Um Ensaio Behavioral Barato, escalável para medição Ethanol Sedação sensibilidade e tolerância rápida em<em&gt; Drosophila</em

Resumo

Ensaios simples para medir a sensibilidade ao etanol e a tolerância rápida em Drosophila facilitam o uso deste organismo modelo para investigar esses importantes comportamentos relacionados ao etanol. Aqui, um ensaio relativamente simples e escalável para medir a sensibilidade ao etanol e a tolerância rápida em moscas é descrito.

Resumo

Transtorno de uso de álcool (AUD) é um desafio de saúde grave. Apesar de uma grande componente hereditário para AUD, alguns genes têm sido implicados de forma inequívoca na sua etiologia. A mosca da fruta, Drosophila melanogaster, é um modelo poderoso para explorar mecanismos genético-moleculares subjacentes comportamentos relacionados com o álcool e, portanto, é uma grande promessa para identificar e compreender a função dos genes que influenciam AUD. A utilização do modelo de Drosophila para estes tipos de estudos depende da disponibilidade de ensaios que medem a forma fiável respostas comportamentais ao etanol. Este relatório descreve um ensaio adequado para avaliar a sensibilidade de etanol e tolerância rápida em moscas. Sensibilidade etanol medido neste ensaio é influenciado pelo volume e concentração do etanol usado, uma variedade de manipulações genéticas previamente relatados, e também o período de tempo em que as moscas são alojados sem alimentos imediatamente antes do teste. Em contraste, s etanolensitivity medido neste ensaio não é afectado pela força de manipulação mosca, sexo das moscas, e a suplementação do meio de crescimento com antibióticos ou com levedura viva. Três métodos diferentes para quantificar a sensibilidade de etanol encontram-se descritos, todos levando a resultados essencialmente indistinguíveis sensibilidade etanol. A natureza escalável deste ensaio, combinada com a sua simplicidade global de set-up e custo relativamente baixo, tornam adequado para a análise genética de pequena escala e grande sensibilidade de etanol e tolerância rápida em Drosophila.

Introdução

Transtorno de uso de álcool (AUD) é um enorme problema de saúde mundial (revisto em ^1). Embora os mecanismos que conduzem o desenvolvimento de R são complexas, estas perturbações têm um importante componente genético (por exemplo, ^2). O grande herdabilidade de AUD e as respostas comportamentais conservados em etanol através de muitas espécies (revisto em ^3,4) têm gerado grande interesse na utilização de organismos-modelo genéticos para investigar o envolvimento de genes específicos em comportamentos relacionados com o álcool para uma melhor compreensão das bases moleculares de AUD. A mosca da fruta, Drosophila melano....

Protocolo

1. Day Before Assay

1. Recolha voa em frascos de alimentos frescos em grupos de 11 (do mesmo sexo), sob breve (1-5 min) CO _2.
2. Permitir moscas para recuperar S / N em frascos de alimentos num espaço de ambiente controlado (tipicamente 25 ° C, 60% de humidade relativa, 12 horas de luz / escuridão).
3. Preparar a solução de (s) diluindo etanol puro (100%) em etanol purificado (≥18 mohms) de água para a concentração (s) final adequada para a experiência planeada. Permitir que a solução (s) para voltar à TA O / N.
   Nota: Diluição de etanol é exotérmica.

2. Dia de Ensaio

1. Para cada frasc....

Resultados

Os dados em bruto a partir de etanol neste ensaio de sedação são os números de moscas que são sedados como uma função do tempo de exposição ao vapor de etanol. Os dados em bruto são convertidos para as moscas por cento ativos como uma função do tempo (dados primários, as Figuras 1A, B, D - F). Sensibilidade para sedação de etanol a partir dos dados primários podem ser quantificados como sedação 50 Tempo (ST50), o tempo necessário para que 50% das moscas de se tornar sedado aea ou sob a .......

Discussão

Ensaios simples que reproducibly quantificada fenótipos significativas são de grande valor para a análise do comportamento. O trabalho descrito aqui aborda vários aspectos práticos de um ensaio para medir a sensibilidade sedação etanol e tolerância rápida em Drosophila. Apesar de não ser um foco deste trabalho, análises de comportamento são facilitadas pela manutenção do ambiente e genético constante fundo para indivíduos de teste dentro de um estudo. Além disso, comparações devem tipicamente ser feita entre os.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
frascos para alimentos	VWR	89092-772	estreito
Flugs	Genesee/flystuff.com	49-102
rolha estreita de silicone	Fisher Scientific	09-704-1l	#4
etanol	Pharmaco-Aaper	111000200	200 prova