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Artigo de método

Terapia Fotodinâmica com Blended polímero condutor / Fullerene Nanoparticle Fotossensibilizadores

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⸱

DOI:

10.3791/53038

⸱

28 de outubro de 2015

 , 
1NanoScience Technology Center, University of Central Florida, 2Department of Chemistry, University of Central Florida, 3Department of Materials Science and Engineering, University of Central Florida, 4CREOL, The College of Optics and Photonics, University of Central Florida

Neste artigo

Resumo

Este protocolo descreve um método para a fabricação de nanopartículas poliméricas condutoras misturadas com fulereno. Essas nanopartículas foram investigadas quanto ao seu potencial uso como fotossensibilizadores de próxima geração para Terapia Fotodinâmica (PDT).

Resumo

Neste artigo, é relatado um método para a fabricação e avaliação in vitro reprodutível de nanopartículas poliméricas condutoras misturadas com fulereno como os fotossensibilizadores de próxima geração para Terapia Fotodinâmica (PDT). As nanopartículas são formadas pela interação hidrofóbica do polímero semicondutor MEH-PPV (poli[2-metoxi-5-(2-etilhexiloxi)-1,4-fenilenovinileno]) com o fulereno PCBM (éster metílico do ácido fenil-C 61-butírico) na presença de um solvente não compatível. O MEH-PPV tem um alto coeficiente de extinção que leva a altas taxas de formação de tripletos e carga eficiente e transferência de energia para o PCBM de fulereno. Os últimos processos aumentam a eficiência do sistema PDT por meio da formação de tripletos e radicais assistidos por fulereno e desativação ultrarrápida de MEH-PPV excitado. Os resultados aqui relatados mostram que este sistema de sensibilização de nanopartículas PDT é altamente eficaz e mostra especificidade inesperada para linhagens de células cancerígenas.

Introdução

Em Terapia Fotodinâmica (PDT) fotossensibilizantes são administrados para atingir o tecido, e após a exposição à luz do fotossensibilizador gera espécies reativas de oxigênio (ROS). ROS espécies, tais como oxigénio atómico e superóxido pode induzir estresse oxidativo e danos estruturais após a células e tecidos 1-4. Devido à sua facilidade de aplicação desse método tem sido activamente investigados e ensaios clínicos foram realizados 5,6. No entanto, os problemas significativos tais como toxicidade no escuro dos sensibilizadores, a sensibilidade do doente a luz (devido a uma distribuição não selectiva do sensibilizador), e hidrofobicidade dos sensibilizadores (o que leva à redução da biodisponibilidade e potencial toxicidade aguda) permanecem.

Relatamos aqui um método para a fabricação e in vitro de avaliação da realização de nanopartículas de polímero misturado com fulereno como os fotossensibilizadores próxima geração para PDT. As nanopartículas são formadas por auto-agregação deo polímero semicondutor MEH-PPV (poli [2-metoxi-5- (2-ethylhexyloxy) -1,4-fenilenovinileno]) com o PCBM fulereno (fenil-C 61 éster metílico do ácido butírico), quando estes materiais dissolvidos numa compatível solvente são rapidamente injectadas num solvente não-compatível (Figura 1A). A escolha de MEH-PPV como o polímero hospedeiro é motivada pelo seu elevado coeficiente de extinção que leva a altas taxas de formação de tripleto, e ao mesmo tempo eficiente e ultra-rápida de carga e energia transferência para o PCBM fulereno 7. Estas propriedades são ideais para a sensibilização de oxigénio atómico e formação de superóxido no PDT.

Fulereno tem de facto sido aplicado no PDT, tanto na forma molecular e nanopartículas de 8-13. No entanto, a citotoxicidade grave tem dificultado o desenvolvimento adicional 12. Aqui nós mostramos que encapsular o fulereno em uma matriz hospedeira de MEH-PPV para produzir nanopartículas compostas MEH-PPV / PCBM resultados em um material de sensibilização PDT que inão é citotóxico intrinsecamente, mostra especificidade para células cancerosas devido ao tamanho das nanopartículas e carga superficial, e os rendimentos de tratamento altamente eficaz na TFD doses baixas de luz devido às propriedades fotofísicas acima mencionados.

