O objetivo deste protocolo é demonstrar os princípios e técnicas para medir e calcular a taxa de filtração glomerular, a taxa de fluxo de urina e a excreção de sódio e potássio em um rato. Esta demonstração pode ser usada para fornecer aos alunos uma compreensão conceitual geral de como medir a função renal.
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Artigo de método
Laboratório de Fisiologia Demonstração: Taxa de filtração glomerular em um Rat
Neste artigo
Resumo
Resumo
As medidas da taxa de filtração glomerular (TFG) e da excreção fracionada de sódio (Na) e potássio (K) são críticas na avaliação da função renal na saúde e na doença. A TFG é medida como a depuração renal da inulina no estado estacionário, que é filtrada no glomérulo, mas não secretada ou reabsorvida ao longo do néfron. A excreção fracionada de Na e K pode ser determinada a partir da concentração de Na e K no plasma e na urina. A depuração renal da inulina pode ser demonstrada em um animal anestesiado que possui cateteres na artéria femoral, veia femoral e bexiga. Os equipamentos e suprimentos usados para este procedimento são aqueles comumente disponíveis em uma instalação central de pesquisa e, portanto, tornam este procedimento um meio prático para medir a função renal. O objetivo deste vídeo é demonstrar os procedimentos necessários para realizar uma demonstração laboratorial na qual a função renal é avaliada antes e depois de um medicamento diurético. A técnica apresentada pode ser utilizada para avaliar a função renal em modelos de doença renal em ratos.
Introdução
A função mais importante do rim é a regulação homeostática da água extracelular e do conteúdo eletrolítico. Os rins regulam de perto a água extracelular, o sódio (Na) e o potássio (K) para manter os níveis fisiológicos normais. Distúrbios na função renal podem resultar em distúrbios metabólicos graves que podem ser fatais. O processo renal básico ocorre no néfron e começa com a filtração do plasma no glomérulo e termina com a excreção de urina. Outros processos que determinam a concentração final de água, Na e K na urina são secreção e reabsorção dentro do néfron. As medições da taxa de filtração glomerular (TFG) e da excreção fracionada de Na e K são críticas na aval....
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Protocolo
Antes de qualquer procedimento animal, o cuidado com os animais e uso comitê institucional (IACUC) deve aprovar o protocolo. Este protocolo foi aprovado pela Michigan State University IACUC.
1. Preparação de pré-laboratório de solução de FITC-inulina
- Aqueça 20 ml de solução salina a 70 ° C e agita-se lentamente em 100 mg de FITC-inulina (5 mg / ml de FITC-inulina) de inulina é até que todo dissolvido.
- Solução arrefecer até à TA e adicionar 800 mg de albumina de soro de bovino (40 mg / ml de BSA, em pó liofilizada, essencialmente livre globulina, baixa endotoxina, ≥98% de pureza por electroforese em gel de agaro....
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Resultados
O diurético usado no laboratório demonstração foi furosemida que muito rapidamente inibe a reabsorção de Na e K filtrada pelo rim, resultando em aumento de Na, K, e a excreção de água dentro de minutos após a administração da droga. Por seu mecanismo primário, furosemida deve ter efeitos mínimos sobre a TFG e da carga filtrada de Na e K, mas vai aumentar o fluxo de urina, e fração de excreção de Na e K.
Os resultados representativos da Tabela 3 mostram que, num rato anestesi.......
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Discussão
Um marcador apropriado para a medição de GFR deve atender quatro critérios: ser livremente filtrada no glomérulo, ser independente para proteínas do plasma, e nem ser absorvido nem secretada no néfron. A inulina é um polímero de frutose, que satisfaz estes critérios. Como resultado, a depuração renal da inulina é considerada o padrão ouro para medir GFR 7. A técnica demonstrada representa a abordagem tradicional da determinação da eliminação renal de inulina utilizando recolhas de urina cronometrados durante .......
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Divulgações
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes. As opiniões ou afirmações contidas neste documento são os pontos de vista particulares do autor e não devem ser interpretadas como funcionário ou como refletindo os pontos de vista do Departamento do Exército ou do Departamento de Defesa.
