O isolamento e criopreservação de Neonatais Rato Cardiomyocytes

Adam C. Vandergriff; Michael Taylor Hensley; Ke Cheng

doi:10.3791/52726

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Artigo de método

O isolamento e criopreservação de Neonatais Rato Cardiomyocytes

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DOI:

10.3791/52726

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9 de abril de 2015

Adam C. Vandergriff¹^,² , Michael Taylor Hensley¹^,² , Ke Cheng¹^,²^,³

¹Department of Molecular Biomedical Sciences and Center for Comparative Medicine and Translational Research, College of Veterinary Medicine, North Carolina State University, ²Joint Department of Biomedical Engineering, University of North Carolina at Chapel Hill, North Carolina State University, ³The Cyrus Tang Hematology Center, Soochow University

Neste artigo

Resumo

O isolamento de cardiomiócitos de ratos neonatais é um procedimento demorado e imprevisível. Este estudo descreve métodos de criopreservação e descongelamento de cardiomiócitos de ratos neonatais que permitem o uso mais eficiente das células. Os NRCMs descongelados podem ser usados para vários experimentos sem a necessidade de realizar isolamentos a cada vez.

Resumo

A cultura de células tornou-se cada vez mais importante na pesquisa cardíaca, mas devido à proliferação limitada de cardiomiócitos, a cultura de cardiomiócitos é difícil e demorada. As células mais comumente usadas são cardiomiócitos de ratos neonatais (NRCMs), que requerem isolamento toda vez que as células são necessárias. O nascimento dos ratos pode ser imprevisível. A criopreservação é proposta para permitir que as células sejam armazenadas até que sejam necessárias, mas os métodos de congelamento/descongelamento para cardiomiócitos primários são desafiadores devido à sensibilidade das células. Usando o crioprotetor adequado, dimetilsulfóxido (DMSO), a criopreservação foi alcançada. Extraindo-se lentamente o DMSO durante o descongelamento das células, as culturas foram obtidas com NRCMs viáveis. O fenótipo NRCM foi verificado usando coloração imunocitoquímica para actinina α-sarcomérica. Além disso, as células também mostraram contração espontânea após vários dias em cultura. A viabilidade celular após o descongelamento foi aceitável em 40-60%. Apesar disso, os métodos descritos permitem criopreservar e descongelar facilmente os NRCMs. Isso dá aos pesquisadores uma maior flexibilidade no planejamento de experimentos, além de reduzir o uso de animais.

Introdução

Cultura de células de cardiomiócitos é uma ferramenta crítica na pesquisa cardíaca moderna. Cardiomiócitos de ratos neonatais (NRCMs) são comumente utilizados uma vez que o isolamento e a cultura é mais fácil do que a de cardiomiócitos de rato adulto ^1. O método NRCM ainda tem várias limitações, incluindo um procedimento de isolamento e a proliferação celular a longo limitada no prato. Existem numerosos protocolos para o isolamento de NRCMs com mais geralmente requerem 4-48 horas de trabalho ^2-6. Além disso, as células são frequentemente isoladas a partir de 1 a filhotes de 2 dias de idade de ratos ^2,4-7; o momento do nascimento pode ....