Construção de uma compilação de fácil Facility Zebrafish Acessível e

Resumo

Uma instalação de peixe-zebra adequada para reprodução e pesquisa in vivo é construída de maneira fácil e acessível. A manutenção é mínima. Esta instalação é ideal para o envolvimento do aluno e pesquisa independente.

Resumo

In vivo a pesquisa biomédica é essencial para traduzir em resultados in vitro em avanços clínicos. Pequenas instituições acadêmicas com recursos limitados encontrá-lo virtualmente impossível construir e manter instalações típicas de roedores para a investigação. Zebrafish pesquisa tem demonstrado ser uma alternativa valiosa para a pesquisa in vivo em farmacologia, fisiologia, desenvolvimento e estudos genéticos. Este artigo demonstra que uma instalação de peixe-zebra funcional pode ser construído de uma forma fácil e acessível. Nós demonstramos que esse mecanismo poderia ser construído em cerca de um dia de trabalho com ferramentas e conhecimentos mínimos. O custo dos 27 1.8 L tanque de peixes facilidade zebrafish construído neste estudo foi de aproximadamente US $ 1.500. Estima-se que a manutenção de um trabalho inicial de 150 peixes colônia por 3 meses é de R $ 1.000. Este projecto envolveu alunos, que foram introduzidas para aquaculturing de peixe-zebra para pesquisa propõe.

Introdução

In vivo modelos são essenciais para a realização de pesquisa biomédica abrangente uma vez que permitem pesquisas in vitro a ser traduzido no nível do sistema e dos organismos. Por exemplo, a investigação com pequenos mamíferos, roedores, ou seja, tem sido necessário o desenvolvimento de fármacos e na melhoria das drogas disponíveis. No entanto, a complexidade (financeiramente e logisticamente) pode fazer com que seja praticamente impossível construir e manter instalações de roedores para a experimentação propõe a pequenas instituições acadêmicas de pesquisa. No entanto, a pesquisa in vivo pode ser realizada utilizando outras espécies de animais que necessitem de logística menos elaborados. Peixe-zebra (Danio rerio) têm sido utilizados com sucesso como um modelo in vivo para o estudo da genética, desenvolvimento, fisiopatologia e farmacologia ^{1,2,10,11,12.} As instalações necessárias para abrigar peixes-zebra para a experimentação são relativamente simples e significativamente menos caro quando comparado a rinstalações Odent. Kim et al. ³ descreveram recentemente em detalhe um tanque de 80 peixes-zebra sistema de habitação que pode ser construído por cerca de US $ 1.500, que inclui ambas as partes e os custos trabalhistas. Isto está em contraste com a quase 8500 dólares que seriam necessários para comprar um sistema de ready-made, 80 tanque de qualquer número de fornecedores comerciais. No entanto, a descrição dada por Kim et al. pode ser complicado e difícil de seguir para os novatos da investigação peixe. Acreditamos que uma instalação de peixe-zebra podem ser construídos de forma simplificada para um investimento de US $ 1.500.

A criação de uma facilidade in vivo em pequenas instituições acadêmicas fornece suas faculdades mais uma ferramenta com a qual a produzir pesquisa mais poderoso e completo. Os estudos in vitro apoiados por resultados in vivo geralmente produzem investigação biomédica mais abrangente do que os dados obtidos utilizando apenas nas abordagens in vitro. Portanto, oimplementação de um centro de pesquisa in vivo irá melhorar significativamente o sucesso instituição em seus esforços globais de pesquisa (exposição do estudante com a investigação, publicações, comunicações, a busca de financiamento externo, etc.).

A construção de uma unidade de peixe-zebra como o descrito neste estudo é ideal para instituições de pesquisa acadêmicas com recursos limitados (ou instituições sem in vivo centros de pesquisa) durante constrição Financial Times.

Protocolo

NOTA: Estes protocolos seguir as orientações do IACUC de Presbyterian College.