Agradecimentos
A fonte de financiamento para a demonstração laboratório estava concessão NIGMS: GM077119. Agradecemos ao Dr. Joseph R. Haywood e Dr. Peter Cobbett pelo apoio do Short Couse em Integrative e Órgão Sistemas de Farmacologia. Agradecemos também a Senhora Hannah Garver por seu apoio técnico da demonstração laboratorial.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Sutura Cirúrgica de Seda Trançada 5-0 | Surgical Specialties Corp | SP1033 | |
| Placa de Ensaio, 96-Well | Costar | 3922 | |
| Albumina de Soro Bovino | Sigma Chemical Co | A2934-25G | |
| Centrífuga | Beckman Coulter | MicroFuge 18, 357160 | |
| Tubos de Amostra Cônicos | Dot Scientific Inc. | #711-FTG | |
| Aplicadores com Ponta de Algodão | Solon Manufacturing Co | 56200 | |
| ADInstruments | LabChart Pro 7.0 | ||
| Balança Digital | Denver Instrument | APX-4001 | |
| FITC-Inulina | Sigma Chemical Co | F3272-1G | |
| Esponjas de Gaze | Covidien | 2146 | |
| Cama Cirúrgica Aquecida | EZ-Anestesia | EZ-212 | |
| Heparina | Sagnet | NDC 25021-402-10 | |
| HEPES | Sigma Chemical Co | H3375 | |
| Isoflurano | Abbott Animal Health | IsoFlo, 5260-04-05 | |
| Vaporizador de Isoflurano | EZ-Anestesia | EZ-190F | |
| Micro Dissecação Fórceps | Biomedical Research Instruments Inc. | Leitor de Microplacas 70-1020 | |
| - Fluoroskan | ThermoScientific | Ascent FL, 5210460 | |
| NOVA 5+ Analisador de Sódio/Potássio | NOVA BioMedical | 14156 | |
| Porta-agulhas Olsen-Hegar com Tesoura | Ferramentas de Ciência Fina | 12002-12 | |
| PE-190 (para cateter de bexiga) | BD Medical | 427435 | |
| Transdutor de Pressão& nbsp; | ADInstruments | MLT1199 | |
| Pyrex Culture Tubes | Corning Inc. | 99445-12 | |
| Cateter de Artéria Cônica Femoral de Rato | Aplicações Estratégicas Inc. | RFA-01 | |
| Salix Furosemida 5% | Intervet | # 34-478 | |
| Estrabismo Tesoura | Fine Science Tools | 14075-11 | |
| Tesoura Cirúrgica para Estudantes | Ferramentas de Ciências Finas | 91402-12 | |
| Luvas Cirúrgicas | Kimberly-Clark | Sterling Nitrile Gloves | |
| Bomba de seringa | Razel Scientific | R99-E | |
| Fórceps de Tecido | Fine Science Tools | 91121-12 | |
| Tesoura de Tecido | George Tiemann Co | 105-420 | |
5-0 Sutura Cirúrgica de Seda Trançada Surgical Specialties Corp SP1033 Placa de Ensaio, 96-Well Costar 3922 Albumina de Soro Bovino Sigma Chemical Co A2934-25G Centrífuga Beckman Coulter MicroFuge 18, 357160 Tubos de Amostra Cônicos Dot Scientific Inc. #711-FTG Aplicadores com Ponta de Algodão Software de Aquisição de Dados Solon Manufacturing Co 56200 ADInstruments LabChart Pro 7.0 Digital Balança Denver Instrument APX-4001 FITC-Inulina Sigma Chemical Co F3272-1G Esponjas de Gaze Covidien 2146 Cama Cirúrgica Aquecida EZ-Anesthesia EZ-212 Heparina Sagnet NDC 25021-402-10 HEPES Sigma Chemical Co H3375 Isoflurano Abbott Animal Health IsoFlo, 5260-04-05 Vaporizador de Isoflurano EZ-Anesthesia EZ-190F Micro Dissecting Forceps Biomedical Research Instruments Inc. 70-1020 Leitor de Microplacas - Fluoroskan ThermoScientific Ascent FL, 5210460 NOVA 5+ Analisador de Sódio/Potássio NOVA BioMedical 14156 Olsen-Hegar Porta-agulhas com Tesoura Ferramentas de Ciência Fina 12002-12 PE-190 (para cateter de bexiga) BD Medical 427435 Transdutor de Pressão ADInstruments MLT1199 Pyrex Culture Tubes Corning Inc. 99445-12 Cateter de Artéria Cônica Femoral de Rato Strategic Applications Inc. RFA-01 Salix Furosemida 5% Intervet #34-478 Tesoura de Estrabismo Fine Science Tools 14075-11 Tesoura Cirúrgica para Estudantes Fine Science Tools 91402-12 Luvas Cirúrgicas Kimberly-Clark Sterling Luvas de Nitrilo Bomba de seringa Pinça de Tecido Razel Scientific R99-E Fine Science Tools 91121-12 Tesoura de Tecido George Tiemann Co 105-420 |
Referências
- Silverthorn, D. U. Human Physiology: An integrated approach. , Pearson. (2012).
- Hall, J. E. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , 303-344 (2011).
- Levey, A. S.
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Reimpressões e permissões
