O objetivo deste manuscrito é descrever as etapas necessárias para realizar um transplante renal em um camundongo, prestando atenção especial aos detalhes da anastomose arterial.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Rim murino técnica de transplante
Neste artigo
Resumo
Resumo
A primeira técnica de transplante de rim de camundongo foi publicada em 19731 pelo laboratório Russell. Embora tenha levado alguns anos para que outros laboratórios se tornassem proficientes e utilizassem essa técnica, ela agora é amplamente utilizada por muitos laboratórios em todo o mundo. Um refinamento significativo da técnica original usando a aorta doadora para formar a anastomose arterial em vez da artéria renal foi desenvolvido e relatado em 1993 por Kalina e Mottram 2 com um novo avanço vindo do mesmo laboratório em 1999 3. Embora se possa tornar proficiente neste modelo, uma pesquisa na literatura revela que muitos laboratórios ainda experimentam uma alta proporção de perda do enxerto devido à trombose arterial. Descrevemos aqui uma técnica desenvolvida em nosso laboratório que reduz muito o trombo arterial relatado por outros 4,5. Isso é conseguido formando um manguito de calcanhar e dedo do pé da aorta infrarrenal do doador que facilita uma anastomose maior e um fluxo sanguíneo mais reto para o rim.
Introdução
Desde 1973, o modelo de transplante renal em ratos tem sido um valioso instrumento de pesquisa, mas problemas técnicos têm dificultado seu uso generalizado. Ao longo dos anos, vários trabalhos têm sido publicados detalhando melhorias / aperfeiçoamentos a este procedimento. Como um modelo de transplante de órgãos sólidos, principalmente vascularizado este procedimento é, provavelmente, perdendo apenas para o modelo de transplante cardíaco heterotópico, que também foi concebido pelo laboratório Russell em 1973 6. Ambos os modelos se prestam à investigação sobre respostas de rejeição alogênicos, o desenvolvimento da função retardada do enxerto e lesão por isq....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
Todos os ratinhos foram adquiridos da The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME) e foram alojados em condições livres de patógenos na Universidade do Colorado Denver, Facility Barbara Davis Centro de animal de acordo com diretrizes do NIH e com a aprovação da University of Colorado Denver IACUC.
1. doador de rim Colheita
- Esterilizar todos os instrumentos, usar luvas estéreis durante todo o processo e manter um campo esterilizado. Executar todas as cirurgias com a utilização de um microscópio de operação.
- Remover cirurgicamente rins de doadores de rato anestesiado-pentobarbital (60mg / kg IP) doadores. Verificar profundid....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
Esta técnica cirúrgica permite tanto para estudos simples sobrevivência de enxerto / rejeição, ou protocolos experimentais bastante complexas. Nas figuras abaixo demonstramos as vantagens de usar esse melhor técnica de anastomose arterial. Usando esta técnica, reduzimos significativamente a incidência de trombose arterial de 35% para 0%, aumentando assim a produtividade. Temos utilizado esta técnica para mais de um ano com o mesmo resultado de 0% a trombose mantida. A Figura 1 descreve o método para a f.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Dominar esta técnica de transplante é difícil, mas uma vez conseguido isso é uma ferramenta de pesquisa muito poderoso. O cirurgião paciente / pesquisador será recompensado pela atenção aos detalhes e consistência da técnica, que é a chave para dominar qualquer procedimento cirúrgico, ainda mais em pequenos modelos animais. As dificuldades técnicas de dominar o transplante de rim do rato são muitas dobras, e é altamente provável que a experiência em outros modelos pequenos transplante animal deve ser adquirida antes de .......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado em parte por 1R03DK096151.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Instrumento | Roboz # | Fine Science Tools # | Arosurgical # |
| Pinça de micro-dissecação reta #5 | RS-5015 | 11295-51 | |
| Pinça de micro-dissecação curva #7 | RS-5047 | 11297-00 | |
| Pinça serrilhada curva | RS-5137 | 11052-10 | |
| Tesoura de micro-dissecação Vannas, curta | RS-5610 | 09.140.08 | |
| Tesoura de microdissecação, reta, afiada, longa | 11.602.11 | ||
| Porta-agulha | micro 11.549.15 | ||
| Pinça | 91308-12 | ||
| Tesoura de microdissecação, reta, romba | RS-5962 | 14078-10 | |
| Tesoura de microdissecação, curva, romba | RS-5981 | 14079-10 | |
| Micro retrator | RS-6540 | ||
| Bandeja de instrumentos, 10" x 6 ½ ” x ¾ " | RT-1350S | ||
| Sutura de seda, 5/0, carretel de 22,5 m | 18020-50 | ||
| Aplicadores | |||
| de algodão BD 1cc insulina, # 329424 | marca Fisher, # 23-400-100 | ||
| Cotonetes de iodo-povidona | |||
| PDI, #B40600 | |||
| 4/0 Gravatas | |||
| Algodão doméstico autoclavado com instrumentos |
Referências
- Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity. Transplant Proc. 5 (1), 721-725 (1973).
- Kalina, S. L., Mottram, P. L. A microsurgical technique for renal transplantation in mice. Aust N Z J Surg.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