1. Materiais Adquirir listadas na Tabela 1.

2. Monte a 5 Shelf Chrome De acordo com as instruções do fabricante. Este será utilizado para abrigar o mecanismo.

3. Construa o reservatório de água e sistema de filtração (Figuras 1 e 2).

1. Usando a Figura 1A como um guia, o layout do balde de 18 litros, bomba, filtros e lâmpada UV para determinar a localização da instalação final e tamanho.
2. Uma vez que as peças são colocadas para fora, medir e cortar o tubo de PVC ¾ "para o comprimento necessário para a montagem. Variar os comprimentos de todas as tubulações de acordo com as necessidades e limitações de espaço específicos.
3. Montar os tubos e acessórios, como previsto anteriormente usando o primer PVC e cimento, veja abaixo (3.3.2 e 3.3.3).
   1. Lixe as bordas do corte do tubo com uma lixa até que eles são suaves ao toque de umd não há restos.
   2. Primeiro o lado de fora do tubo e o interior do acessório com o iniciador de PVC comprado com o cotonete incluídos a partir do iniciador de PVC.
   3. Cimento e o tubo de montagem em conjunto aplicando o cimento de PVC para o exterior do tubo usando o cotonete incluídos. Repita o procedimento para todas as etapas que precisam cimentação PVC.
   4. Coloque o balde 18 litros de um dos lados da construção de prateleira.
   5. Instalar um conector de anteparo do lado do reservatório.
   6. Anexar um tubo de PVC de ¾ "da antepara.
   7. Conecte a outra extremidade do ¾ "tubo para a entrada da bomba usando um ¾" com rosca fazer um encaixe.
   8. Conecte-se os filtros para a bomba usando dois cotovelos de 90 graus e ¾ "tubo de PVC.
      1. Use um filtro de papel seguido por um filtro de carvão ativado para filtrar os detritos e reduzir os níveis de cloro e produtos químicos na água.
   9. Ligue a lâmpada UV ao accordi filtrosng a instruções do fabricante.
4. Ligar a bomba e um sistema de filtro para o lado de cima da primeira prateleira do bastidor utilizando laços de arame. Varie a ordem da montagem e fixação de acordo com o tamanho e layout da prateleira / cremalheira escolhido.
5. Adicionar 1 BioBall por galão de água para o reservatório de água quando a bomba e do sistema de filtro são montados e ligados à prateleira.

4. Construa a principal linha de alimentação (Figuras 1B e 2).

1. Meça e corte um pedaço de ¾ "tubo de PVC para ligar a lâmpada UV para a alimentação principal
2. Use um "tee PVC para iniciar a linha de alimentação principal, ligando o tee ao ¾" ¾ de escape PVC vindo do filtro UV. .
   1. Adicionar uma válvula on-off para o fundo do T do PVC para servir como um dreno para a lavagem de manutenção do sistema.
   2. Comece a principal linha de abastecimento a partir do topo do ¾ "tee PVC, medindo e corte ¾" PVCtubo com o comprimento desejado para proporcionar tubos de alimentação para cada uma das prateleiras na cremalheira.
   3. Instale ¾ "tees de PVC para as linhas horizontais que entrarão cada prateleira do rack.
   4. Opcionalmente (e sugeriu), adicionar uma ¾ "on-off válvula para cada linha de fornecimento de prateleira para permitir o isolamento de cada prateleira e um design modular do sistema.
3. Use um tubo de PVC de ¾ "como uma redução da pressão de linha na prateleira de cima. Se esta linha passa sobre a parte de trás da prateleira, prateleira para usar este armazenamento. Terminar a redução de pressão de linha na linha de escape principal (Figura 1B) com um ¾ "válvula de ligar-desligar.
4. Uma vez que os passos acima foram concluídos, prime e cimentar o tubo de PVC em conjunto, como feito anteriormente, quando a construção do sistema de reservatório e filtração.

5. Construa a principal linha de escape (Figuras 1C e 2).

1. Executar o comprimento vertical da linha de escape principal para o outro lado da cremalheira from da linha de alimentação principal. Use um tubo de 2 "PVC para esta linha vertical para receber a linha de alimentação principal para as linhas de topo e de drenagem dos tanques de peixes de cada prateleira.
2. Corte os pedaços de 2 "tubo de PVC para a linha de escape principal vertical e usar 2" tees PVC para receber as linhas de drenagem do tanque de peixes de cada prateleira. Termine a linha de escape principal no tanque de estoque para expelir a água reciclada por um filtro de esponja.
3. Corte uma abertura de uma polegada de todo o comprimento dos dois "pedaços de tubos de PVC e anexar a linha de escape principal vertical com PVC t-shirt para as linhas horizontais de drenagem dos tanques de peixe.
4. Tampe as duas "linhas de drenagem horizontais com um 2" cap PVC.
5. Prime e cimentar as peças usando os acessórios necessários (conectores, mamilos ou cotovelos).

6. Construir os tanques de peixes (Figura 3).

1. Com a perfuração, corte um "furo na parte de trás do tanque de peixes 1" 1 1/8 abaixo da borda superior com uma serra craniana.
2. Deslize um ¾ "PVC adaptador macho roscada (com um O-ring # 18 em anexo) através do orifício (a partir do interior do tanque para o exterior).
3. Encaixe e aperte a 90 graus 3/4 "rosca cotovelo PVC ao adaptador macho para criar o tubo de escape do tanque de peixes. Adicionar um pedaço de malha fina antes de aparafusar a porca de fixação para evitar peixe-zebra passar pelo sistema de escape.
4. Coloque o tanque de peixes com seu final do tubo de escape para o espaço aberto da linha de drenagem atrás dos tanques

