. Executar este procedimento, sem anestesia, quer isoladamente ou, de preferência com a ajuda de um colega.
2. Desinfetar a superfície dorsal da orelha com gaze ou um chumaço de algodão umedecido com álcool 70%.
3. Aplicar uma leve pressão para a base da orelha para proporcionar estase.
4. Por punção da veia com uma agulha de 21 G ou lanceta, e coleta de sangue.
5. Solte estase, uma vez que a amostra foi obtida, aplique um pedaço de gaze ou algodão com gepressão ntle ao local da punção até que o sangramento parou.
6. Retorne o animal para sua gaiola e monitor por 5-10 min para assegurar a hemostasia.

3. Sangue Amostragem da veia jugular

1. Realizar este procedimento com a ajuda de um investigador adicional; uma manipulação da cobaia e uma coleta de amostra.
2. Anestesiar a cobaia com um anestésico adequado durante toda a duração deste procedimento. Uma mistura de tiletamina (0,93 mg / kg), zolazepam (0,93 mg / kg), xilazina (1,49 mg / kg) e butorfanol (0,06 mg / kg) pode ser usado.
3. Coloque a cobaia anestesiada em suas costas e retirar delicadamente as pernas dianteiras caudal.
4. Raspar e desinfectar (por ex., Com 70% de álcool) a parte ventral do pescoço.
5. Cubra a seringa com heparina ou EDTA antes da amostragem, a fim de reduzir o risco de coagulação.
6. Palpar a clavícula e inserir um 25 G (ou 23 G) agulha montada em um 1 ml ap seringaximadamente 1 cm lateral à linha média ao nível da articulação do ombro. Manter a seringa em um pequeno ângulo para cima e medial enquanto aplica uma pressão ligeiramente negativa. Evite danificar as estruturas subjacentes como a veia jugular está situado muito superficial. Inclinação do gargalo da cobaia ligeiramente para trás, para proporcionar o aumento da estase venosa.
7. Libertar as pernas da frente, quando a amostra de sangue é obtida, e aliviar a estase antes de a agulha é retraída. Use um pedaço de gaze seca ou algodão para aplicar pressão suave para o local da punção.
8. Retorne o animal para uma gaiola de recuperação e monitoramento para garantir a hemostasia e recuperação da anestesia.

Resultados

Quatro abordagens diferentes para in vivo de técnicas de amostragem de sangue não-terminal, nem em cobaias conscientes ou anestesiados foram apresentados. Figura 1 ilustra o curso da safena lateral e veia tarsal na cobaia e possíveis locais de punção. Veias da orelha visíveis na superfície dorsal de uma orelha da cobaia são ilustrados na Figura 2 Estas veias pode ser utilizado para a amostragem de sangue, quando apenas um volume muito pequeno, é necessária. A posição do porquin...

Discussão

Em comparação com camundongos e ratos, cobaias estão com medo, por natureza e deve ser abordada com calma e tratada corretamente, a fim de reduzir o estresse. Do ponto de vista do bem-estar animal, agindo com cuidado é naturalmente uma prioridade; no entanto, este também irá reduzir o risco de efeitos associados a ansiedade sobre o por exemplo, dados coletados., aumento dos níveis sanguíneos de corticosteróides e glicose ^12. Da mesma forma, a movimentação diária irá habituar os animais com os procedi...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Barbeador elétrico	Wella (Contura), Dinamarca	273207	Produto alternativo pode ser usado. Vários fornecedores
Seringas	B.Braun-Omnifix-F, Alemanha	9161406V	Produto alternativo pode ser usado. Vários fornecedores
Agulhas	BD Microlance, Espanha	301156	Pode ser usado um produto alternativo. Vários fornecedores
Tubo de coleta Microvette	Sarstedt, D-51588Nü mbrecht, Alemanha	201,288,100	Produto alternativo pode ser usado. Vários fornecedores
Analisador Accu-Check	Roche A/S Diagnostics, Dinamarca		Produto alternativo pode ser usado. Vários fornecedores
Heparin 5000 IE/ml	LEO Pharma, Dinamarca		Pode ser usado um produto alternativo. Vários fornecedores
Anestesia	Zoletil 50, Chemvet, Dinamarca		Pode ser usado um produto alternativo. Vários fornecedores
Anestesia	Narcoxyl vet 20 mg/ml, Intervet, Dinamarca		Pode ser utilizado um produto alternativo. Vários fornecedores
Anestesia	Torbugesic vet 10 mg/ml, Scanvet, Dinamarca		Pode ser utilizado um produto alternativo. Vários fornecedores
Pomada neutra			Produto alternativo pode ser usado. Vários fornecedores
Gaze ou cotonete			Pode ser utilizado um produto alternativo. Vários fornecedores
Desinfetante (álcool 70%)			Produto alternativo pode ser usado. Vários fornecedores