Este artigo descreve um protocolo detalhado para produzir uma lesão por facada no prosencéfalo em camundongos adultos. A lesão por arma branca induz gliose reativa grave e formação de cicatriz glial que pode ser posteriormente examinada por métodos imuno-histoquímicos padrão.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Neste artigo
Resumo
Resumo
Após a lesão do SNC, os astrócitos passam por uma ampla gama de alterações bioquímicas, morfológicas e moleculares coletivamente chamadas de astrogliose reativa. Os astrócitos reativos exercem efeitos inflamatórios e protetores que inibem e promovem, respectivamente, o reparo neural. Os mecanismos subjacentes às diversas propriedades funcionais da astrogliose reativa não são bem compreendidos. Alcançar uma maior compreensão desses mecanismos é fundamental para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas para tratar o SNC lesado. Aqui, demonstramos um método para desencadear astrogliose reativa no prosencéfalo de camundongos adultos usando uma lesão de facada no prosencéfalo. Este modelo de lesão é simples, confiável e requer apenas um dispositivo estereotáxico e uma lâmina de bisturi para produzir a lesão. O uso de lesões por arma branca como modelo de lesão no prosencéfalo está bem estabelecido e passível de estudos que abordem uma ampla gama de resultados neuropatológicos, como degeneração neuronal, neuroinflamação e interrupções na barreira hematoencefálica (BHE). Assim, o modelo de lesão por facada no prosencéfalo serve como uma ferramenta poderosa que pode ser aplicada a uma ampla gama de estudos sobre a resposta do SNC ao trauma.
Introdução
Um grande desafio para o desenvolvimento de terapias bem-sucedidas para tratar o SNC lesionado é uma compreensão incompleta dos complexos eventos multicelulares desencadeados pelo trauma. Os astrócitos reativos estão ganhando cada vez mais reconhecimento como um alvo promissor para novas terapias1. Embora historicamente considerados hostis ao reparo neural, os astrócitos reativos são agora reconhecidos como componentes críticos de uma resposta neuroprotetora multicelular complexa que inclui atenuação de processos inflamatórios e limitação de danos secundários e neurodegeneração2-6. Embora as características neuropatológicas da gliose reativa tenh....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
Adulto (3-4 meses de idade) ratos machos em um C57BL / 6 fundo misto foram utilizados neste protocolo. Os animais foram mantidos em um ciclo claro / escuro de 12 horas de luz, e permitiu o livre acesso a comida e água. Todos os procedimentos realizados neste protocolo foram realizados de acordo com protocolos aprovados pela Comissão de Drexel University Institutional Animal Care e Use.
1. Preparar Área Cirúrgica
- Desinfetar mesa cirúrgica com etanol 70%, em seguida, cobrir toda a bancada cirúrgica com absorventes higiênicos e providenciar instrumentos cirúrgicos adjacente ao estereotáxica.
- Configurar equipamento estere....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
Porque os animais submetidos a esse procedimento não requerem períodos de sobrevivência especializados cuidados pós-operatórios, curtos ou de tempo de longo prazo são facilmente incorporados no estudo, dependendo da necessidade de investigar patologia aguda ou crônica após a lesão. Principais recursos de gliose reativa, como regulação alta de GFAP e hipertrofia de soma, pode ser observado logo em 2-3 dias após a lesão. A fase de pico da proliferação de astrócitos reativos é durante os dias 3-5 após lesão 10. .......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
É fundamental que o crânio ou dura subjacente não sejam danificados durante a perfuração. Use uma leve pressão durante a perfuração para garantir o crânio não é perfurada. Além disso, deve ser tomado cuidado ao levantar o pedaço do crânio para garantir a dura não é levantado com o osso.
A lesão forebrain facada descrito aqui modelos de uma lesão penetrante no SNC. Embora menos clinicamente traduzível do que os modelos de TBI como FPI ou ICC, o modelo de lesão forebrain facada serve como uma .......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Agradecemos a Katherine Clark pela assistência técnica. A.D.R.G. é financiado em parte por 5K01MH097957-03
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Stereotax | Harvard Apparatus | 726049 | |
| Micro broca de alta velocidade | Harvard Apparatus | 724950 | |
| lâmina de bisturi de aço inoxidável, #11 | MedVet | JOR581S | |
| 5/45 fórceps angular | Fine Science Tools | 11251-35 | |
| Esponja Gelfoam 12 cm x 7 mm | Fisher | NC9841478 | |
| Rb anti-GFAP | DAKO& | nbsp; Diluição Z033429-2 | - 1:20.000 (campo claro); 1:1.000 (fluorescência) |
| Shp anti-BrdU | Abcam | ab1893 | Diluição - 1: 20.000 (campo claro); 1:500 (fluorescência) |
| Cabra biotinilada anti-coelho | Vector Laboratories | BA-1000 | Diluição - 1:400 (campo claro) |
| Vector Laboratories | BA-6000 | Diluição - 1:400 (campo claro) | |
| Alexafluor 488 anti-coelho de cabra | Life Technologies | A-11008 | Diluição - 1:400 (campo claro) |
| Alexafluor 568 anti-ovelha de burro | Life Technologies | A-21099 | Diluição - 1:1.000 (fluorescência) |
| DAPI Nucleic Acid Stain | Life Technologies | D3571 | Diluição - 1:1.000 (fluorescência) |
| Acetato de violeta cresil | Sigma Aldrich | C5042-10G | Diluição - 1% (campo claro) |
Referências
- Hamby, M. E., Sofroniew, M. V. Reactive astrocytes as therapeutic targets for CNS disorders. Neurotherapeutics. 7 (4), 494-506 (2010).
- Bush, T. G., et al. Leukocyte infiltration, neuronal degenerati....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