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Protocolo

1. Cultivar Linhas Celulares

  1. Thaw TE 71 (células epiteliais do timo mouse), MDA-MB-231 (células de câncer de mama humano), A549 (células de câncer de pulmão humano) e OVCAR3 (células de tumor do ovário humano) segurando os frascos criogênica em água morna por menos de 2 min . Adicionar 10 ml de meio DMEM suplementado com FBS a 10% para cada linha celular e centrifuga-se durante 6 min a 106 x g.
  2. Aspirar a suspensão de 3 ml e adicionar meios para o sedimento. Misturar as células por pipetagem adequadamente várias vezes. Adicionar esta solução de células de pré-aquecida até 7 ml de meio DMEM suplementado com 10% de FBS em frascos T75 e manter os frascos em atmosfera humidificada de 95% ar / 5% de CO2 a 37 ° C. Marque esse balão como Passage 0.
  3. Quando a confluência das células atinge 80%, a colheita das células, incubando-as com tripsina a 0,05% durante 10 min. Neutralizar a tripsina por adição de igual quantidade de mídia. Centrifugar esta solução durante 6 min a 106 x g. Retirar a suspensão e adicionar 3 ml de meio fresco a ele. Misture bem assimL e transferir pequena quantidade (100 ul) para um frasco de cultura contendo 7 ml de meio. Incubar o balão de cultura na incubadora. Rotular o frasco como uma passagem.
  4. Cultura das linhas celulares até passagem 11 ou 12.

2. Fabrico de nanopartículas

  1. Preparação de ~ não diluído solução estoque 10 -6 M (ajustada) MEH-PPV
    1. Num frasco de 1 mg adicionar poli [2-metoxi-5- (2-ethylhexyloxy) -1,4-fenilenovinileno] (MEH-PPV) com um peso molecular (médio Mn) 150,000-250,000 g / mol e 3 ml de tetra-hidrofurano (THF) . Agita-se a mistura durante 2 h enquanto se aquecia a 80 ° C sobre uma placa quente.
    2. Filtra-se a solução acima em um novo frasco utilizando um filtro de seringa de 0,2 um. Rotular esta solução como "solução não diluída estoque MEH-PPV '. Esta solução estará envolvido na preparação de nanopartículas depois de sintonia fina da concentração, tal como descrito nos passos 2.1.3 e 2.1.4.
    3. Adicionar 50 ul de solução de reserva não diluída do MEH-PPV em 3 ml de THF. Rotular esta solução como "solução diluída estoque MEH-PPV '. Transferir para uma cuvete de quartzo de 1 cm e medir a absorvância a 495 nm por espectroscopia de UV-vis.
    4. Se a absorvância da solução diluída MEH-PPV é maior do que 0,17, diluir a solução de reserva não diluída MEH-PPV pela adição de mais 1 ml de THF de cada vez, e repetir a etapa 2.1.3, até a absorvância medida a 495 nm ser no variam 0,13-0,17.
    5. Calcula-se a molaridade da solução de estoque diluída MEH-PPV usando a Lei de Lambert-Beer, como mostrado abaixo. Aqui 0,15 absorvância é utilizado como um exemplo para o resto do protocolo (isto é., Ajustar todos os seguintes cálculos com base na absorvância observada), o coeficiente de extinção MEH-PPV utilizada é de 10 7 M -1 cm -1 e o comprimento do percurso é utilizada 1 cm.
