A imagem de ultrassom com contraste aprimorado é uma ferramenta in vivo confiável para quantificar o fluxo sanguíneo da medula espinhal em um modelo experimental de lesão da medula espinhal de rato. Este artigo contém um protocolo abrangente para aplicação desta técnica em associação com um modelo de contusão de lesão medular torácica.
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Artigo de método
Contraste melhorado Ecografia de Avaliação da Medula Espinhal fluxo de sangue em Experimental lesão medular
Neste artigo
Resumo
Resumo
Redução do fluxo de sangue da medula espinal (FSME) (isto é, isquemia) desempenha um papel-chave na lesão traumática da medula espinal (SCI) patofisiologia e é, portanto, um importante alvo para terapias neuroprotectores. Embora vários técnicas tenham sido descritas para avaliar FSME, todos eles têm limitações significativas. Para superar este último, propomos o uso de tempo real de imagens de contraste melhorado ultra-som (CEU). Aqui nós descrevemos a aplicação desta técnica em um modelo de rato de contusão SCI. Um cateter jugular é implantada em primeiro lugar para a injecção repetida do agente de contraste, uma solução de cloreto de sódio de hexafluoreto de enxofre microbolhas encapsuladas. A coluna é então estabilizada com um 3D-frame feito por encomenda e da medula espinhal dura mater é exposto por uma laminectomia em ThIX-ThXII. A sonda de ultra-sons é, então, posicionado no aspecto posterior da dura-máter (revestidas com gel de ultra-som). Para avaliar FSME linha de base, uma única injecção intravenosa (400 ul) de contrapartidaagente é aplicado r para gravar a sua passagem intacta através da microvasculatura da medula espinal. Um dispositivo de peso-gota é subsequentemente utilizado para gerar um modelo experimental reproduzível contusão da SCI. Agente de contraste é reinjetado 15 min após a lesão para avaliar as mudanças pós-SCI SCBF. CEU permite em tempo real e in vivo avaliação de alterações SCBF após uma lesão medular. No animal ileso, ultra-sonografia mostrou fluxo sanguíneo irregular ao longo da medula espinhal intacta. Além disso, 15 minutos após a SCI, houve isquemia crítica no nível do epicentro enquanto FSME ficaram preservados nas áreas mais remotas intacta. Nas regiões adjacentes do epicentro (ambos rostral e caudal), FSME foi significativamente reduzida. Isto corresponde à "zona de penumbra de isquemia" anteriormente descrito. Esta ferramenta é de grande interesse para a avaliação dos efeitos das terapias destinadas a limitar a isquemia e necrose do tecido resultante após a SCI.
Introdução
Lesão medular traumática (SCI) é uma condição devastadora levando a prejuízo significativo no motor, sensorial e funções autônomas. Até à data, nenhum tratamento tem demonstrado a sua eficácia em pacientes. Por tal razão, é importante para identificar novas técnicas que irão melhorar a avaliação dos tratamentos potenciais e pode elucidar melhor lesão pathiophysiology 1.
SCI é dividido em duas fases sequenciais, como a que se refere a lesões primárias e secundárias. A lesão primária corresponde ao insulto mecânica inicial. Considerando que os grupos de lesões secundárias uma cascata de vários eventos biológicos (como a inflamaçã....
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Protocolo
NOTA: Os métodos descritos neste manuscrito foram aprovados pelo comitê de bioética da Faculdade de Medicina Lariboisière, Paris, França (CEEALV / 2011-08-01).
1. Instrumento Preparação
- Prepare e limpe os seguintes instrumentos para a inserção do cateter: micro-fórceps, tesouras, micro-micro-vascular braçadeira, grandes tesouras, linha cirúrgica (Black trançado de seda 4-0) e um cateter 14 G. Heparinizar o cateter com uma solução de heparina (5000 U / mL).
- Prepare e limpe os seguintes instrumentos para a laminectomia: grandes tesoura, bisturi e um cortador de osso. Realizar laminectomia com um cortador de osso feito p....
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Resultados
Com o protocolo descrito acima, é possível mapear o FSME ao longo de um segmento de coluna vertebral sagital longitudinal.
Na medula espinal intacta, parece haver irregularidades FSME dentro do parênquima (Figura 12). Isto pode ser explicado pela distribuição variável de artérias radiculo-medular (RMA) a partir de um animal para outro. RMA refere-se a segmentar artérias que atingem a artéria espinal anterior (ASA) e, portanto, fornecer o fornecimento de sangue para o parênqu.......
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Discussão
Embora tenhamos descrito como usar CEU em um modelo de contusão SCI rato, este protocolo pode ser modificado para atender outros objetivos experimentais ou modelos SCI. Optamos por medir SCBF em apenas dois momentos (antes da lesão e 15 min pós-SCI), no entanto o número de pontos de tempo eo atraso entre as medidas SCBF pode ser adaptado para atender as necessidades de outros estudos. Por exemplo, no nosso trabalho anterior 17, que mediram FSME em cinco pontos de tempo sucessivos durante a primeira hora de pó.......
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Divulgações
Os autores declaram que não têm conflito de interesses financeiros concorrentes. A máquina de ultrassom foi gentilmente emprestada pela empresa Toshiba France. A bomba Vueject foi gentilmente emprestada pela empresa Bracco France.
Agradecimentos
Agradecemos a Stephanie Gorgeard, Thierry Scheerlink (Toshiba França) e Christophe Lazare (Bracco França).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Fixador externo Hoffman 3 | Stryker, Kalamazoo, EUA | Sistema modular usado para construir a estrutura 3D personalizada e o braço articulado segurando a sonda de ultrassom | |
| Toshiba Applio | Toshiba, Tóquio, Japão | Máquina de ultrassom | |
| Sonovue | Bracco, Milão, Itália | Agente de contraste: microbolhas | |
| Bomba Vueject | Bracco, Milão, Itália | Bomba elétrica para infusão de bolus de microbolhas | |
| Gel de ultrassom Aquasonic Parker | Laboratories, Fairfield, NJ, EUA | Gel de ultrassom usado para transmitir as ondas de ultrassom | |
| Isovet | Piramal Healthcare, Mumbai, Índia | Isoflurano usado para anestesia | |
| Ultra Extend | Toshiba, Tóquio, Japão | Software usado para quantificação do fluxo | |
| sanguíneo da medula espinhalConjunto de Mini-alicates de Cinco Peças Mastercraft, Produto #58-4788-6 | Pneu Canadense, Toronto, Canadá | Conjunto de alicates para trabalho "faça você mesmo |
Referências
- Cadotte, D. W., Fehlings, M. G. Spinal cord injury: a systematic review of current treatment options. Clin Orthop Relat Res. 469 (3), 732-741 (2011).
- Beattie, M. S., Farooqui, A. A., Bresnahan, J. C. Review of current evidence for apoptosis after spinal cord injury. <....
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Reimpressões e permissões
