Um sistema de pontuação neurológica rápida fenotípica para a Avaliação de progressão da doença na SOD1 G93A-Rato modelo de ALS

Summary

Este protocolo de vídeo descreve um método sensível, confiável e rápido para avaliar os déficits neuromusculares em um modelo de camundongo transgênico de esclerose lateral amiotrófica.

Abstract

O camundongo transgênico SOD1-G93A é o modelo animal mais amplamente utilizado de esclerose lateral amiotrófica (ELA). Na ALS TDI, desenvolvemos um protocolo de triagem fenotípica, demonstrado em vídeo aqui, que avalia de forma confiável a função neuromuscular de camundongos SOD1-G93A de maneira rápida. Este protocolo engloba um sistema de pontuação neurológica simples (NeuroScore) projetado para avaliar a função dos membros posteriores. O NeuroScore está focado na função dos membros posteriores porque os déficits dos membros posteriores são o primeiro sinal neurológico relatado de doença em camundongos SOD1-G93A. O protocolo desenvolvido pela ALS TDI fornece uma avaliação imparcial do início da paresia (paralisia leve ou parcial), progressão e gravidade da paralisia e é sensível o suficiente para identificar alterações induzidas por drogas na progressão da doença. Neste relato, a combinação de um manuscrito detalhado com vídeo minimiza as ambiguidades de pontuação e a variabilidade entre os experimentadores, permitindo que o protocolo seja adotado por outros laboratórios e permitindo comparações entre estudos realizados em diferentes ambientes. Acreditamos que este protocolo de vídeo pode servir como uma excelente ferramenta de treinamento para pesquisadores atuais e futuros da ELA.

Introduction

Desde o seu desenvolvimento em meados de 1990, o modelo de camundongo transgênico SOD1-G93A tem sido o modelo animal mais utilizado da esclerose lateral amiotrófica (ELA) ^1. Este modelo de ratinho transgénico foi geneticamente manipulada para sobre-expressar uma forma mutante do gene de Cu / Zn superóxido dismutase humana 1 (SOD1) portador da ALS-glicina associada a mutação da alanina no aminoácido 93 (G93A). A mutação G93A é uma das muitas mutações no gene SOD1 que colectivamente make-up de cerca de um quinto casos de ALS familiar ^2.

O modelo SOD1-G93A tornou-se uma força de trabalho de pesquisa de desenvolvimento d....

Protocol

Todos os experimentos são conduzidos de acordo com os protocolos descritos pelos Institutos Nacionais de Saúde Guia para o Cuidado e Uso de Animais e foram aprovados pelo cuidado com os animais institucional e uso comitê do ALS TDI (IACUC).

1. Os animais, habitação e desenho do estudo

Nota: O rato colônia SOD1-G93A foi derivado do elevado número de cópias B6SJLTgN (SOD1G93A) estirpe 1Gur originalmente produzido por Gurney et ^al 7.. A colónia está actualmente a ser mantido pelo cruzamento de machos transgénicos C57BL / 6-SJL com o tipo selvagem fêmeas C57BL / 6-F1 SJL. Os animais F1 são gerado....

Results

Os dados da contagem neurológicos para 90 do sexo masculino e 94 do sexo feminino não-tratados ratos SOD1 G93A-estudou em ALS TDI durante 2014 foram avaliados. Os resultados mostram que os ratos macho têm tipicamente uma progressão da doença mais agressivo do que os ratos do sexo feminino, tal como evidenciado por uma proporção maior da sua vida útil no NS 1 em comparação com as fêmeas. NS 2 e 3 NS ocorrem com praticamente a mesma frequência de diferentes sexos. 0 NS foi excluído da análise, porque é considerado um fenó.......

Discussion

Neste relatório, nós descrevemos um protocolo de vídeo rápido e simples que, se aplicada corretamente, é capaz de avaliar de forma confiável a progressão da doença em camundongos SOD1-G93A e identificar as alterações induzidas pela droga. Embora diferentes grupos desenvolveram sistemas de pontuação fenotípicas para ratos SOD1 ^G93A-8-10, que muitas vezes não fornecem detalhes suficientes sobre o procedimento e são insuficientes para replicação. Como resultado, sistemas de pontuação são raramente utilizadas for.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cepa B6SJLTgN(SOD1G93A)1Gur	The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME	002726	Cepa de camundongos usada neste estudo
Breeders	Biomedical Research Models, Inc., Worcester, MA		Manutenção de colônias
Scale	Navigator OHAUS, Parsippany, NJ	Modelo N14120	Usado para pesar camundongos
Nutra-GelH	Bio-Serv, Flemington, NJ		Comida úmida fornecido a camundongos doentes
Dieta Irradiada para Animais de Laboratório	Harlan, Indianápolis, IN	2918-111914M	Dieta para ração
Sani-chips de grau laboratorial	Harlan Teklad, Indianápolis, IN	7090	Roupa de cama
JMPH	SAS Institute, Inc., SAS Campus Drive, Cary, Carolina do Norte	; v10.0.2	Software estatístico
Microsoft Excel	Microsoft, One Microsoft Way, Redmond, WA	Excel 2013 (v 15.0)	Software de planilha
GraphPad Prism 5	GraphPad software Inc., La Jolla, CA	v5.4	Software gráfico
Mouse Huts	Bio-Serv, Flemington, NJ	K3272	Para enriquecimento ambiental