      A = ε xbxc (Eq 1)
      (ε - o coeficiente de extinção molar, A - absorvância, b - comprimento do percurso, C - concentração da solução)
      0.15 = 10 7 M -1 cm -1 x 1 cm XC (Eq 2)
      C = 1,5 x 10 @ 8 M (Eq 3)
      Utilizar esta concentração para encontrar a concentração da solução de reserva não diluída MEH-PPV como se segue:
      H 1 V 1 2 V = H 2 (Eq 4)
      0,15 x 10 -7 M x 3050 ul = H 2 x 50 uL (Eq 5)
      2 H = 9,15 x 10 -7 M (Eq 6)
      Esta é a concentração da "solução de reserva não diluída, ajustada MEH-PPV '.
  2. Cálculo de massa de MEH-PPV na solução não diluída ajustada estoque MEH-PPV
    1. Calcula-se a massa de MEH-PPV em 1 ml da solução não diluída estoque adaptados tal como indicado abaixo utilizando a molaridade obtido na secção 2.1.4 e o peso molecular (M w) de MEH-PPV, que é de 10 6 g / mol.
      M = n / V (n -. Não de moles, V - volume, em L) (Eqn 7)
      Assim, a massa de MEH-PPV em 1 ml de ajustado undsolução estoque iluted é 9,15 x 10 -4 g.
  3. Misturando PCBM em MEH-PPV
    1. Calcula-se a massa de C-Fenil 61 -butírico éster metílico do ácido (PCBM) para ser adicionado à solução de estoque MEH-PPV para fazer dopado solução MEH-PPV 50% em peso PCBM, em que 50% em peso PCBM é definido com respeito à massa de MEH-PPV (ou seja, metade da massa de MEH-PPV). Ao usar o peso de MEH-PPV obtidos na seção 2.2.
      Massa de PCBM / 9,15 x 10 -4 g de MEH-PPV x 100% = 50% em peso PCBM (Eq 8)
      Massa de PCBM = 4,57 x 10 -4 g (Eqn 9)
    2. Pesar 1 mg PCBM num frasco e adicionar 500 mL de THF. Calcular a concentração de PCBM nesta solução com o peso molecular de 910,88 PCBM como g / mol
      A molaridade da solução PCBM = 0,001 g / (910,88 g / mol * 500 ul) (Equação 10)
      A molaridade da solução PCBM = 2,19 x 10 -9 mol / l (11 Eq)
    3. Calcular o volume de solução necessário para PCBM adicionar ao não-diluido ajustado MESolução da H-PPV obter o PCBM dopado solução MEH-PPV 50% em peso em THF, utilizando a molaridade calculado no passo 2.3.2
      4,57 x 10 -4 g de PCBM x 1 mol / 910,88 GX 1 ul / 2,19 x 10 -9 mol = 229 ul (Equação 12)
      Adicionar 229 ul da solução PCBM em 1 ml de solução de estoque MEH-PPV não diluído ajustado e misturar bem.
  4. Preparação de nanopartículas pelo método reprecipitação
    1. Transferir 1 ml da solução de MEH-PPV / PCBM misturados na seringa de 1 ml com a agulha ligada a ela.
    2. Rapidamente injectar 1 ml da solução de MEH-PPV / PCBM misturado em 4 ml de água Dl agitação a 1200 rpm. Pare agitação imediatamente após a injecção. Use essas nanopartículas sem transformação.

