Artigo de método

Visualização de Streptococcus pneumoniae Dentro Microle- cardíacas e remodelação cardíaca Subsequente

DOI:

10.3791/52590

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7 de abril de 2015

 , 
1Department of Microbiology and Immunology, The University of Texas Health Science Center at San Antonio

Neste artigo

Resumo

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Streptococcus pneumoniae forma lesões microscópicas discretas e não purulentas no coração. Está delineado o protocolo para um modelo murino de formação de microlesões cardíacas. São fornecidas instruções sobre visualização de microlesões usando microscopia, discriminação entre microlesões precoces e tardias e métodos para detectar remodelação cardíaca em corações de animais convalescentes.

Resumo

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Durante a bacteremia Streptococcus pneumoniae pode translocar através do endotélio vascular para o miocárdio e formar bactérias cheios de lesões microscópicas discretas (microlesões) que são notáveis ​​devido à ausência de infiltrado de células imunitárias. Devido a sua liberação de produtos cardiotóxicos, S. pneumoniae dentro microlesões são pensados ​​para contribuir para a insuficiência cardíaca que é freqüentemente observado durante a doença pneumocócica invasiva fulminate em adultos. Nisto é demonstrado um protocolo para a infecção experimental do rato que leva à formação reprodutíveis microlesion cardíaca dentro de 30 horas. Instrução é fornecida na identificação microlesion em hematoxilina & eosina seções coração manchado e as distinções morfológicas entre microlesões precoces e tardias são realçados. Instrução é fornecida em um protocolo de verificação de S. pneumoniae dentro microlesões usando anticorpos contra polissacarídeo capsular e pneumocócicaA microscopia de imunofluorescência. Por último, um protocolo para a intervenção antibiótico que resgata ratinhos infectados e para a detecção e avaliação da formação de cicatriz no coração dos ratos convalescentes é fornecido. Juntos, esses protocolos irá facilitar a investigação dos mecanismos moleculares subjacentes invasão cardíaca pneumocócica, a morte de cardiomiócitos, remodelação cardíaca como resultado da exposição a S. pneumoniae, e a resposta imune para o pneumococos no coração.

Introdução

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Internação de adultos para pneumonia adquirida na comunidade (PAC) carrega um risco documentado para eventos cardíacos adversos que contribui para a mortalidade 1-4. Em um estudo recente realizado por Corrales-Medina et al. Complicações cardíacas foram encontrados para ser associado com e / ou responsáveis ​​por 27% dos óbitos associados à pneumonia 3. Streptococcus pneumoniae (pneumococo), a causa mais comum de PAC e sepse 5, foi diretamente associada a eventos cardíacos adversos em tantos como 19% dos pacientes adultos internados 6. Eventos cardíacos adversos associados com pneumonia incluem falha nova o....

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Protocolo

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NOTA: Todas as experiências com camundongos foram revisadas e aprovadas pelo Animal Care Institucional e Comissões de uso na University of Texas Health Science Center em San Antonio (protocolo nº 13032-34-01C). Cuidados com os animais e os protocolos experimentais aderiram ao Direito Público 89-544 (Animal Welfare Act) e suas alterações, as orientações serviços de saúde pública, e no Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório (Departamento de Saúde e Serviços Humanos dos EUA).

1. Infecção

  1. Obter ratinhos BALB / c de ambos os sexos com idades entre 10-12 semanas de idade.
    NOTA: S. pneumoniae sorotipo 4 es....

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Resultados

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Visualização de microlesões por H & E

Microlesões cardíacas foram observadas nos ventrículos de H & E coradas secções cardíacas de ratos com IPD seguintes seu desafio ip com TIGR4. A Figura 1 demonstra o aumento no tamanho das lesões entre 24 e 30 horas pós-infecção (hpi), com maior número de hematoxilina -stained (ie, azul-púrpura) pneumococos visível no interior da lesão. Microle- foram caracterizadas por uma morfologia semelhante vacúolo, mais de.......

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Discussão

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Neste relatório, um método altamente reprodutível para induzir S. pneumoniae mediada microlesões cardíacos em ratos durante IPD e as técnicas para a sua visualização é demonstrada. Os ratinhos são infectados com uma dose de bactérias que ultrapassa o limiar do sistema imunitário para a depuração, que conduz a bacteremia de alto grau, semelhante ao que ocorre durante a sepsia humano, e leva a uma eventual translocação bacteriana no miocárdio. Por razões ainda desconhecidas, S. pneumoniae no coração é ca.......

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Divulgações

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Os autores declaram não haver conflito de interesses neste estudo.

Agradecimentos

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Este trabalho foi apoiado pela concessão 13IRG14560023 da American Heart Association e NIH concede AI078972 e HL108054 à CJO. O apoio ao AOB foi do NIH National Center for Advancing Translational Sciences, NIH ULTR001120 e F31 A110417701.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Caldo Todd-HewittComposto Neogen7161A
O.C.T;Tecido-Tek (Sakura Finetek) 4583
Triton X-100 Fisher Scientific (Acros)9002-93-1
Soro de Cabra NormalAbcamab7481
anti-sorotipo 4 pneumococo anti-soro Statens Serum Institut16747
anticorpo conjugado FITC anti-coelho para cabras Jackson ImmunoResearch111-096-144
DAPIInvitrogenD1306
FluorsaveMillipore345789
PermountFisher ScientificS70104
AmpicilinaSigmaA9393
ácido fosfomolíbdico 0.2% Ciências de Microscopia Eletrônica26357-01
0.1% Sirius Red em ácido pícrico Ciências de Microscopia Eletrônica26357-02
0.01 N ácido clorídrico Microscopia Eletrônica Sciences26357-03
Lâminas de Microscópio de Aderência de TecidoPolysciences, Inc24216
Pomada Paralube VetDechra12920060
Kit de Coloração de Hematoxilina e Eosinanão especificado padrão

Referências

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  1. Corrales-Medina, V. F., et al. Cardiac complications in patients with community-acquired pneumonia: incidence, timing, risk factors, and association with short-term mortality. Circulation. 125, 773-781 (2012).
  2. Corrales-Medina, V. F., et al.

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Etiquetas

Streptococcus pneumoniaeCardiac MicrolesionsMouse Infection ModelImmunofluorescent MicroscopyHematoxylin Eosin StainingAmpicillin InterventionCapsular Polysaccharide DetectionConfocal MicroscopyCardiac RemodelingBacteremia Formation

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