Um protocolo é desenvolvido para examinar os efeitos de um medicamento epigenético DZNep no desenvolvimento, fecundidade e sobrevivência de mosquitos. Aqui descrevemos procedimentos para a exposição aquosa de DZNep a mosquitos imaturos e uma exposição sanguínea de DZNep a mosquitos adultos, além de medir a inibição da SAH hidrolase.
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Artigo de método
Os ensaios toxicológicos para efeitos de teste de uma droga epigenética no desenvolvimento, fecundidade e sobrevivência das mosquitos de malária
Neste artigo
Resumo
Resumo
Resistência inseticida representa um grande problema para os programas de controle da malária. Os mosquitos se adaptar a uma vasta gama de alterações no ambiente rapidamente, tornando a malária controlar um problema omnipresente em países tropicais. O aparecimento de populações resistentes inseticida garante a exploração de novas vias alvo de drogas e compostos para o controle do vetor mosquito. Drogas epigenéticas estão bem estabelecidos na pesquisa do câncer, no entanto, não se sabe muito sobre os seus efeitos sobre os insetos. Este estudo fornece um protocolo simples para examinar os efeitos toxicológicos de 3 Deazaneplanocin A (DZNep), uma droga experimental epigenética para terapia de câncer, no vetor da malária, o Anopheles gambiae. Foi observado um aumento dependente da concentração na mortalidade e diminuem de tamanho em mosquitos imaturos expostos a DZNep, enquanto que o composto diminuiu a fecundidade de mosquitos adultos em relação a tratamentos de controle. Além disso, houve uma diminuição dependente da droga em S -adenosilhomocisteína (SAH) hidrolase em mosquitos actividade após exposição a DZNep tratamentos em relação ao controlo. Estes protocolos fornecem o pesquisador com um procedimento simples, passo-a-passo para avaliar vários parâmetros toxicológicos para uma droga experimental e, por sua vez, demonstrar uma abordagem multifacetada única para explorar os efeitos toxicológicos de drogas ou compostos de epigenéticos solúveis em água interesse contra mosquitos vetores e outros insetos.
Introdução
A malária é responsável pelo maior número de mortes relacionadas com o inseto no mundo. Estima-se que 219 milhões de casos ocorrem anualmente em todo o mundo, resultando em cerca de 660 mil mortes, principalmente na África 1. Apesar dos esforços concertados, os programas da malária enfrentam vários desafios. Enquanto insecticidas tratados com inseticidas e componentes-chave forma pulverização residual interna do programa, a resistência a inseticidas em populações locais impedem esses esforços 2. O rápido aumento da população de mosquitos resistentes inseticida é largamente atribuído à capacidade de os mosquitos da malária para se adaptar rapidam....
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Protocolo
NOTA: As três partes do protocolo de descrever a exposição aquosa do fármaco DZNep para mosquitos larvais, uma exposição à base de sangue de fêmeas adultas DZNep para estudar o seu efeito de fecundidade, e SAH hidrolase inibição por DZNep medida utilizando uma técnica colorimétrica simples. Uma representação esquemática destes ensaios é mostrado na Figura 1.
1. imaturos Mosquito Desenvolvimento e sobrevivência Ensaios
NOTA: Esta seção explica o uso de uma droga solúvel em água, que afeta o desenvolvimento da larva do mosquito e sobrevivência.
- Escotilha A. gambiae ovos a 28 ....
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Resultados
A Figura 1 é uma representação esquemática dos ensaios; que descreve os vários passos do processo listadas neste artigo. À medida que o protocolo baseia-se em diferentes fases da vida dos mosquitos, não existe uma sequência particular a ser seguido para as experiências aqui detalhadas. O utilizador pode escolher para conduzir um ou mais ensaios, ao mesmo tempo, dependendo da disponibilidade de amostras.
A Figura 2 demonstra o prato criado para o desen.......
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Discussão
Há vários passos vitais para o sucesso da aplicação deste protocolo. Para o ensaio larval, deve ser tomado cuidado para rotular e replicar cada concentração de ensaio corretamente. Randomizing amostras de ensaio e adicionar a quantidade designada de droga para as respectivas cavidades de teste é uma parte importante desta montagem experimental. Antes de adicionar 2 nd larvas de mosquito para a microplaca de 96 poços, cada larva pode ser colocado sobre uma toalha de papel para 2-3 segundos para remover o exces.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Agradecemos a Victor Marquez por fornecer DZNep.HCl e Scotty Bolling por fabricar os alimentadores de sangue. As cepas Mopti e SUA2La de An. gambiae foram obtidas do Centro de Recursos de Reagentes de Referência e Pesquisa da Malária (MR4). Este trabalho foi apoiado pelo Fralin Life Science Institute e pela doação do National Institutes of Health 1R21AI094289 para Igor V. Sharakhov.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Microplaca de 96 poços | Fisher Scientific | 12565561 | |
| Placa de cultura de células | CytoOne | CC7682-7506 | |
| Centrífuga | Sorvall Fresco | 76003758 | Uma centrífuga diferente pode ser usada |
| Rolos de fita colorida | Fisher | S68134 | |
| Microscópio de dissecção | Olympus | SZ | |
| DTNB | Sigma Aldrich | D8130 | |
| DZNep.HCl | Sigma Aldrich | SMLO305 | |
| Copos para pratos de | |||
| Papéis de filtro | Fisher | 09-795E | |
| Alimentadores de vidro | Virginia Tech | ||
| Homogeneizador | |||
| Elemento de aquecimento | Fisher Scientific | NC0520091 | |
| Incubadora | Percival scientific | I36VLC8 | Uma incubadora diferente pode ser usada |
| Tubo de microcentrífuga, 2 ml | Axygen | 22-283 | |
| Tubo de Microcentrífuga, 1.5 ml | Micropipeta Axygen | MCT-150-C | |
| Eppendorf | 4910 000.069 | ||
| Na2HPO4 | Fisher Scientific | M-3154 | |
| NaH2PO4Medidor de | Fisher Scientific | M-8643 | |
| Mettler Toledo 7easy | S20 | ||
| Leitor de placas | Spectramax | M2 | |
| SAH | Sigma Aldrich | A9384 | loja em -20 ° C |
| Triton X-100 | Sigma Aldrich | T8787 |
Referências
- CDC Report. , Available from: http://www.cdc.gov/malaria (2010).
- Gatton, M. L., et al. The importance of mosquito behavioural adaptations to malaria control in Africa. Evolution; International Journal of Organic Evolution. 67, 1218-1230 (2013).
- Sternberg, E. D., Thomas, M. B.
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Reimpressões e permissões