3. Incubação de linhas celulares com nanopartículas for Imaging

Nota: Todos os experimentos com imagens foram concluídas em placas de Petri de 35 mm

  1. A absorção de nanopartiCiclos em linhas celulares
    1. Linhas celulares de cultura até a 12ª passagem. Nos 12 células de cultura de passagem th em 35 mm placas de Petri. Ajustar a concentração de células adicionadas às placas de Petri de 35 mm de tal forma que após 24 horas as células estão 40% confluentes.
    2. Nesta fase, os meios de comunicação remover DMEM suplementado com FBS a 10% a partir das placas de Petri, lavar as células duas vezes com 1x de DPBS, e adicionar 100 uL da suspensão de nanopartículas em 2 ml de DMEM para as placas de Petri.
    3. Após 24 horas remover o DMEM / suspensão de nanopartículas as placas de Petri e lavar as células com DPBS 1x 3 vezes. Em seguida, fixar as células por incubação com 4% de paraformaldeído durante 10 min. Lavar duas vezes com DPBS. Corar as células com 300 nM de DAPI por incubação com o corante durante 2 min. Lavar duas vezes com DPBS. Em seguida, manter as células em DPBS para a imagem latente.
  2. Detecção de ROS
    1. A549 Cultura e linhas celulares OVCAR3 em placas de Petri, 6 por linha de células, como explicado no ponto 3.1.1. Rotular oAs placas de Petri, como mostrado na Tabela 1.
    2. Adicionar 100 ul da suspensão de nanopartículas em 2 ml de DMEM para três das placas de Petri, como mostrado na Tabela 1 e incuba-se durante 24 h. Para as placas de Petri que receberão doses de luz, lavar as células após 24 h e suspender as células em HBSS (Solução Salina Equilibrada de Hank) Dye meios livres.
    3. Aqueça-se a lâmpada do simulador solar para 15 min. Coloque filtro UV em frente da lâmpada para filtrar a luz ultravioleta. Calibrar a lâmpada com uma célula solar de referência através do ajuste da potência da lâmpada para se obter 0,5 sol (50 mW / cm 2) intensidade na superfície da placa de Petri. Nesta configuração particular que a condição foi alcançada com 218 W de potência fornecida à lâmpada.
    4. Colocar as placas de petri sob a lâmpada (tampa aberta) durante 60 min, o que resulta em uma dose de luz de 180 J / cm 2, tal como mostrado nos cálculos abaixo:
      50 mW / cm 2 seg x 3.600 / 1.000 = 180 J / cm 2
    5. Remover HBSS sem lavagem e adicionar mais 2 ml de meio DMEM suplementado com FBS a 10% para as placas de Petri. Incubam-se as células durante mais 2 h.
    6. Para o controlo positivo incubar as células com 100 | iM de peróxido de hidrogénio (H 2 O 2) durante 30 min.
    7. Corar as células em todas as placas de petri com uma concentração final de 5 uM de o reagente de detecção de ROS por incubação das células com o corante durante 30 min a 37 ° C.
    8. Fixar as células por incubação com 4% de paraformaldeído durante 10 min. Lavar duas vezes com DPBS. Corar as células com 300 nM de DAPI por incubação com o corante durante 2 min. Lavar duas vezes com DPBS. Em seguida, manter as células em DPBS para a imagem latente.
  3. Apoptose e necrose por PI e anexina V FITC
    1. Cultura em cada linha de células 5 placas de Petri. Três destes pratos de Petri será para a experiência, enquanto os restantes 2 placas de petri será amostras de controlo. Incubar as 3 placas de Petri para experimento com nanopartículas como explained no ponto 3.1.2. As amostras de controlo não são incubadas com nanopartículas.
    2. Após 24 horas de incubação seguir o passo 3.2.3.
    3. Colocar as placas de petri de 3 experimentais sob a lâmpada (tampa aberta) e remover um em 20 minutos, uma de 40 min e um aos 60 min. Obteve-se três amostras que foram expostas a doses de luz de 60, 120 e 180 J / cm2, respectivamente (de cálculo na secção 3.2.4). Em seguida, administrar uma de 180 J / cm 2 de dosagem de luz a um dos pratos de Petri de controlo. Este é o controlo com dose de luz aplicada na ausência de nanopartículas. Não aplicar dose de luz para a amostra de controlo restantes (sem nanopartículas e nenhuma dose de luz aplicada).
    4. Substituir o HBSS com meio DMEM suplementado com 10% de FBS e manter as placas de Petri em incubação durante 4 horas.
    5. Corar as células do experimental e as placas de Petri de controlo com 20 uL de FITC anexina V por incubação das células com o corante durante 15 min. Lavar duas vezes com DPBS. Manchar o cells com 300 nM de DAPI, bem como 300 nM de PI (iodeto de propidio), por incubação com os corantes por 2 min. Lavar duas vezes com DPBS. Em seguida, manter as células em DPBS para a imagem latente.

