Otimizado Ex-ovo A cultura de Chick embriões para estágio avançado de desenvolvimento

Resumo

Visualizar e acessar o embrião de galinha durante o desenvolvimento pode ser um desafio. Desenvolvemos um método ex ovo que é simples, econômico e pode ser facilmente usado em sala de aula ou ambiente de pesquisa. Este método fornece acesso ao embrião em estágios finais do desenvolvimento embrionário (HH 40).

Resumo

A pesquisa em anatomia, embriologia e biologia do desenvolvimento tem se baseado amplamente no uso de organismos modelo. Para estudar o desenvolvimento em embriões vivos, organismos modelo, como a galinha, são frequentemente usados. A galinha é um excelente organismo modelo devido ao seu baixo custo e manutenção mínima, porém apresenta desafios observacionais por estar encerrada em uma casca de ovo opaca. Para visualizar adequadamente o embrião à medida que ele se desenvolve, a casca deve ser janela ou removida. Ambas as técnicas de janela e ex ovo foram desenvolvidas para auxiliar os pesquisadores no estudo do desenvolvimento embrionário. No entanto, cada um dos métodos tem limitações e desafios. Aqui, apresentamos uma técnica simples e otimizada de cultura ex ovo para embriões de galinha que permite a observação do desenvolvimento embrionário desde o estágio HH 19 até os estágios finais de desenvolvimento (HH 40), quando muitos órgãos se desenvolveram. Essa técnica é fácil de adotar tanto em aulas de graduação quanto em laboratórios de pesquisa mais avançados, onde são realizadas manipulações de embriões.

Introdução

A cultura ex ovo tem desempenhado um papel importante no estudo do desenvolvimento do frango^{1, 2}. Esse método de cultura tem sido usado para estudar doenças neurológicas, desenvolvimento de membros, desenvolvimento craniofacial e como modelo para investigar malformações associadas ao diabetes ^{3, 4, 5}.

Existem muitas variações na técnica ex ovo. A abordagem mais comum é usar um copo de isopor^6,7,8 ou uma tigela de vidro⁵. Nesses métodos, o copo ou tigela é forrado com filme plástico para embalar o embrião, uma tampa é colocada no copo e o embrião é então colocado em uma incubadora....

Protocolo

Nota: Todas as fontes estão listadas na Tabela 1.

1. Armazenar o frango Embriões

1. Incubar ovos de galinha da estirpe Gallus gallus horizontalmente a 37 ^o C, com aproximadamente 40% de umidade e virar ovos uma vez ou duas vezes por dia. Voltando ovos é importante para evitar o embrião de aderir a casca do ovo.
2. Não para não transformar o ovo no 24 horas antes da criação da cultura de outra forma o embrião será localizado ventral à massa de gema e será danificado ao abrir o ovo no passo 3. Além disso, manter os ovos a 4 ^o C graus para não mais do que uma semana antes de incubação para o dese....

Resultados

Este ex ovo método permite a observação de embriões a partir de estágios iniciais de desenvolvimento (HH 19/20) para estágios finais de desenvolvimento (HH 40-41) (Figura 1A e 1B). Configurando a cultura no HH 19-20 aumenta a capacidade de sobrevivência dos embriões na cultura. Antes do giro (antes de 53 hpf) a capacidade de sobrevivência é muito baixa em cultura e após a etapa 21, o embrião tende a ficar mais para o shell sobre a remoção de modo são obtidas menos embriões inta.......

Discussão

Ex ovo cultura e de janelas ambos têm vantagens e desafios. Aqui vamos comparar as vantagens e os desafios do isopor cup ex ovo método eo método de janelas para o nosso ex otimizado ovo método mostrado aqui. Nosso método permite a manipulação e fácil observação do embrião de galinha em estágios finais de desenvolvimento e os nossos aperfeiçoamentos da ex tradicional ovo método ^{1, 2, 3} torná-lo também muito fácil de usar em aulas de graduação de laboratório.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Penicilina/Estreptomicina	Sigma	P4458	Faça pequenas alíquotas para evitar eventos de congelamento/descongelamento
		de Petri quadrada	9,5 cm x 9,5 cm
Pesar Barco	Fischer Scientific	8732113	88 x 88 x 23 mm
Recipiente Ziplock	Ziplock	N/A	12 cm x 12 cm x 6 cm

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