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Se estudar uma doença auto-imune direcionada para o sistema nervoso central (SNC), tais como encefalomielite autoimune experimental (EAE, 1), ou a resposta imunológica a uma infecção do SNC, tais como poliomielite, neuroborreliose Lyme, ou a neurossífilis, é muitas vezes necessário isolar as células do SNC infiltrantes imunológico.
Neste vídeo protocolo demonstramos como isolar células mononucleares (MNCs) a partir do SNC de um rato com EAE. O primeiro passo deste procedimento requer uma perfusão cardíaca dos roedores com uma solução salina para assegurar que nenhum sangue permanece nos vasos sanguíneos que nutrem o SNC. Qualquer contaminação do sangue vai aumentar artificialmente o número de aparente CNS-infiltrando multinacionais e pode alterar a composição aparente do sistema imunológico se infiltrar. Nós, então, demonstrar como remover o cérebro ea medula espinhal do rato para dilaceração subseqüentes para preparar uma suspensão de uma única célula. Esta suspensão é separado em um gradiente de Percoll duas camadas para isolar as multinacionais. Após a lavagem, estas células são, então, pronto para passar por qualquer procedimento necessário.
Células mononucleares isoladas usando este procedimento é viável e pode ser usado para eletrofisiologia, citometria de fluxo (FACS), ou bioquímica. Se a técnica é realizada sob condições estéreis (utilizando instrumentos esterilizados em uma capa de cultura de tecidos) as células podem também ser cultivadas em meio de cultura de tecidos. A população de determinada célula pode ser purificado usando procedimentos de separação magnética ou um FACS.