Avaliação da Função Renal Zebrafish Usando um teste de eliminação fluorescente

Summary

O peixe-zebra é uma ferramenta popular para modelar doença renal crônica (DRC). No entanto, seu pequeno tamanho torna impossível avaliar a função renal através de métodos tradicionais. Nós descrevemos um teste de eliminação fluorescente rim corante ^1, que permite a análise quantitativa da função renal zebrafish em CKD.

Abstract

O embrião de peixe-zebra oferece um modelo tratável para estudar a organogênese e modelo de doença genética humana. Apesar da sua relativa simplicidade, o rim do peixe-zebra e desenvolve funções em quase da mesma maneira como os seres humanos. Uma diferença importante na construção do rim humano é a presença de milhões de nefrónios em comparação com o peixe-zebra que possui apenas dois. No entanto, simplificando um sistema tão complexo em unidades funcionais básicas ajudou nossa compreensão de como o rim desenvolve e opera. No peixe-zebra, a linha média localizada glomérulo é responsável pela filtragem do sangue inicial em duas túbulos pronephric que divergem para funcionar bilateralmente a partir do eixo embrionário antes da fusão para o outro na cloaca. Os túbulos pronephric são fortemente povoada por cílios motilidade que facilitam a circulação de filtrado ao longo do túbulo segmentada, permitindo a troca de vários solutos antes de finalmente sair através da cloaca ^2-4. Muitos genes responsáveis ​​pela DRC, including aqueles relacionados à ciliogênese, têm sido estudadas em peixes-zebra ^5. No entanto, um grande atrativo para trás tem sido a dificuldade em avaliar a função renal zebrafish após manipulação genética. Ensaios tradicionais para medir a disfunção renal em humanos provaram não translacional de peixe-zebra, principalmente devido ao seu ambiente aquático e pequeno porte. Por exemplo, não é fisicamente possível para extrair sangue de peixes embrionários encenado para análise do teor de ureia e creatinina, como eles são muito pequenos. Além disso, o peixe-zebra não produzem urina suficiente para testar em um simples proteinúria 'vareta', que muitas vezes é realizado durante os exames iniciais dos pacientes. Descreve-se um ensaio fluorescente que utiliza a transparência óptica do peixe-zebra para monitorar quantitativamente a depuração de um corante fluorescente, ao longo do tempo, a partir da vasculatura e para fora através do rim, para dar uma leitura de função renal ^1,6-9.

Introduction

O rim humano desempenha um papel crucial na filtragem de resíduos metabólicos do sangue e recuperando os solutos necessários para manter a homeostase celular. Há um número de doenças genéticas humanas que causam disfunção renal. A doença renal hereditária mais comum é a doença renal policística autossómica dominante (ADPKD) caracterizada pelo desenvolvimento de sacos cheios de fluido dentro dos túbulos nefríticos; os danos causados ​​por cistogénese é prejudicial para a função renal ^{a 10.} ADPKD tem uma ocorrência de 1: 800-1: 1000 e responsável por 8 - 10% de doentes com insuficiência renal em fase terminal (ESRF) ^11. Vários genes têm sido impli....

Protocol

Declaração de Ética: Animal de manutenção, criação e procedimentos são definidos e controlados pelos Animais (Scientific Procedures) Act de 1986. Todos os experimentos com animais foi efectuada ao abrigo de licenças concedidas pelo Ministro da Administração Interna (PIL No. 70/7892), em conformidade com Biológica Serviços de Gestão do Grupo e da Comissão de Ética do Serviço Biológica, SGUL, Londres, Reino Unido. Foram feitos todos os esforços para reduzir o número de animais utilizados para refinar e ambos os procedimentos e pecuária, a fim de minimizar o sofrimento e melhorar o bem-estar.

1. Preparação de Instrumentos, anestésico, e corant....

Results

A síndrome de Bardet-Biedl (BBS) é um ciliopathy heterogêneo rara que afeta cerca de 1: 160 mil pessoas em todo o mundo ^16. Os pacientes apresentam uma série de problemas associados, incluindo rins policísticos, posteriormente pacientes frequentemente necessitam de diálise ou transplante renal ^24. ESRF é a causa mais comum de morte em BBS, com cerca de 30% dos pacientes em desenvolvimento CKD ^16. Actualmente, 20 genes não relacionados têm sido implicados em BBS sem associação genótipo-fe.......

Discussion

Zebrafish oferecer uma ferramenta valiosa para modelar doença genética humana, a sua utilização como um instrumento científico para a pesquisa in vivo têm permitido estudos detalhados sobre a repartição genética de muitos sistemas biológicos, incluindo o rim. Muito se agora sabe sobre como o rim zebrafish desenvolve e funções. As semelhanças com nefrogênese humana e homologia com a doença que causa genes ²¹ ilustrou como peixe-zebra tornaram-se fundamentais na compreensão de como defeitos em.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
P-97 SUTTER Extrator de micropipetas tipo flamejante/marrom	Intracel	P-97
borosilicato capilares de parede padrão	Harvard Apparatus	30-0017
lâminas de microscópio de vidro	VWR International	631-0109
Cola de resina epóxi	Evo-Stik
Rodamina B 10.000 MW rotulada Dextran	Life technologies	D-1824
N-Feniltiourea	Sigma-Aldrich	P7629
Azul de metileno	Sigma-Aldrich	M9140
Etil 3-aminobenzoato metanossulfonato sal	Sigma-Aldrich	A5040
metilcelulose	Compressor de ar Sigma-Aldrich	M0512
	Jun-Air	OF302-15
Picospritzer III	Instrumentos Parker	051-0500-900
Micromanipulador de Controle Compacto de 3 Eixos	Marzhauser	MM33
Microscópio estéreo de dissecação	Pontas de	SMZ1000
	Eppendorf	5242956003
Dumont #5 fórceps	Micrômetro de estágio Sigma-Aldrich	F6521
	Pyser- SGI	02A00404