Medição de resistência de Estresse Oxidativo<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Em placas de 96 poços de microtitulação

Elite Possik; Arnim Pause

doi:10.3791/52746

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Artigo de método

Medição de resistência de Estresse Oxidativo

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DOI:

10.3791/52746

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9 de maio de 2015

Elite Possik¹^,² , Arnim Pause¹^,²

¹Goodman Cancer Research Center, McGill University, ²Department of Biochemistry, McGill University

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Resumo

C. elegans é um organismo modelo atraente para estudar vias de transdução de sinal envolvidas na resistência ao estresse oxidativo. Aqui fornecemos um protocolo para medir a resistência ao estresse oxidativo de animais C. elegans em fase líquida, usando vários agentes oxidantes em placas de 96 poços.

Resumo

O stress oxidativo, que é o resultado de um desequilíbrio entre a produção e a desintoxicação de espécies reactivas de oxigénio, é um dos principais contribuintes para doenças humanas crónicas, incluindo doenças cardiovasculares e neurodegenerativas, diabetes, envelhecimento e cancro. Portanto, é importante para estudar o stress oxidativo, não só em sistemas de células, mas também utilizando organismos inteiros. C. elegans é um organismo modelo atraente para estudar a genética de vias de transdução de sinal de estresse oxidativo, que são altamente conservadas evolutivamente.

Aqui, nós fornecemos um protocolo para medir a resistência ao estresse oxidativo em C. elegans em líquido. Reagentes Resumidamente, ROS-indutores, tais como paraquato (PQ) e H ₂ O ₂ são dissolvidos em tampão M9, e soluções são aliquotadas em cavidades de uma placa de microtitulação de 96 poços. L4 sincronizado / adulto jovem C. elegans animais são transferidos para os poços (5-8 animais / poço) e é medida a sobrevivênciaa cada hora até que a maioria dos worms estão mortos. Ao realizar um ensaio de resistência ao estresse oxidativo utilizando uma baixa concentração de estressores em placas, o envelhecimento pode influenciar o comportamento dos animais sobre o estresse oxidativo, o que poderia levar a uma interpretação incorrecta dos dados. No entanto, no ensaio aqui descrito, este problema é improvável de ocorrer uma vez que apenas L4 / animais adultos, jovens estão sendo usados. Além disso, este protocolo é barato e resultados são obtidos em um dia, o que torna esta técnica atraente para telas genéticos. No geral, isso irá ajudar a compreender vias de transdução de sinal de estresse oxidativo, que poderia ser traduzido em melhor caracterização de doenças humanas associadas a estresse oxidativo.

Introdução

Em eucariotas, fosforilação oxidativa ocorrendo na cadeia de transporte de elétrons da mitocôndria é o principal motor da produção de energia na forma de ATP. Espécies reativas de oxigênio (ROS) são um subproduto natural do processo. Apesar do seu importante papel como moléculas de sinalização, excessiva de ROS pode levar a danos no ADN, carbonilação de proteínas, e a oxidação de lípidos. Um desequilíbrio entre a produção de ROS e desintoxicação faz com que o stress oxidativo, o que conduz à depleção da energia, lesão celular, e provoca a morte celular ^1,2. O estresse oxidativo contribui para o envelhecimento e para o desenvolvimento de muitas doenças pote....