7. A partir do sistema de água

1. Em vários recipientes, tais como a utilizada para o reservatório, medida três vezes a quantidade de água contida no interior do sistema. Deixe que esta água repousar à temperatura ambiente para o condicionamento durante 48 horas.
2. Adicionar água para o sistema e deixá-lo circular durante um período mínimo de 3 dias.
   1. Mudar a água no sistema vigorosamente durante os primeiros 3 dias de circulação, a fim de libertar o sistema de contaminantes that residem dentro dos tubos.
3. Adicionar zebrafish arranque e permitir que o ciclo de nitrogênio para se estabelecer. Normalizar o pH para um consistente 7. Mantenha sete peixe-zebra por 1,8 L, e alimentá-los duas vezes por dia durante a semana e uma vez por dia durante a semana, como sugerido por Linbo ⁴ e ⁶ McNabb.
4. Monitorar o nitrato de (<75 mg / L), nitrito (<10 mg / L), e de amónio (0 mg / L) por dia durante a primeira semana após a adição de peixe, e duas vezes por semana, uma vez os níveis desejados foram mantidas com as mudanças de água regulares .

Resultados

Construção do sistema de bomba e Flters
Uma vez que o rack é montado e criou o primeiro passo é construir o sistema de bomba e filtro. Os filtros são ligados ao sistema de bomba e está localizado acima do nível inferior da primeira prateleira, que permite uma fácil manutenção e de substituição do filtro. Do mesmo modo, a lâmpada UV é conectado com o tubo de PVC de filtro e mantida no lugar com os plásticos de laços de fio para permitir a fácil substituição de uma lâmpada de UV, conforme necessário ...

Discussão

O principal objetivo deste artigo é demonstrar que a construção de uma instalação de peixe-zebra funcional não é complicado e pode ser construído por pesquisadores de peixes novatos com conhecimento mínimo de construção. Além disso, este artigo mostra que os materiais para esta facilidade zebrafish funcional pode ser adquirido facilmente e acessível a partir de lojas de pet locais ou lojas de ferragens. Uma vez que todos os materiais e ferramentas foram adquiridos a construção do sistema e os tanques de peixes leva cerc...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Marca do Item		Quantidade
74-in H x 48-in W x 18-in D 5-prateleiras Prateleiras de Aço Independentes Unidade	Estilo Seleções 1
Balde/Tote Geral de 18 Galões	Centrex Plastics: LLC  Rugged Tote	1
6-Outlet Power Strip Com Cabo de 15 Pés	Eletricista Mestre	1
Clarificador de Jardim de Água UV de 9 Watts FiIter e Lâmpada UV	Smartpond
Filtro de Substituição de Água para Casa Inteira	Whirlpool	6
Alojamento de Pré-Filtração para Casa Inteira Opaco	Whirlpool	2
Fita de Vedação de Rosca	William H Harvey	1
8-fl oz LO-VOC PVC Cement	Oatey
Primer LO-VOC de 8 fl oz	Oatey
1/4-in x 100-ft Tubo de Distribuição de Irrigação por Gotejamento de Vinil Mister	Landscaper
Válvula de Irrigação por Gotejamento com Barra de 1 1/4 pol.	Mister Landscaper	33
Coletor de Irrigação NPT de 9 Portas com Filtro	Mister Landscaper	6
Filtro Drop-In com Casa	Whirlpool	6
2-in Dia 90-Degree	LASCO	3
2-in Dia 90-Degree Tee	LASCO	3
3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow	LASCO	15
3/4-in Dia Adaptador de PVC	LASCO	7
3/4-in Dia Tee PVC	LASCO	12
2-in Dia Tampa PVC	LASCO	3
Adaptador de PVC de 1 polegada de diâmetro x 3/4 de diâmetro	LASCO	Soquete
3/4 pol. Válvula de esfera em linha	American Valve	Adaptador
1/2 pol. de diâmetro x 3/4 de diâmetro	Lasco	8
3/4 de diâmetro. Tubo	Lasco	1
de 2 pol. x 5 pés, Charlotte	Pipe	de 4
¾-In x 10 pés	Charlotte Pipe	3
11/16x1-7/80	SXT	10
½ ” Adaptador macho de PVC	SXT	1
¾ ” Acoplamento de PVC	SXT	1
½ ” Adaptador fêmea de PVC	SXT	1
link
1.8 L Dual Beta Keeper	Top Fin	27
¾ ” Adaptador macho PVC (com anel O #18)	SXT	28
90 graus ¾ ” cotovelo de PVC rosqueado	SXT	27
Malha Fina	N/A	1 jarda
Conector de Anteparo	N/A	1
Serra Hacksaw	N/A	1
Furadeira	N/A	1
Serra Copo	N/A	1
Chave Ajustável	N/A	1
Alicate	N/A	1
Fita métrica	N/A	1
Óculos de segurança	N/A	1
Luvas de trabalho	N/A	1

de 111Cotovelo de PVC de PVC de 2 de PVC de 5 . Tampa de PVC de PVC , tubo de PVC .Anel de PVC