Quantificar motivação social em ratos usando Condicionamento Operante

Resumo

Este artigo descreve um novo protocolo para a medição quantitativa da motivação social em camundongos usando condicionamento operante para uma recompensa social. O protocolo é útil para a medição da motivação social em modelos de autismo e outros distúrbios do comportamento social em camundongos.

Resumo

Neste protocolo, motivação social é medido em camundongos através de um par de paradigmas de condicionamento operante. Para realizar as experiências, duas câmaras caixas de transporte foram equipados com duas alavancas de operantes (esquerdo e direito) e um recipiente de alimentos em uma câmara, a qual foi, em seguida, separado da segunda câmara por uma porta de guilhotina automatizado coberta por uma grelha de arame. Diferentes ratos de estímulo, rodado ao longo dos dias de testes, serviu como um estímulo social por trás da grade de arame, e eram visíveis somente após a abertura da porta de guilhotina. Ratinhos de teste foram treinados para alavanca de imprensa, a fim de abrir a porta e ter acesso ao parceiro estímulo por 15 s. O número de prensas de alavanca necessários para obter a recompensa sociais progressivamente aumentada em um horário fixo de 3. sessões de testes terminou depois de ratinhos de teste parou alavanca pressionando por 5 minutos consecutivos. A última razão reforçado ou ponto de interrupção pode ser utilizada como uma medida quantitativa da motivação social. Para o segundo paradigma, test ratos foram treinados para discriminar entre prensas alavanca esquerda e direita, de modo a obter-se uma recompensa de alimentos ou a recompensa social. Os ratos foram recompensados ​​por cada 3 prensas de cada respectiva alavanca. O número de recompensas alimentares e sociais pode ser comparada como uma medição do valor colocado sobre cada recompensa. A proporção de cada tipo de recompensa pode também ser comparadas entre estirpes de ratinho e a alteração em esta relação pode ser monitorizada dentro sessões de teste para medir a saciedade com um determinado tipo de recompensa. Ambos os paradigmas de condicionamento operante são altamente útil para a quantificação de motivação social em modelos de ratinho de autismo e outras desordens de comportamento social.

Introdução

Nos últimos anos, a ligação de factores genéticos e ambientais para desordens de comportamento social, incluindo a desordem do espectro autista, levou ao desenvolvimento de modelos de ratos concebidos para explorar o papel destes factores de comportamento social. Isso criou uma demanda por novas técnicas para a caracterização do comportamento social em camundongos, incluindo uma medida quantitativa da motivação social ^1.

Existem vários paradigmas estabelecidos que podem ser utilizados para demonstrar a motivação social em ratos, no entanto; todos eles têm severas limitações da sua capacidade de quantificar a força do comportamento motivado. Por exemplo, algumas das primeiras avaliações comportamentais incluídos simples observações de interações sociais entre os dois roedores que nunca conheceu. Vários comportamentos incluindo aproximando, seguindo, cheirando, e de higiene geralmente são medidas, e pode fornecer um índice de motivação social. Estes estudos foram inicialmente conduzidaem ratos ^2-5, e depois adaptado para utilização em ratinhos ^6,7. A habituação / dishabituation paradigmas de reconhecimento social em que o animal de teste é exposta várias vezes para o mesmo animal estímulo (habituação) e, em seguida, exposta a um novo animais (dishabituation) também fornecem uma medição de motivação social ^8. Como sugerem os rótulos, animais típicos irão exibir uma resposta comportamental habituados à presença repetida dos mesmos animais estímulo mas irá demonstrar dishabituation, ou um retorno à linha de base, quando exposto ao novo animal. A resposta de habituação provável demonstra um declínio na motivação do rato de teste para interagir com o mouse estímulo. Paradigmas escolha social, permitindo um teste de rato para escolher entre uma câmara de vazio e um estímulo rato restrita a uma câmara diferente, também têm sido utilizados para avaliar a motivação social. Um ensaio começa tipicamente pela colocação do rato no ensaio, uma câmara central neutra. Algumas versões deste tarefa envolver tethering o mouse estímulo para uma câmara ^9. Uma modificação desta tarefa empregue o uso de um invólucro de fio ao longo dos ratinhos estímulo evitando amarramento dos animais de estímulo ^10. Mais recentemente, uma tarefa lugar de preferência condicionada social, foi desenvolvido em ratinhos que foram condicionados a associar câmaras distintas visualmente ou com a presença ou ausência de um parceiro sociais, e depois deixou-se explorar as câmaras vazias seguinte condicionado ^11. Mais tempo gasto na câmara onde previamente ocorreu emparelhamentos sociais é considerado ser um índice de motivação social.

