Artigo de método

Um sistema de pontuação neurológica rápida fenotípica para a Avaliação de progressão da doença na SOD1 G93A-Rato modelo de ALS

DOI:

10.3791/53257

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6 de outubro de 2015

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1ALS Therapy Development Institute

Neste artigo

Resumo

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Este protocolo de vídeo descreve um método sensível, confiável e rápido para avaliar os déficits neuromusculares em um modelo de camundongo transgênico de esclerose lateral amiotrófica.

Resumo

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O camundongo transgênico SOD1-G93A é o modelo animal mais amplamente utilizado de esclerose lateral amiotrófica (ELA). Na ALS TDI, desenvolvemos um protocolo de triagem fenotípica, demonstrado em vídeo aqui, que avalia de forma confiável a função neuromuscular de camundongos SOD1-G93A de maneira rápida. Este protocolo engloba um sistema de pontuação neurológica simples (NeuroScore) projetado para avaliar a função dos membros posteriores. O NeuroScore está focado na função dos membros posteriores porque os déficits dos membros posteriores são o primeiro sinal neurológico relatado de doença em camundongos SOD1-G93A. O protocolo desenvolvido pela ALS TDI fornece uma avaliação imparcial do início da paresia (paralisia leve ou parcial), progressão e gravidade da paralisia e é sensível o suficiente para identificar alterações induzidas por drogas na progressão da doença. Neste relato, a combinação de um manuscrito detalhado com vídeo minimiza as ambiguidades de pontuação e a variabilidade entre os experimentadores, permitindo que o protocolo seja adotado por outros laboratórios e permitindo comparações entre estudos realizados em diferentes ambientes. Acreditamos que este protocolo de vídeo pode servir como uma excelente ferramenta de treinamento para pesquisadores atuais e futuros da ELA.

Introdução

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Desde o seu desenvolvimento em meados de 1990, o modelo de camundongo transgênico SOD1-G93A tem sido o modelo animal mais utilizado da esclerose lateral amiotrófica (ELA) 1. Este modelo de ratinho transgénico foi geneticamente manipulada para sobre-expressar uma forma mutante do gene de Cu / Zn superóxido dismutase humana 1 (SOD1) portador da ALS-glicina associada a mutação da alanina no aminoácido 93 (G93A). A mutação G93A é uma das muitas mutações no gene SOD1 que colectivamente make-up de cerca de um quinto casos de ALS familiar 2.

O modelo SOD1-G93A tornou-se uma força de trabalho de pesquisa de desenvolvimento d....

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Protocolo

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Todos os experimentos são conduzidos de acordo com os protocolos descritos pelos Institutos Nacionais de Saúde Guia para o Cuidado e Uso de Animais e foram aprovados pelo cuidado com os animais institucional e uso comitê do ALS TDI (IACUC).

1. Os animais, habitação e desenho do estudo

Nota: O rato colônia SOD1-G93A foi derivado do elevado número de cópias B6SJLTgN (SOD1G93A) estirpe 1Gur originalmente produzido por Gurney et al 7.. A colónia está actualmente a ser mantido pelo cruzamento de machos transgénicos C57BL / 6-SJL com o tipo selvagem fêmeas C57BL / 6-F1 SJL. Os animais F1 são gerado....

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Resultados

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Os dados da contagem neurológicos para 90 do sexo masculino e 94 do sexo feminino não-tratados ratos SOD1 G93A-estudou em ALS TDI durante 2014 foram avaliados. Os resultados mostram que os ratos macho têm tipicamente uma progressão da doença mais agressivo do que os ratos do sexo feminino, tal como evidenciado por uma proporção maior da sua vida útil no NS 1 em comparação com as fêmeas. NS 2 e 3 NS ocorrem com praticamente a mesma frequência de diferentes sexos. 0 NS foi excluído da análise, porque é considerado um fenó.......

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Discussão

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Neste relatório, nós descrevemos um protocolo de vídeo rápido e simples que, se aplicada corretamente, é capaz de avaliar de forma confiável a progressão da doença em camundongos SOD1-G93A e identificar as alterações induzidas pela droga. Embora diferentes grupos desenvolveram sistemas de pontuação fenotípicas para ratos SOD1 G93A-8-10, que muitas vezes não fornecem detalhes suficientes sobre o procedimento e são insuficientes para replicação. Como resultado, sistemas de pontuação são raramente utilizadas for.......

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Divulgações

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Os autores não têm nada a divulgar.

Agradecimentos

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Gostaríamos de agradecer a Beth Levine pela revisão crítica do manuscrito, Valerie Tassinari pelo desenvolvimento do protocolo de genotipagem e Matt Ferola e Carlos Maya por seus excepcionais cuidados com os animais.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Cepa B6SJLTgN(SOD1G93A)1GurThe Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME002726Cepa de camundongos usada neste estudo
BreedersBiomedical Research Models, Inc., Worcester, MAManutenção de colônias
ScaleNavigator OHAUS, Parsippany, NJModelo N14120Usado para pesar camundongos
Nutra-GelHBio-Serv, Flemington, NJComida úmida fornecido a camundongos doentes
Dieta Irradiada para Animais de LaboratórioHarlan, Indianápolis, IN2918-111914MDieta para ração
Sani-chips de grau laboratorialHarlan Teklad, Indianápolis, IN7090Roupa de cama
JMPH SAS Institute, Inc., SAS Campus Drive, Cary, Carolina do Norte; v10.0.2Software estatístico
Microsoft ExcelMicrosoft, One Microsoft Way, Redmond, WAExcel 2013 (v 15.0)Software de planilha
GraphPad Prism 5GraphPad software Inc., La Jolla, CAv5.4Software gráfico
Mouse HutsBio-Serv, Flemington, NJK3272Para enriquecimento ambiental
#S4798

Referências

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  1. Gurney, M. E., et al. Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation. Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).
  2. Rosen, D. R., et al. Mutations in Cu/Zn superoxide dismutase....

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