Instrumentação de Perto prazo Sheep Fetal para multivariadas crônicas não-anestesiados Recordings

Resumo

O modelo de fetos de ovelhas não-anestesiado cronicamente instrumentados é usado para estudar o desenvolvimento fetal humano na saúde e na doença, pois permite a colocação cirúrgica e manutenção de cateteres e eletrodos, coleta de sangue repetitivo, injeção de substância, a gravação da atividade bioelétrica, e in vivo de imagens. Nós descrevemos os procedimentos necessários para estabelecer este modelo.

Resumo

A ovelha prenhe cronicamente instrumentada tem sido usada como modelo de desenvolvimento fetal humano e respostas a estímulos fisiopatológicos, como endotoxinas, bactérias, oclusões do cordão umbilical, hipóxia e vários tratamentos farmacológicos. As práticas clínicas que salvam vidas do tratamento com glicocorticóides em fetos com risco de parto prematuro e a hipotermia terapêutica foram desenvolvidas neste modelo. Isso se deve à facilidade única do feto ovino não anestesiado à colocação cirúrgica e manutenção de cateteres e eletrodos, permitindo amostragem repetitiva de sangue, injeção de substâncias, registro de atividade bioelétrica, aplicação de estimulação elétrica e imagem de órgãos in vivo. Aqui descrevemos o procedimento de instrumentação cirúrgica necessário para obter um modelo fetal estável de ovelhas não anestesiadas cronicamente instrumentadas, incluindo a caracterização da recuperação pós-operatória dos pontos de vista gasométrico, metabólico e inflamatório.

Introdução

Uma variedade de modelos animais existem para o estudo de ambas as gravidezes normais e comprometidos, incluindo roedores de laboratório, primatas não humanos e animais domésticos. ^1,2,3,4,5 As ovelhas cronicamente instrumentadas grávida tem sido amplamente utilizado há 50 anos como um modelo de desenvolvimento fetal humano e respostas a estímulos fisiopatológicos como lipopolissacarídeo (LPS). ^6-10 As lesões após exposição LPS imitar exatamente o que é visto em prematuros com leucomalácia periventricular, que é devido a um perfil de maturação similar de ambas as espécies. ^{11, 12}

Outras complicações na gra....

Protocolo

Cuidados com os animais seguiu as diretrizes do Canadian Council on Animal Care e da aprovação pelo Conselho de Montréal Université on Animal Care (protocolo nº 10 Rech-1560). Informações pormenorizadas sobre materiais e os métodos utilizados são fornecidas na Tabela 1.

1. Anestesia

1. Inserir um cateter de lúmen único numa veia jugular.
2. Sedar o ovelha utilizando acepromazina (Atravet 10 mg / mL) por via intravenosa de 2 mg cerca de 30 minutos antes da indução da anestesia, a fim de reduzir o stress associado com o procedimento que por sua vez reduz os níveis de cortisol.
3. Administrar o diazepam (diazepam 5 mg /....

Resultados

38 ovelhas datado de tempo grávidas foram instrumentados em 128 ± 2 dias de gestação (DGA, ~ 0,88 gestação, termo 145 DGA) com arterial, venosa e cateteres amniótico e eletrocardiograma (ECG) eletrodos com técnica estéril sob anestesia geral (tanto ovelha e feto ). Em caso de gravidez duplo o feto maior foi escolhido com base na palpação e estimar o diâmetro inter-temporal; alternativamente, o feto deve ser instrumentado podem ser selecionados aleatoriamente para evitar qualquer viés potencial ou ambos os fetos podem se.......

Discussão

O anestésico e procedimentos cirúrgicos que são apresentados são necessários para o estabelecimento de um modelo animal para o estudo da fisiologia e patofisiologia fetal: as ovelhas não anestesiados fetal cronicamente instrumentadas.