Todos os paradigmas acima fornecem dados importantes relacionados com a fenotipagem social dos ratos. No entanto, embora se possa observar se um rato demonstra um "desejo" de buscar interação social nos paradigmas acima, a força desse "desejo", ie., Motivação social, é difícil de medir. A força de comportamento motivado possuisido tradicionalmente medido em roedores, criando um cenário em que eles têm que trabalhar a fim de obter acesso à fonte de sua motivação. Isso geralmente envolve roedores de treinamento em um paradigma operante envolvendo alimentos como o fator motivador. No entanto, este método tem sido utilizado anteriormente para investigar a motivação social de ratos, mas de qualquer envolvendo o acesso a um parceiro sexual para ratos do sexo masculino ou, para as mulheres, o acesso aos seus próprios filhotes (revisto em Matthews et al., 2005) ^12,13.

Antes do desenvolvimento dos paradigmas motivação social descritos a seguir, houve apenas um outro estudo que investigou a motivação social fora da motivação sexual usando um paradigma operante com camundongos ^12. Nesta série de experiências, não consanguíneas ratinhos Swiss Webster foram treinados para pressionar uma alavanca, a fim de obter acesso a uma mesma espécie do mesmo sexo. Numa experiência, uma latência significativamente reduzida para começar a responder de acesso ao alvo compue foi demonstrada em ratos-alojados individualmente em comparação com camundongos alojados em grupo, sugerindo uma maior motivação para buscar o acesso social desses ratos isolados socialmente. Em outro experimento desse mesmo estudo, foi feita uma comparação entre salina e antagonista da oxitocina (atosiban) ratos infundidos. Curiosamente, os ratos com infusão de drogas demonstraram um aumento significativo do tempo de latência para iniciar a resposta para o acesso ao dispositivo de destino sugerindo motivação reduzida para uma recompensa sociais nestes ratinhos.

Embora estas experiências representam uma tentativa para quantificar nobre motivação social em ratos usando o condicionamento operante, eles foram também altamente limitada e são grandemente melhorados utilizando os métodos descritos abaixo. Por exemplo, uma falha fundamental aparente no primeiro experimento descrito acima (experimento 2 do presente estudo) foi o uso de apenas 2 ratos alvo alternados ao longo dos dias de teste dos pesquisadores. Pesquisas anteriores mostraram que o reconhecimento social no grupo alojadoscamundongos pode durar por pelo menos 7 dias que antecederam à redução investigação social com a exposição repetida ao mesmo alvo ^14. No entanto, o reconhecimento social em ratos e ratinhos alojados individualmente dissipa dentro de 1 - 2 horas para que as durações de investigação social continuam em níveis basais se uma exposição repetida à mesma meta é, pelo menos, 2 horas após a exposição inicial ^15-17. A latência reduzida de ratinhos alojados individualmente para começar a responder para o acesso social, apresentada na Matthews et al. Experimento pode ter sido uma consequência da falta de reconhecimento social dos ratos-alvo através de teste de ¹² dias. Este confundem potencial é controlado pelos métodos a seguir, utilizando um novo alvo rato em cada dia de teste. Além disso, em ambas as experiências a partir do estudo de Matthews et ai. Descrito acima, não foram relatadas diferenças no número total de pressões da alavanca realizadas entre os grupos. É possível que a diferença em prensas totais de alavanca poderia ser têmen detectado se os pesquisadores utilizaram uma proporção progressivamente crescente de respostas para recompensar como usado em nosso projeto de pesquisa descrito abaixo. Além disso, o acesso ao rato alvo foi controlada manualmente pelo experimentador, levantando uma caixa que cobria o alvo. A utilização de uma porta de guilhotina para automaticamente controlado com acesso para o rato alvo elimina a possibilidade do artefacto, devido à presença do experimentador. Na verdade, a fim de automatizar completamente a motivação social, paradigmas operantes, o equipamento pesquisa foi personalizado como detalhado abaixo.

Protocolo

Esta pesquisa foi aprovada pelo Comitê Animal Care Institucional e Use a Universidade Azusa Pacific. Todos os procedimentos que envolvem animais foram realizadas seguindo as recomendações do Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório do National Institutes of Health.