4. Nanopartículas de citotoxicidade intrínseca

  1. Contar as células e cultura em placas de 96 poços
    1. Colheita das células a partir de balões de cultura, removendo meios e lavagem das células duas vezes com DPBS, seguido de incubação das células com tripsina a 0,05% durante 10 min. Adicionar 2 ml de meio DMEM suplementado com FBS a 10% para a solução de células resultante. Misture a solução correctamente para separar agregados de células em singuletos.
    2. Tome 100 ul da suspensão de células e 900 ul adicionar ao meio DMEM suplementado com FBS a 10%. Misture bem. Colocam-se 10 uL desta suspensão para um hemocitómetro. Contar as células utilizando um hemocitómetro e a ajustar a concentração da suspensão de células em 4.1.1 a 5 x 10 4 células / ml.
    3. Take 5 placas de 96 poços rotulado como 0 h, 24 hr, 48 h, 72 he 96 h. Adicionar 50 ul de 5 x 10 4 culas / ml (soluções de células TE 71 e A549) nas cavidades, como se mostra na Tabela 2, a sementeira, assim, 2.500 células / poço. Fazer o mesmo procedimento para OVCAR3 e MDA-MB-231 linhas celulares.
    4. Após 24 horas lavar os poços com 1 x DPBS e adicionar 50 ul de concentrações crescentes de nanopartículas nas cavidades como se mostra na Tabela 2. Prepare-se diferentes concentrações de nanopartículas pela adição de 20, 100, e 180 ul de suspensão de nanopartículas de 2.4.2 para a DMEM obter um volume final de 2 ml, que origina concentrações de nanopartículas de 0,4 x 10 -4 mg / ml, 2,0 x 10 -4 mg / mL, e 3,6 x 10 -4 mg / ml, respectivamente. Cada linha celular tem triplicado para cada concentração de nanopartículas.
  2. Medir a viabilidade celular no escuro
    1. Adicionar 10 ul de MTT a 0 hr a placa imediatamente após a adição de nanopartículas. Incubar a placa durante 4 horas para cryst formazanpara formar als. Adicionar solução de solubilização 50 ul nos poços. Incubar a placa durante 6 horas para dissolver os cristais de formazano.
    2. Medir a viabilidade das células da placa de 0 h, gravando a absorvância a 570 nm com um leitor de microplacas.
    3. Por placa de 24 h, lavar as células com DPBS e 1x adicionar 50 ul meios em cada poço de incubação depois de 24 horas com nanopartículas. Adicionar MTT e ler a placa conforme explicado em 4.2.1 e 4.2.2.
    4. Por 48 horas, 72 horas, e 96 placas de RH, lavar as células com 1x DPBS e adicionar 50 ul mídia nas cavidades após 24 hr de incubação com nanopartículas. Incubar as células para os períodos restantes.
    5. 4.2.5) medir a viabilidade celular nos pontos de tempo particulares, tal como explicado nos pontos 4.2.1 e 4.2.2.
    6. Repita a experiência completa para 3 vezes (n = 3)

5. medir a viabilidade celular após a TFD

  1. Contar as células e cultura em placas de 96 poços.
    1. Rotular um conjunto de 9Placas de 6 poços, como mostrado na Tabela 3, tanto para as placas 71 de TE e A549 + + OVCAR3 MDA-MB-231 placas. A disposição das placas vai ser o mesmo que o indicado em 4.1.3.
    2. Semear as placas de 96 poços como explicado no ponto 4.1 com o mesmo layout como mostra a Tabela 2 na seção 4.1.2.
    3. Após 24 horas, adicionar nanopartículas para as placas como explicado no ponto 4.1.4.
    4. 24 h após a adição de nanopartículas de lavar as células com DPBS e 1x adicionar 50 ul de HBSS a cada poço.
    5. Irradiam-se as placas com as respectivas doses de luz, como explicado em 3.2.3.
    6. Substituir o HBSS com 50 ul de meio DMEM suplementado com FBS a 10% e incuba-se as placas para os respectivos períodos de tempo após a TFD.
    7. Após cada período de tempo medir a viabilidade celular, como explicado em 4.2.1 e 4.2.2.

6. Microscopia de Fluorescência

  1. A absorção de nanopartículas
    1. Acender as lâmpadas do microscópio umaND o laser 30 min antes de imagem. Colocar a placa de petri contendo as células fixadas (como explicado na secção 3.1) na fase do microscópio.
    2. Recolha a fluorescência a partir de nanopartículas de DAPI e por utilização de filtros, como mostrado na Tabela 4. Sobrepor a fase contraste, nanopartículas e DAPI imagens no software ImageJ.
  2. Detecção de ROS
    1. Acender as lâmpadas do microscópio 30 min antes de imagem. Colocar a placa de petri contendo as células (tal como explicado na secção 3.2) na fase do microscópio.
    2. Recolhe-se o de fluorescência a partir das nanopartículas, DAPI, e o reagente de detecção ROS usando filtros, como mostrado na Tabela 4. Overlay o contraste de fase, de nanopartículas, de DAPI e ROS detectar imagens de reagentes em software ImageJ.
  3. Apoptose e necrose por PI e anexina V FITC
    1. Acender as lâmpadas do microscópio 30 min antes de imagem. Colocar a placa de Petri contendo as células (tal como explicado nosecção 3.3) na fase do microscópio.
    2. Recolhe-se o de fluorescência a partir das nanopartículas, DAPI, PI e Anexina V FITC usando filtros, como mostrado na Tabela 4. Overlay o contraste de fase, de nanopartículas, DAPI, PI e Anexina V-FITC imagens no software ImageJ.

