Os autores apresentam um protocolo de coleta de lenços nasais suínos para detecção e isolamento do vírus influenza A.
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Artigo de método
Nasal Wipes para Influenza A detecção de vírus e Isolamento de suínos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Vigilância de vírus da gripe A em suínos é fundamental para a saúde humana e animal, porque o vírus influenza A evolui rapidamente em populações de suínos e novas estirpes estão surgindo continuamente. Suínos são capazes de ser infectado por diversas linhagens do vírus influenza A, tornando-os anfitriões importantes para o surgimento e manutenção da nova gripe A estirpes de vírus. Amostragem suínos em diversas configurações, como granjas comerciais de suínos, feiras e mercados agrícolas, de animais vivos é importante para fornecer uma visão abrangente das cepas que circulam atualmente IAV. O ante-mortem técnica de amostragem padrão-ouro atual (ou seja, coleta de swab nasal) é trabalhoso porque exige contenção física dos porcos. Toalhetes nasais envolvem esfregando um pedaço de tecido em todo o focinho do porco com o mínimo de retenção do animal. A nasal limpe procedimento é simples de executar e não requer pessoal com formação profissional ou veterinária manipulação animal. While ligeiramente menos sensível do que swab nasal, as taxas de detecção e isolamento do vírus são suficientes para fazer nasal limpa uma alternativa viável para a amostragem de suínos individuais quando são necessários métodos de amostragem de baixa tensão. O protocolo de processo descreve as etapas necessárias para coletar uma nasal viável limpe a partir de um porco individual.
Introdução
Os vírus influenza A (IAV) causam doenças respiratórias em muitas espécies, incluindo aves domésticas, suínos e seres humanos. Devido ao rearranjo da evolução viral rápida segmentado genoma IAV pode ocorrer e novas cepas IAV frequentemente surgem. Suína são uma espécie que pode servir como um recipiente de mistura para rearranjo de iAVS a partir de múltiplas espécies hospedeiras. 1 Atualmente, existem três principais subtipos de IAV normalmente circulam entre os porcos da América do Norte (H1N1, H1N2, H3N2), mas várias introduções IAV de seres humanos têm levou a extensa diversidade IAV dentro desses subtipos. 2 evolução rápida da iAVS inf....
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Protocolo
Todos os suínos utilizados na coleta dos seguintes dados estavam protegidos sob O Comitê Animal Care Institucional e Use Ohio State University (uso de animais protocolo número 2009A0134-R1).
1. Preparação de Transporte Viral Médio e Coleta de Amostras Vials
- Adicionar 37 g de Brain Heart Infusion a 900 ml de água purificada e misturar cuidadosamente com uma vareta de agitação e um agitador magnético, enquanto se aquece a 70 ° C para dissolver completamente o pó.
- Autoclave o caldo a 121 ° C durante 15 min. Legal na bancada até que o caldo atingir a temperatura ambiente. Refrigerar a 4 ° C durante a noite se necessário. ....
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Resultados
A utilização bem sucedida deste método produz TRr-PCR resulta que, acompanhada com a utilização de um controlo interno durante a extracção de ARN e TRr-PCR, mostram amostras não contêm inibidores de PCR a partir de quaisquer detritos apanhados ambiente durante a amostragem. Após a inoculação de exemplo, os poços de isolamento de vírus deve ser livre de detritos ambientais visível a partir da amostra. Há um consenso razoável entre os resultados rRT-PCR e os resultados de isolamento de vírus com o entendimento de que a PC.......
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Discussão
Coleta de amostras de suínos utilizando swab nasal com ponta de poliéster tem se mostrado útil para conduzir a vigilância IAV; no entanto, a utilização do procedimento de swab nasal dificulta os esforços de vigilância devido ao uso obrigatório de um laço à contenção. Toalhetes nasais representam um refinamento de técnicas de amostragem suína atuais para minimizar o estresse sobre as pessoas e suínos durante a coleta de amostra. Enquanto o método tem sido desenvolvido e validado para exposição em ambientes de suínos, ele.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado em parte com fundos federais dos Centros de Excelência para Pesquisa e Vigilância da Influenza (CEIRS), Instituto Nacional de Alergia e Doenças Infecciosas, Institutos Nacionais de Saúde, Departamento de Saúde e Serviços Humanos, sob o Contrato No. HHSN272201400006C.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| BBL Brain Heart Infusion | Becton, Dickinson and Company | 211059 | |
| Penicilina G Sal de Sódio | MP Biomedicals, LLC | 021194537 | 1500 u/mg |
| Sulfato de Estreptomicina | AMRESCO LLC | 0382 | |
| Solução de Gentamicina | Mediatech, Inc. | 30-005-CR | 50 mg/ml |
| Solução de Anfotericina B | Fisher | S 24 25 | 250 ug/ml |
| Sulfato de Canamicina | Teknova | K2105 | 5000 ug/ml |
| TPP Rapid Filtermax System | TPP Techno Plastic Products AG | 99150 | |
| Frascos de Diagnóstico Nalgen | Thermo Scientific | 342002-9025 | HDPE com fecho PP branco |
| Esponja de Gaze Dermacea, 8 camadas | Covidien 441211 | 5.08 cm & 5.08 cm (2 in. × 2 in) | |
| Luvas de exame de nitrilo | Saftey Choice | 19-170-010 (AD) |
Referências
- Ma, W., Kahn, R. E., Richt, J. A. The pig as a mixing vessel for influenza viruses: Human and veterinary implications. J. Mol. Genet. Med. 3 (1), 158-166 (2008).
- Nelson, M. I., Vincent, A. L. Reverse zoonosis of influenza to swine: ne....
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Reimpressões e permissões
