Timectomia completo em ratos adultos com não-invasiva entubação endotraqueal

Resumo

A timectomia com roedores é uma técnica valiosa na pesquisa imunológica. Aqui, é descrito um protocolo para timectomia completa em ratos adultos usando uma miniesternotomia juntamente com intubação não invasiva e ventilação com pressão positiva para minimizar a morbidade e mortalidade perioperatórias.

Resumo

Timectomia em roedores neonatais é um procedimento estabelecido e confiável para estudos imunológicos. No entanto, em ratos adultos, complicações de hemorragia e pneumotórax de ruptura pleural pode resultar numa taxa de mortalidade significativa. Este protocolo é um método simples de thymectomy rato que utiliza um mini-esternotomia e entubação endotraqueal. Intubação é realizado com um método não-invasivo e de fácil reprodução e permite a ventilação com pressão positiva para evitar pneumotórax e uma via aérea controlada que permite tempo suficiente para a dissecção timo cuidado para minimizar a interrupção pleural. A 1,5 centímetros incisão esternal diminui o contato com os vasos do mediastino e pleura, enquanto ainda fornece a visualização completa do timo. Após a exposição do mediastino, o timo é removido por dissecção romba sob ampliação. O espaço pleural é então selado por fecho de sutura dos músculos pré-traqueal, seguido pela aplicação de cola cirúrgica. Otórax é então fechada por sutura de encerramento do esterno, seguido por fecho de sutura da pele. Todos os timectomias estavam completos como evidenciado pela imuno-histoquímica (IHQ) coloração de tecidos do mediastino, e ausência de células T naive por citometria de fluxo, e que o processo tinha uma taxa de sobrevivência de 96%. Esse método é apropriado quando a timectomia completa com o mínimo de complicações é desejado para mais estudos imunológicos em ratos atímicos adultos.

Introdução

Desde o início da década de 1960, o timo foi reconhecido o papel crítico no desenvolvimento da tolerância imunológica central. Roedor timectomia provou ser um processo essencial para definir o papel do timo na diferenciação de linfócitos, a auto-tolerância, e imunotolerância na definição de transplante aloenxerto e metástase do tumor. A remoção do timo do rato permite a estudos que envolvem a depleção de células T ou a transferência adoptiva de populações de células T definidos, sem o reaparecimento de células T naive nativas.

Timectomias em roedores neonatais pode ser realizada utilizando uma técnica de sucção com resultados fiáveis

Protocolo

NOTA: Todos os procedimentos experimentais que envolvam a utilização de ratos foram feitas de acordo com os protocolos aprovados pelo cuidado e uso Comitê da Universidade de Duke Animal.

1. Preparação da intubação traqueal Cannula

1. Corte a ponta da agulha de um 2 polegadas 14 G angiocathether agulha com alicate de corte.
2. Comprima o lúmen da agulha fechado com alicate de bico.
3. Corte a parte comprimida para baixo à extremidade da porção de lúmen aberto com alicates de corte, e depois cortar as extremidades de ambos os lados da extremidade remanescente a 30 - 45 ° ângulo da borda da agulha.
4. Coloque a p....

Resultados

Este procedimento foi realizado em ratos Lewis adultos (n = 26). O tempo médio de operação foi de 15 ± 3 min. Não houve mortalidade intra-operatória. O tempo de intubação média - de colocação de rato em cima do aparelho de intubação para o estabelecimento da ventilação - foi de 45 ± 5 segundos. 24 ratos tiveram uma recuperação completa da operação, sem evidência de dificuldades respiratórias ou hemorragia através dia de pós-operatório (DPO) 14. Um rato desenvolvido dificuldade respiratória em POD 4 e foram submetidos a .......

Discussão

O presente protocolo para thymectomy completa fornece uma abordagem minimamente invasiva com um fecho de incisão de três camadas com aplicação de cola cirúrgica projetado para minimizar as complicações. A remoção completa do timo foi demonstrado pela perda de células T naive e por IHC coloração do tecido linfóide do mediastino para citoqueratina.

O procedimento de thymectomy rato adulto tem sido complicada por taxas de mortalidade variando de 1,5 - 20% devido a complicações peri-operatórias,.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
			2 polegadas 14 G
Microscópio cirúrgico	Zeiss
Almofada
Monitor de frequência cardíaca e oxigenação sanguínea para roedores com sensores de pé	Aparelho Harvard	ST1 72-8010, ST1 72-8098 (sensor de pé de rato)
Aparelho de intubação (plástico com barra de metal na parte superior)			Ver Figura 2
de anestesia para pequenos animais com caixa de indução, tanque de isoflurano e tanque de O2	Harvard Apparatus	ST1 72-6420
Ventilador para pequenos animais com tubulação	CWE	12-02000 (ventilador) e 12-04000 (conjunto de válvula externa para camundongos/ratos)
Iluminador de fibra óptica de alta intensidade	Dolan Jenner	EEG 2823M
Pinça de padrão padrão do aluno	Ferramentas de Belas Ciências	91100-16
Tesoura reta fina	Ferramentas de Ciências Finas	14060-09
Tesoura de karité de ponta romba	Ferramentas de Ciências Finas	14105-12
Afastador de Alm Pequeno (para esterno)	Ferramentas de Ciências Finas	17008-07
Pinça de Graefe sem corte	Ferramentas de Ciências Finas	11050-10
Pinça Dumont Fine	Ferramentas de Ciências Finas	11254-20
5-0 Suturas Maxon	Ethicon
4-0 Suturas de seda (com agulha cortante)	Sutura de nylon Ethicon
6-0	Cola
(Endermil)
Gel de lubrificação	Akorn Animal Saúde	NDC 17478-162-35

Angiocateter de de aquecimentoSistema de cianoacrilato Ethicon