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Resultados

Absorção e citotoxicidade intrínseca de nanopartículas

Os 50% em peso de nanopartículas misturados MEH-PPV / PCBM foram incubadas com TE 71, MDA-MB-231, A549 e linhas de células OVCAR3. O nível PCBM mistura foi escolhido como 50% em peso PCBM, o que foi mostrado para fornecer propriedades de carga e de transferência de energia ideal entre polímeros e conjugados fulerenos 14. As imagens de fluorescência de absorção de nanopartículas estão apresentados na Figura

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Discussão

Para conseguir a absorção de nanopartículas, foi necessário manter algumas medidas críticas enquanto a fabricação das nanopartículas. Uma solução de M MEH-PPV 10 -6 (misturado com 50% em peso PCBM) em THF foi preparada para injectar água Dl, uma vez que foi observado que a concentração desta solução desempenha um papel importante na determinação do tamanho das nanopartículas sendo formada. A concentração foi verificada por espectroscopia de Uv-vis. Note-se que no passo 2.1.3 protocolo foi necessário diluir a ...

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Divulgações

Os autores não têm nada a divulgar.

Agradecimentos

Os autores agradecem à National Science Foundation (NSF) pelo apoio financeiro a este trabalho por meio de um prêmio CAREER (CBET-0746210) e por meio do prêmio CBET-1159500. Gostaríamos de agradecer ao Dr. Turkson (Univ. do Hawaii Cancer Center) e ao Dr. Altomare (Univ. of Central Florida College of Medicine) pela assistência com a cultura de células.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Poli[2-metoxi-5-(2-etilhexiloxi)-1,4-fenilenovinileno] (MEH-PPV)Sigma Aidrich536512-1Gmédia Mn  150.000-250.000
[6,6]-fenil C61 éster metílico de ácido butírico (PCBM)Sigma Aidrich684449-500MG99,5%
Tetrahidrofurano (THF)EMDTX0284-6Seringa Drisolv
de 1 mlCientífica Nacional37510-1Para filtração de solução MEH-PPV
Filtro de seringaVWR28145-49525 mm, 0,2 µ m,
seringa de PTFE 1 mlHamilton Company81320Para injeção de solução MEH-PPV em água para fazer nanopartículas
Modificação de Dulbecco do Eagle's Medium/Ham's F-12 50/50 Mix (DMEM)Corning (VWR)45000-350
Solução salina balanceada de Hank sem vermelho de fenol (HBSS)Quality Biological (VWR)10128-740
Solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco, 1x sem cálcio e magnésio (DPBS)Corning (VWR)45000-436
Soro fetal bovino, regular (inativado pelo calor) (FBS)Corning (VWR)45000-736
Tripsina EDTA 1x 0,25%Corning (VWR)45000-664Tripsina/2,21 mM EDTA em HBSS sem bicarbonato de sódio, cálcio e magnésio Parvovírus suíno testado
16% ParaformaldeídoCiências da Microscopia Eletrônica 15710O paraformaldeído a 16% é diluído a 4% pela adição de PBS
DAPI Biotium VWR89139-054Coloração nuclear
Pipetas de 5 mlVWR82050-478
Balão de cultura de 75 cm2VWR82050-856para cultura
de células Placas de 96 poçosVWR82050-771para ensaios MTT
Placas de cultura de tecidos com aberturasGreiner Bio-One (VWR)82050-538
Iodeto de propídioSondas molecularesP3566
Anexina V FITCInvitrogenA13199corante para apoptose
Celltiter 96 ensaios não-R 1000Promega (VWR)PAG4000MTT
CellROX Green Reagent, para detecção de estresse oxidativoInvitrogenC10444para ROS
espectrômetro UV-visAgilent 8453
Espectrômetro de fluorescênciaNanoLog HoribaJobin Yvon
PD2000DLS de espalhamento de luz dinâmico, detector
IncubadoraNuAir DH Autoflow
Microscópio confocalZeiss Axioskop263X lente objetiva de imersão em óleo
Microscópio de epiluminescênciaOlympus IX7160X lente objetiva de imersão em água, câmera Andor Zyla sCMOS
Simulador SolarNewport 67005 Oriel Instruments
Referência célula solarOriel Os padrões de VLSI incorporaram
hemocitômetroHausser Scientific Partnership3200
Microplate
> Empresa de detecção de precisão o de BioTek Ex808 do leitor BioTek Ex808 de para contar pilhas

Referências

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