1. Modificando Aparelhos de motivação social e de Comparação Valence Teste Paradigmas

1. A fim de testar os ratos em tarefas operantes de comportamento social, modificar Canal Central caixas de transporte modular. Estas caixas de transporte medir 44 centímetros x 17,3 centímetros e são feitos de acrílico e aço inoxidável.
2. Modificar uma porta de guilhotina programável através da montagem de uma grade de arame para o rosto do batente da porta. A grelha de arame deverá permitir o contacto social limitado, mas não permite que os ratinhos para atravessar de uma câmara para a outra.
3. Usando a porta de guilhotina programável, dividir cada caixa em duas câmaras: cada um medindo aproximadamente 22 cm x 17,3 centímetros. Designar uma câmara como the câmara de ensaio e a outra como a câmara-alvo.
4. Coloque alavancas rato na câmara de ensaio na parede oposta da porta de guilhotina. Coloque um recipiente de alimentos dipper líquido entre as duas alavancas do mouse.
5. Programa de as alavancas de ratinho ou a abrir a porta de guilhotina ou apresentar uma recompensa de alimento líquido, dependendo do paradigma de teste.
6. Ligue um botão de mão para o aparelho e programá-lo para abrir a porta de guilhotina (para dar forma manual dos ratos de teste).
7. Encaixe cada caixa de transporte com um controlador de I / R de oito canais para monitorar a atividade em todo o piso de grade de metal de cada câmara. Montar uma câmera de vídeo digital USB acima da câmara de ensaio e conectá-lo a um computador. Coloque todo o aparelho dentro de um cubículo de atenuação de som melamina.
8. Executar os programas operantes utilizando programas personalizados escritos em laboratório.

2. Shaping the Mice para a Paradigm motivação social

1. Coloque um rato de teste no teste de cHamber e uma idade e mouse estímulo pareados por sexo na câmara-alvo.
2. Formar o rato de ensaio para pressionar as alavancas para abrir a porta de guilhotina usando o método de moldagem ou reforço de aproximações sucessivas para a desejada resposta operante. Durante este procedimento de moldagem, entregar reforço manualmente premindo o botão de mão programado para controlar a porta de guilhotina.
   Nota: O reforço consiste na abertura da porta de guilhotina para 15 s, assim, permitindo o acesso ao estímulo do rato através da grelha de arame.
3. Observe o mouse na câmara de ensaio utilizando a câmera montada acima da câmara de ensaio.
4. Treine cada rato em uma série de 30 mínimo de sessões diárias até que demonstrem pelo menos 10 respostas operantes (prensas de alavanca) em 3 de 5 sessões de testes consecutivos. Gire ratos através de caixas de transporte, utilizando a atribuição aleatória.
5. Se os ratos não atingem este critério após 30 sessões de treino diárias, remover os ratos do experimento e designate como não-aprendentes.
   Nota: O número de sessões diárias de treinamento pode ser prorrogado para além de 30 dependendo das preferências pesquisador.
6. Alterne os ratos de estímulo utilizados durante moldar de modo que um mouse diferente é usado todos os dias.
7. Caixas de transporte limpos entre cada sessão de treinamento usando álcool etílico a 70%. Além disso, após a conclusão do teste de cada dia, limpo todo o equipamento usando um detergente de desinfecção.

3. Teste o Ratos no Paradigma motivação social

1. Coloque um rato treinado ensaio na câmara de teste e uma idade e mouse estímulo pareados por sexo na câmara-alvo. Durante o teste, utilizar um conjunto de pelo menos 10 ratinhos de estímulo para atribuir a cada rato de teste de modo a que os ratinhos de estímulo só são repetidas depois de 10 sessões de teste diárias. Não utilize ratos de estímulo utilizados durante moldar para o teste.
2. Programar a porta de guilhotina para abrir num esquema de razão progressiva de reforço, de modo que o número de re operanterespos- (prensas de alavanca) necessários para obter a recompensa Social, de 15 sec acesso ao mouse alvo aumenta aritmeticamente por uma taxa fixa de 3 cada tentativa.
3. Programar as sessões de teste para acabar quando o mouse teste pára alavanca pressionando por cinco minutos consecutivos.
4. Grave o último concluído (armado) proporção que o ponto de interrupção. Use esta medida dependente como um índice de motivação social. Teste cada rato durante 20 sessões diárias consecutivas ou por pelo menos 10 sessões de teste depois que os níveis de desempenho assintóticas são observados.
5. Limpe as caixas de transporte entre cada sessão de teste usando o álcool etílico 70% e após a conclusão do teste de cada dia usando um detergente de desinfecção.

