Determinando Preferências Ultrasonic vocalização em ratos utilizando um teste de reprodução de dois escolha

Summary

As vocalizações ultrassônicas (USVs) em camundongos diferem dependendo da idade, sexo, condição e histórico genético. Usando dois emissores de ultrassom transmitindo simultaneamente em locais diferentes, este teste de duas opções pode avaliar o reconhecimento murino e as respostas de preferência a diferentes características dos USVs.

Abstract

Os camundongos emitem vocalizações ultrassônicas (USVs) durante uma variedade de condições, como isolamento de filhotes e interações sociais adultas. Esses USVs diferem com idade, sexo, condição e histórico genético do animal emissor. Embora muitos estudos tenham caracterizado essas diferenças, ainda não foi elucidado se os camundongos receptores podem discriminar entre USVs objetivamente diferentes e mostrar preferências por características sonoras específicas. Para determinar se os camundongos podem discriminar entre diferentes características dos USVs, um experimento de reprodução foi desenvolvido recentemente, no qual as respostas de preferência dos camundongos a dois USVs diferentes podem ser avaliadas na forma de uma preferência de local.

Primeiro, USVs de camundongos foram registrados. Em seguida, os USVs gravados foram editados, cortados de acordo e exportados como arquivos de som estereofônico. Em seguida, as amplitudes de USV geradas pelos dois emissores de ultrassom utilizados no experimento foram ajustadas para o mesmo nível de pressão sonora. Emissores termoacústicos de silício nanocristalino foram usados para reproduzir os USVs. Finalmente, para investigar a preferência dos camundongos sujeitos a USVs selecionados, pares de dois sinais USV diferentes foram reproduzidos simultaneamente em uma caixa de teste de duas escolhas. Ao entrar repetidamente em uma zona definida perto de um emissor de ultrassom e pesquisar a tela de arame na frente do emissor, o mouse revela sua preferência por um som em detrimento de outro. Este modelo permite comparar a atratividade das várias características dos USVs de mouse, em vários contextos.

Introduction

Muitos animais usam vocalizações para a comunicação intra-específica. No musculus rato Mus, um importante tipo de sinal de comunicação é vocalizações ultra-sônicas (USVs), que têm frequências superiores a 20 kHz. USVs emitidos pelos ratos são considerados um componente de reconhecimento social em masculino-feminino ^1-4, fêmea-fêmea ^{1, 5,} e macho-macho ^{1, 6} interações. USVs também são emitidos por filhotes quando eles são isolados a partir de sua mãe, o que aumenta o seu comportamento de recuperação de cachorro, e, portanto, a sobrevivência dos cachorros ^7. Embora muitos relatórios analisados ​​e categorizados USVs rato

Protocol

Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Ética da Universidade de Azabu o. Todas as experiências foram realizadas numa câmara à prova de som.

1. Preparação de animal

1. Os machos para gravação
   1. Obter camundongos machos sexualmente maduros experientes no acasalamento.
2. Indivíduos do sexo feminino
   1. Obter camundongos fêmeas virgens que foram alojados com 2 a 5 ninhada por gaiola (geralmente 8 - 12 semanas de idade).
   2. Obter esfregaços vaginais diariamente para determinar a fase do ciclo estral antes do teste, de acordo com McLean ^21. Cuidados devem ser tomados para mi....

Results

Os USVs gravado a partir de um ratinho BALB-macho (161 sílabas por 20 seg), bem como o ruído de fundo foram usadas como a reprodução de sons na experiência representativa mostrada na Figura 3. Nesta experiência, 7 ratinhos B6 fêmeas foram usadas às 9 semanas de idade . Para determinar a melhor duração de teste de resposta feminina para reproduzir sons, os parâmetros comportamentais foram analisados ​​separadamente para as primeira e a última de cinco minutos de tempo total de ensaio de 10 min.

Discussion

Aqui, os resultados de um teste representativo mostraram que camundongos fêmeas podem discriminar entre USVs machos artificiais e ruído de fundo (Figura 3). A conclusão a ser tirada desses resultados é que o sinal de discriminação se reflete no tempo de permanência na sala e na zona sonora e na duração da busca na tela nos primeiros 5 minutos de teste, mas não nos segundos 5 minutos (Figura 3C, E e F). Esses dados indicam que os camundongos se habituam aos sons de reprodução, possivelmen.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Câmara à prova de som	Muromachi Kikai
Gaiola pequena	CLEA Japão	CL-0113-1
Gaiola média	CLEA Japão	CL-0103-1
Microfones condensadores ultrassônicos	Avisoft Bioacoustics	CM16/CMPA
Conversor A/D	Avisoft Bioacoustics	UltraSoundGate116H
Áudio software	Avisoft Bioacoustics	RECORDER USGH
Adobe Audition 3.0 / Software de edição de áudio	Adobe Systems	Adobe Audition 3.0
Nc-Si emissor	Original		não disponível comercialmente, mas está planejado para ser assim em um futuro próximo
Conversor D/A	National Instruments	NI USB-6251 BNC
Atenuador	Original
Amplificador	Yamatake
PC	Windows 7 profissional		Intel® core i7-2600K CPU @ 3,4 GHz, 8 GB de RAM, sistema operacional de 64 bits
Gravador de eventos Excel-macro / Software de pontuação de eventos	original		Programado por Naoto Akagawa & Placas
câmera
(feitas de resina de elastômero)	Tokyo bouon	TI-75BK B4	Corte-as no tamanho adequado http://www.piano-bouon.jp/shopping/?pid=1329272401-447630&ca=6&p=3
solução de azul de metileno de eosina azur de Giemsa	Merck Millipore	1.09204.0500