O intestino delgado é freqüentemente expostos a toxinas que podem influenciar o fluxo sanguíneo e impactar negativamente a absorção de nutrientes. Usando uma artéria mesentérica e multimyograph e veia isolados, os compostos de interesse ou toxinas podem ser rastreados para a vasoactividade.
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Artigo de método
Isolando e com cortes de bovinos artéria e veia mesentérica como Bioassay teste para vasoactividade no intestino delgado
Neste artigo
Resumo
Resumo
Sistemas gastrointestinal de mamíferos são constantemente expostos a compostos (desejáveis e indesejáveis) que podem ter um efeito sobre o fluxo de sangue para ea partir desse sistema. Alterações do fluxo sanguíneo para o intestino delgado podem resultar em efeitos nas funções de absorção do órgão. Interesse particular em toxinas liberadas a partir de alimentos através de processos fermentativos e digestivos desenvolveu em ruminantes como uma área onde a eficiência produtiva pode ser melhorada. O vídeo associado a este artigo descreve um ensaio biológico in vitro desenvolvido para compostos de tela para vasoactividade em isolados secções transversais da artéria mesentérica bovina e veia utilizando um multimyograph. Uma vez que os vasos sanguíneos são montados e equilibrada no myograph, o próprio bioensaio pode ser usado: como ferramenta de triagem para avaliar a resposta contrátil ou vasoactividade de compostos de interesse; determinar a presença de tipos de receptores por receptores farmacologicamente alvo com agonista específicos; determinar o papel de um receptor com a presença de um ou mais antagonistas; ou determinar interações potenciais de compostos de interesse com antagonistas. Através de tudo isso, os dados são recolhidos em tempo real, de tecido recolhida a partir de um único animal pode ser exposto a um grande número de diferentes tratamentos experimentais (uma vantagem in vitro), e representa a vasculatura de cada lado do leito capilar para fornecer uma exacta imagem do que poderia estar acontecendo no aferentes e eferentes fornecimento de sangue apoiando o intestino delgado.
Introdução
Alterações no fluxo sanguíneo para uma cama de tecido pode ter um grande impacto sobre a função do órgão. Uma função primária do intestino delgado é a absorção de nutrientes. O fluxo de sangue arterial para a superfície de absorção do intestino é necessária para a absorção de nutrientes e aumentar o fluxo sanguíneo para ajudar a absorção de nutrientes como digesta se move ao longo da superfície 1. A diminuição do fluxo de sangue pode causar uma redução na absorção de nutrientes devido a uma diminuição do gradiente transepitelial 2. Em adição aos nutrientes, o intestino delgado, podem também ser expostos a metabolitos secundários, drogas, toxinas....
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Protocolo
Os procedimentos utilizados neste estudo não necessitam de aprovação da Universidade de Kentucky Animal Care e do Comitê Use porque há animais vivos foram usados. Antes da coleta de uma amostra aqui utilizada, todos os animais foram atordoados com um parafuso prisioneiro e sangrar. Este foi realizado em um abatedouro inspecionado pelo governo federal, da Universidade de Kentucky. Um representante oficial do USDA Food Safety Inspection Service e observado todas as atividades que lidavam com o animal vivo e manuseio da carcaça.
1 Preparação de Instrumentação
- Para minimizar a quantidade de tempo entre as colheitas das amostras de ....
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Resultados
Os vasos sanguíneos utilizados para gerar os resultados incluídos foram coletadas de seis novilhos da raça Holandesa (425 ± 8 kg), com intervalo de três semanas. Um exemplo típico de um mesentérica resposta contráctil da veia ao KCl e adições crescentes na concentração de tratamento está apresentado na Figura 2. A magnitude da resposta pode variar um pouco com o tamanho do recipiente (correlacionado com o tamanho do animal dador), mas pode também ser influenciadas (negativamente) pelo manuseio inadequad.......
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Discussão
O desafio inicial no desenvolvimento deste bioensaio foi a criação de um local de coleta repetível para a vasculatura mesentérica. Consistência sítio da amostra é crítico, como algumas das funções do intestino pequeno, a mudança durante a progressão através do jejuno e do íleo, por conseguinte, o mesentério variar segundo um padrão semelhante. Os ramos ileais da artéria mesentérica e veia foram os mais facilmente identificados através de marcos anatômicos. Ao localizar o ceco e seguindo a dobra ileocecal a seu término n.......
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Divulgações
Menção do nome comercial, produto patenteado, ou equipamento especificado, não constitui uma garantia ou garantia pelo USDA e não implica a aprovação para a exclusão de outros produtos que podem estar disponíveis.
Agradecimentos
Os autores reconhecem Ryan Chaplin e Dr. Gregg Rentfrow da Universidade de Kentucky Meats Lab e do Departamento de Animal e Ciências da Alimentação de proporcionar oportunidades para coletar tecidos experimentais aqui utilizados.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Multi Myograph | Danish Myo Technologies | 610M | Um miógrafo é crítico para este bioensaio, mas existem outras plataformas disponíveis para uso que serão suficientes. |
| Powerlab 8/sp | ADIntruments | ML785 | |
| LabChart 7 | ADInstruments | Versão 7 | |
| Kit de calibração de força | Dinamarquesa Myo Technologies | 100055 | Específico para miógrafos DMT |
| Filtro de topo de garrafa | Nalgene | 595-4520 | 0.22 μ tamanho dos poros m; Tamanho do pescoço de 45 mm # |
| 5 Jewler ' s Fórceps | Miltex | 555008FT | Qualquer marca de fórceps pode ser usada |
| Noyes Iris Scissors | Miltex 18-1510 | Qualquer marca de tesoura pode ser usada | |
| Escopo de dissecação | Zeiss | Stemi 2000-C | Qualquer marca de microscópio de luz dissecante será suficiente |
| Tecido Ajustável Matrice | Braintree Scientific | TM C12 | Isso não é crítico para o ensaio, mas reduz muito a variação de comprimento de seção para seção e acelera muito o processo de fatiamento |
| Krebs-Hensleit Buffer | Sigma-Aldrich | K3753-10x1L | Não é necessário comprar Krebs, isso pode ser feito em casa |
| Cloreto de cálcio desidratado | Sigma-Aldrich | C7902-500G | |
| Bicarbonato de sódio | Sigma-Aldrich | S5761-500G | |
| Desipramina-HCl | Sigma-Aldrich | D3900-5G | |
| Propranolol-HCl | Sigma-Aldrich | P0884-1G | |
| KCl | Sigma-Aldrich | P9333-500G | |
| 95% O2/5% CO2 | Scott Bruto | UN3156 |
Referências
- Matheson, P. J., Wilson, M. A., Garrison, R. N. Regulation of intestinal blood flow. The Journal of surgical research. 93, 182-196 (2000).
- Dobson, A. Blood flow and absorption from the rumen. Quarterly journal of experimental physiology. 69, 599-606 (1984).
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Reimpressões e permissões