4. Valence Comparação da social Versus Food Recompensa

1. Depois de concluir todos os ratinhos do paradigma motivação social, testar estes mesmos ratinhos em uma tarefa desenhado para comparar a valência do recompensa social, com a de uma recompensa alimentar.
2. Programa de uma alavancapara abrir a porta de guilhotina e apresentar a recompensa social para 15 seg e programar a alavanca oposta apresentar uma recompensa alimentar líquido durante 15 segundos.
   Nota: A recompensa do alimento líquido usado neste protocolo consistiu de leite evaporado adoçado com 0,2% de sacarose. Prepare quantidades suficientes (geralmente 500 ml) para apresentar repetidamente recompensas de 0,02 ml para cada rato.
3. Atribuir ratinhos de teste alternadas contingências alavanca / recompensa para controlar vieses alavanca potenciais entre camundongos. Assim, atribuir a metade dos ratos em cada grupo de teste para uma alavanca para a esquerda / recompensa alimentar e alavanca direita / contingência recompensa social ea outra metade a uma alavanca para a esquerda / recompensa social e direito recompensa contingência alavanca / alimentos.
4. Treinar os ratos para comparação valência social, contra recompensa alimentar.
   1. Coloque um rato de ensaio na câmara de teste e coloque uma idade e mouse estímulo pareados por sexo na câmara-alvo.
   2. Faça apenas uma alavanca / recompensar contingência ativo durante cada sessão de treinamento. Treinamento consistede seis sessões de 1 hr que alternam entre contingências de cada dia. Camundongos estímulo suplentes designados para cada ratinho teste todas as outras sessão recompensa social.
   3. Manter os ratos em seu ad libitum comida de dieta durante o treinamento e testes com a recompensa alimentar. Privação de alimento é desnecessária para o condicionamento operante em ratos com o uso da solução leite e sacarose ¹⁸ evaporado.
5. Testando os ratos para a comparação valência de recompensa social, contra comida.
   1. Programar o esquema de reforço a uma razão fixa de 3: 1, de modo que cada terceira pressão da alavanca é reforçada, mas apenas pela sua respectiva recompensa associados.
   2. Sessões de testes programa para ser executado durante 60 minutos.
   3. Coloque um rato de ensaio na câmara de teste e coloque uma idade e mouse estímulo pareados por sexo na câmara-alvo. Nota: O mesmo conjunto de 10 ratinhos estímulo utilizado na tarefa motivação social pode ser utilizado novamente, mas designados para os ratinhos de teste, utilizando uma rotação de 10 dias.
   4. Test os ratos em 20 sessões diárias seguintes os 6 dias de treinamento ou para, pelo menos, 10 sessões diárias após a observação dos níveis de desempenho assintótica. As medidas dependentes primários para este paradigma é o número total de prensas de alavanca para cada tipo de recompensa.
   5. Mais uma vez, limpe as caixas de transporte entre as sessões de teste usando o álcool etílico 70% e após cada dia de teste usando um detergente de desinfecção.

Resultados

Este protocolo foi utilizado para comparar a prosocial C57BL / 6J estirpe de ratinhos consanguíneos com o BTBR estirpe inata de rato que tenha sido relatada previamente para mostrar diminui no comportamento social ^10,18. Também tem sido utilizado para caracterizar motivação social em diferentes estirpes de ratinho knockout hipótese de ter aumentado ou diminuído motivação social. Os resultados previamente publicados que comparam a C57BL / 6J e BTBR estirpes de ratinhos consanguíneos são mostrados na Figura 1. Estes resultados demonstraram diminuição da motivação social para os ratinhos BTBR em comparação com os ratinhos C57BL / 6J. O paradigma Valence Comparação também demonstraram diminuição da motivação alimento para os ratos BTBR sugerindo uma diminuição global do comportamento motivado para esta estirpe (Figura 1B).