Quatro passos críticos no âmbito do protocolo deve ser enfatizada. Em primeiro lugar, passando os cateteres e eletrodos através do flanco materno: é importante que isso seja feito de uma só vez para evitar quaisquer lesões em órgãos internos. Em segundo lugar, .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
ACE Fonte de luz	Schott-Fostec	A20500
Tesoura de dissecação	Fine Science Tools	14060 - 11
Tesoura de dissecação angular	Fine Science Tools	15006 - 09
Cabo de bisturi	Fine Science Tools	10003 - 12	ferramenta de dissecação alternada
Lâminas de bisturi curvas #12	Fine Science Tools	10012 - 00	de dissecação alternadas
fina das	tesouras	16044 - 10
S & Pinça de sutura em T	Ferramentas Fine Science	00272 - 13
Pinças Dumont SS - angulares	Ferramentas Fine Science	11203 - 25
Sutura de seda trançada tamanho 6-0	Teleflex Medical	07 - 30  - 10
Fita Médica	transpore	3M
Cloridrato de Cetamina 100 mg/ml	Hospira	NDC 0409 - 2051 - 05	Final Does é 80 mg/kg
Tranqui Ved Injection (xilazina 100 mg/ml)	Vecdo	NDC 50989 - 234 - 11	Final Does é 10 mg/kg
Reactive orange 14	Sigma - Aldrich	R - 8254
Ringers Solution Components			A solução é equilibrada com gás com 95% de O2 e 5% de CO2, pH final 7.4
Cloreto de sódio	Sigma - Aldrich	S7653	Concentração Final: 118 mM
de cloreto de potássio	Fisher Scientific	P217 - 3	Concentração Final: 4.7 mM
Cloreto de cálcio di-hidratado	Fisher Scientific	C79 - 500	Concentração Final: 2,5 mM
de fosfato de potássio monobásico	Fisher Scientific	P -285	Concentração Final: 1,2 mM
de sulfato de magnésio	J.T. Baker	Jan-00	Concentração Final: 0,57 mM
-(2-Hidroxietil)piperazina-1-ácido etanossulfônico (HEPES)	Fisher Scientific	BP 310 - 500	Concentração Final: 5,95 g/L
Glicose	Sigma - Aldrich	G8270	Concentração Final: 5,5 mM
LifeWindow	Digicare Biomedical Technology
CED bioamplificador e unidades ADC	Cambridge Electronic Design Limited, Unidade 4, Science Park, Milton Road, Cambridge CB4 0FE INGLATERRA.	Bioamp: 1902; ADC: micro1401; Software de aquisição de dados: Spike 2, V7.13
Neurolog analog signal bioamplifier	Digitimer Ltd 37 Hydeway Welwyn Garden City Hertfordshire, AL7 3BE, Inglaterra	NL108A
ABL800Flex	Radiometer Canada; 200 Aberdeen Dr, London, ON N5V 4N2
Eppendorf 5804R	Eppendorf Canada; 2810 Argentia Road, #2 Mississauga, Ontario, L5N 8L2
Conjunto de cateterismo jugular Arrow	International, Inc., 2400 Bernville Road, Reading, PA 19605 USA
Atravet			10 mg/ml
Diazepam			5 mg/ml
Cetamina	Ketalar		100 mg/ml
Propofol			10 mg/ml
SurgiVeT	Tubos Endotraqueais; Smiths Medical ASD, Inc. St. Paul, MN 55112, EUA
Cateter de troca de vias aéreas Cook com adaptadores RAPI-FIT	Cook Critical Care 750, Bloomington IN 47402-0489 EUA
Ventilador Dispomed	Dispomed Ltd., 745 Nazaire-Laurin, Joliette, Quebec J6E 0L6
BD Insyte-W	Becton Dickinson, Infusion Therapy Systems Inc., 9450 S State St, Sandy Utah 84070 EUA		22 a 20 g; 1 pol [0,9 x 25 mm] a 1,16 pol [1,1 x 30 mm]
Edwards Lifesciences Ref: PX272 Kit de monitoramento de pressão com pressão
LifeWindow LW6000	Digicare Biomedical Technology 107 Commerce Road, Boynton Beach, FL 33426-9365 EUA
Gaymar
Babcock
Cateteres	de polivinilSCI (Scientific Commodities Inc.)		2 metros
2-0 Vicryl
Castroviejo tesoura
eletrocardiograma (ECG)	LIFYY, Metrofunk Kabel-Union, Berlim, Alemanha		quatro eletrodos de cobre em bainha única, 2 metros
2-O Vicryl
3-0 Vicryl
PDS II USP
Trimetoprim sulfadoxina
Ampicilina
Torneira	Argônio Médica, Cat  041220001A		Torneira dupla de 4 vias com agulhas de trava luer macho
Agulhas	Tyco Healthcare 8881202389		Monoject de cubo de alumínio sem corte, 22Gx, 0,7 mm x 38,1 mm: para cateteres arteriais e venosos fetais
Agulhas	Tyco Healthcare 8881202322		Monoject de cubo de alumínio sem corte, 16Gx, 1,6 mm x 38,1 mm: para cateteres amnióticos

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