Instilação e fixação métodos úteis no mouse Lung Cancer Research

Resumo

O objetivo deste artigo é descrever métodos simples que vai ajudar muito na configuração e análise dos pulmões do rato com câncer de pulmão ou outras patologias. Nós apresentamos 3 protocolos simples e confiável para realizar injeções de pulmão, fixação e medidas de volume pulmonar.

Resumo

A capacidade de incutir agentes vivos, células ou produtos químicos diretamente para o pulmão sem ferir ou matar os ratos é uma ferramenta importante na investigação do cancro do pulmão. Embora haja um certo número de métodos que foram publicados mostrando como a entubar ratinhos para medição da função pulmonar, nenhum é sem problemas potenciais para instilação traqueal rápida em grandes grupos de ratinhos. No presente trabalho, um método simples e rápida é descrito que permite que um investigador para realizar tais injeções de uma maneira eficiente. O método não requer ferramentas especiais ou de iluminação e pode ser aprendido com muito pouco prática. Trata-se de anestesia de um rato, fazendo uma pequena incisão no pescoço para visualizar a traqueia, e em seguida a inserção de um cateter intravenoso directamente. A pequena incisão é fechada rapidamente com adesivo de tecido, e os ratos são deixados a recuperar. Um estudante qualificado ou técnico pode fazer instillations a uma taxa média de 2 min / mouse. Uma vez que tele câncer é estabelecida, há freqüentemente uma necessidade de análise histológica quantitativa dos pulmões. Tradicionalmente patologistas normalmente não se preocupam em padronizar a inflação do pulmão durante a fixação, e as análises são muitas vezes baseadas em um sistema de pontuação que pode ser bastante subjetiva. Embora isso possa ser suficiente em algum momento adequado para estimativas grosseiras do tamanho de um tumor do pulmão, qualquer quantificação estereologia adequada de estrutura pulmonar ou células requer um procedimento de fixação e reprodutível de medição do volume pulmonar subsequente. Aqui nós descrevemos procedimentos confiáveis ​​simples para ambos, que fixa os pulmões sob pressão e, em seguida, medir com precisão o volume de pulmão fixo. O único requisito é uma balança de laboratório que é preciso ao longo de uma gama de 1 mg-300 g. Os procedimentos aqui apresentados, portanto, poderia melhorar significativamente a capacidade de criar, tratar e analisar os cânceres de pulmão em camundongos.

Introdução

Por uma série de razões, o câncer de pulmão não tem sido amplamente estudada no mouse. Uma razão para isto é que o acesso ao pulmão é muito difícil in vivo, e a análise quantitativa de pulmão fixo não é normalmente feito. Os métodos descritos neste artigo são projetados para remediar esta situação. Os objetivos aqui são para descrever métodos simples que vai ajudar muito na configuração e análise dos pulmões do rato com câncer de pulmão ou outras patologias. Embora nenhuma dessas abordagens são inteiramente novas, que não tenham sido apresentadas em conjunto como métodos autônomos na forma simplificada, tal como descrito aqui.

Te....

Protocolo

O protocolo seguinte descreve um sistema que funciona bem em 20-35 g ratinhos. O método pode ser facilmente adaptável a ratinhos maiores ou menores simplesmente mudando o tamanho do cateter. Todos os protocolos de animais foram aprovados pelo Comitê de Johns Hopkins University Animal Care e Use.

1. A instilação pulmonar

1. Selecione um comercial de uma polegada de comprimento 20 g cânula intravenosa usar para a intubação.
2. Modificar a ponta do cateter dobra-lo manualmente para gerar uma ligeira curvatura na ponta como ilustrado na Figura 1.
3. Anestesiar o rato com uma mistura de c....

Resultados

O procedimento descrever no primeiro protocolo não por si só levar a qualquer resultado generalizadas. Ele descreve somente um meio muito fiáveis ​​para incutir substâncias directamente na traqueia. A Figura 7 mostra um exemplo de um pulmão em que azul de tripano foi instilado com o método descrito aqui. Há ampla distribuição do corante, semelhante ao que foi observado com outros corantes ou marcadores dadas directamente na traqueia ou ratinhos ^11,12. Também têm utilizado este método para ent.......

Discussão

Os procedimentos descritos aqui têm várias vantagens. Primeiro, o equipamento necessário é simples e barata. Em segundo lugar, a intubação pode ser feito rapidamente, com poucos erros. Em terceiro lugar, a capacidade de fixar os pulmões a uma pressão constante, e, em seguida, medir o volume pulmonar fixo permite a quantificação adequada das estruturas ou células no pulmão ^10.

Uma possível desvantagem para a intubação é a pequena cirurgia. Isso pode limitar a capacidade de repetir .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Balança de Laboratório	Ohaus	Adventurer Pro Modelo AV 313	Outras balanças podem ser usadas se tiverem uma faixa de 1-300 g
20 g de cateter intravenoso Luer	Insylte		Vários outros fornecedores possíveis, e.g., Jelco Optiva
frasco de laboratório de 500 ml	Vários		outros fornecedores possíveis