Figura 2A apresenta alguns dados preliminares não publicados que comparam do tipo selvagem irmãos na C57BL / 6 estirpe de fundo com heterozigotos e homozygonos nocaute irmãos com produto de proteína reduzida ou ausente de um gene (gene X) a hipótese de promover a motivação social. Figura 2B apresenta alguns dados preliminares não publicados que comparam do tipo selvagem irmãos na C57BL / 6 estirpe de fundo aos irmãos knockout heterozigóticos com produto de proteína reduzida de um gene (gene Y) a hipótese de reduzir a motivação social. Os dados preliminares de cada um destes estudos suportam cada respectiva hipótese e demonstram ainda mais o valor dos paradigmas descritos motivação social operantes.

Figura 1. Resultados anteriormente publicados a partir das motivação social e de valência paradigmas de comparação. (A) O ponto de interrupção médio de-alojados individualmente (IH) ratinhos B6, (GH) ratinhos B6 alojados em grupo, e ratos BTBR alojados em grupo, entre os últimos 10 dias de testes na tarefa motivação social. Haviaum total de nove ratos em cada grupo. Individualmente e ratinhos B6 alojados em grupo, realizada de forma semelhante, mas houve uma diferença significativa entre B6 e BTBR ratos alojados em grupo (t = 2,741, df = 16, p = 0,015). (B) O número médio de recompensas do alimento e recompensas sociais para os ratinhos B6 e BTBR alojados em grupo, através das últimas 10 sessões do paradigma comparação valência. Ambos os grupos de rato obtido significativamente mais recompensas do alimento do que recompensas sociais (BTBR: t = 3,551, df = 8, p = 0,007; B6: t = 9,478, df = 8, p <0,001). No entanto, os ratinhos BTBR adquirido um número significativamente menor de recompensas de comida do que os ratinhos B6 e também o menor número de recompensas sociais (t = 3,321, df = 16, p = 0,004). Figura modificado de Referência ^18.

Figura 2. Os resultados representativos de pesquisa inédita utilizando o paradigma motivação social. (A) Média (ponto de interrupçãoúltima reforçado ratio) realizados antes da ratos parou alavanca pressionando por 5 min. Para gene X, um total de 12 WT, 7 Het, e seis ratinhos KO foram testados no paradigma de motivação social. ANOVA revelou uma diferença significativa entre os genótipos (F = 7,18, df = 2, 22, p = 0,004). Testes post hoc de Tukey HSD mostraram que os ratinhos KO desempenho significativamente abaixo controlos WT. (B) para o gene Y, um total de 8 HET e seis ratinhos WT foram testados. Um amostras t-teste independente revelou uma diferença significativa entre os genótipos (t = 2,26, df = 8,97, p = 0,05). * Indica diferença significativa a partir de ratinhos WT no nível de 0,05 alfa.

Discussão

Os paradigmas motivação social operantes descritos neste artigo são ferramentas poderosas para a caracterização do comportamento social no mouse modelos de doenças humanas. Em vez de permitir que um rato de ensaio para escolher passivamente um encontro social, estes paradigmas requerem esforço do rato de ensaio, a fim de obter uma recompensa social. A quantidade de esforço que um rato de teste é disposto para produzir a obter a recompensa social, fornece uma medida quantitativa da motivação social. Além disso, através do paradigma comparação valência, o comportamento motivado pode ser comparado entre os diferentes tipos de recompensa. Ambos os paradigmas operantes pode ser usado para avaliar motivações sexuais e parentais como também através da apresentação do estímulo apropriado no lado oposto da porta de guilhotina.

O desenvolvimento destes paradigmas motivação social envolveu a solução de problemas de diversas variáveis-chave. Por exemplo, através de estudos piloto a quantidade de tempo que o i recompensa sociaisS apresentou foi reduzida de 30 segundos para 15 segundos. Embora este tempo é suficiente para interações sociais entre os ratinhos de teste e de estímulo, a pesquisa futura pode otimizar a quantidade de tempo para a recompensa social. Do mesmo modo, o aumento progressivo da razão de pressões da alavanca para recompensa sociais foi reduzido a partir de uma taxa fixa de 5-3 baseada na pesquisa piloto.

O número de dias necessários para alcançar alavanca assintótica pressionando comportamento foi avaliada inicialmente através de 30 dias de sessões de testes diários. Determinou-se que a maioria dos mouses chegar a assíntota em 7 dias para que o número de sessões de testes foi reduzido para 20. desempenho diário faz flutuar no entanto, para a média dos dados ao longo dos últimos 10 dias garante um desempenho assintótica ao mesmo tempo proporcionar um melhor índice de verdadeiro desempenho médio de menos dias de teste. Pesquisadores devem monitorar seus dados para garantir que o desempenho assintótica é atingido dentro de 10 dias de teste ou modificar o protocolo, se necessário.

Trasessões ining também foram reduzidos a partir de 1 h 30 min. O número de sessões de formação necessárias não depende da cepa de rato e alguns ratos podem ser arbitrariamente designada como nonlearners após um número fixo de ¹⁸ sessões de treinamento. O número de dias de formação necessárias para atingir o critério para a progressão para o paradigma de teste fornece um outro índice de motivação social e é, portanto, digno de rastreamento. Os pesquisadores também pode querer experimentar com diferentes opções de recompensa alimentar para o paradigma comparação valência. No entanto, é importante que os ratinhos de teste são inicialmente formados usando uma recompensa puramente social e, em seguida, testados no paradigma motivação social antes de iniciar o paradigma comparação valência.

Esses paradigmas motivação social operantes pode ser modificado e melhorado medindo variáveis ​​adicionais superiores aos indicados no protocolo acima. Por exemplo, a localização de cada rato na sua respectiva câmara pode ser rastreado utilizando cusoftware comercial rrently disponível. Além disso, comportamentos específicos, incluindo o contato nariz-de-nariz ou vocalizações ultra-som pode ser marcado durante interações sociais. Os pesquisadores podem continuar a experiência com adaptações dos índices usados ​​no paradigma motivação social ou com os ensaios que envolvem a ausência de um parceiro social, ou até mesmo comparações envolvendo outros estímulos por trás da porta de guilhotina, como um vídeo de uma mesma espécie ou mesmo um fantoche. Para o paradigma comparação valência, análises da dinâmica de escolha através de ensaios pode fornecer mais informações sobre mudanças na motivação devido à saciedade para um determinado tipo de recompensa ^18.

Embora esses paradigmas motivação sociais operantes fornecer uma ferramenta muito necessária para quantificar motivação social em camundongos, eles têm algumas limitações. Em primeiro lugar, esses paradigmas exigem ratos para ter a capacidade cognitiva para fazer associações aprendidas entre a alavanca premente ea recompensa social. Certos modelos de mouse podetêm déficits em habilidades, tanto cognitivas e sociais tornando-se difícil avaliar motivação social usando esses paradigmas. Em segundo lugar, a natureza do encontro social é limitado como os ratos só estão autorizados a interagir através de uma grade de arame. No entanto, os ratos ainda são capazes de se engajar com sucesso em muitos comportamentos sociais típicas, mais notavelmente, nariz-a-nariz investigações. Uma limitação final destes métodos é que eles são muito trabalhosa e requer muito tempo para ser concluída. A formação e os testes através de ambos os paradigmas exige um mínimo de dois meses de sessões diárias. Alguns ratos podem levar muito mais tempo para aprender a associação-pressionando a alavanca estica o número necessário de sessões. Enquanto os paradigmas certamente não se qualificam como técnicas de alto rendimento, os dados que eles geram é altamente valiosa e vale a pena o investimento trabalho necessário. No entanto, para proporcionar uma caracterização mais completa do comportamento social de um determinado modelo do rato, recomenda-se que estes paradigmas ser nósed em conjunção com outros métodos estabelecidos de medir o comportamento social em murganhos.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Caixa de transporte modular	Med Associates Inc.	ENV-010MC
Porta Auto-Guilhotina	Med Associates Inc.	ENV-010B
Alavancas de Mouse	Med Associates Inc.	ENV-3010M
Concha Líquida com Receptáculo de Alimentos	Med Associates Inc.	Canais ENV-202M-S
	Med Associates Inc.	ENV-253C
Cubículo Atenuante de Som de Melamina	Med Associates Inc.	ENV-016MD
MED-PC IV Programa de Software	Med Associates Inc.	MED-PC IV
Câmera Microsoft Lifecam	Grade do Microsoft
Wire As			grades do Wire podem ser compradas em uma loja rígida. Cortamos grades de arame de topos de gaiola de rato de aço inoxidável.
		etílico 70%	Usado para limpar caixas de transporte entre ratos. Marca específica é desnecessária.
Cravo		de leite evadiado	0,02 ml combinado com 0,2% de sacarose para cada recompensa por rato. Sempre compramos a mesma marca para melhor consistência.
Sacarose			Qualquer marca de açúcar granular puro será devida à medida que é dissolvida no leite evaporado.