A quantificação da Intra-peritoneal Ovarian Cancer Metástase

Resumo

A metástase do câncer de ovário é caracterizada por numerosas lesões intraperitoneais difusas, de modo que a quantificação visual precisa da carga tumoral é um desafio. Aqui, descrevemos um método para quantificação in situ e ex vivo da carga tumoral metastática usando células tumorais marcadas com proteína fluorescente vermelha (RFP) e imagens ópticas.

Resumo

O câncer epitelial de ovário (EOC) é a principal causa de morte por malignidade ginecológica nos Estados Unidos. A mortalidade é devida ao diagnóstico de 75% das mulheres com doença em estágio avançado, quando a metástase já está presente. A EOC é caracterizada por metástases intraperitoneais difusas e amplamente disseminadas. As células se desprendem da âncora do tumor primário no mesotélio que reveste a cavidade peritoneal, bem como no omento, resultando em metástases multifocais, geralmente na presença de ascite peritoneal. Os esforços em nosso laboratório são direcionados para uma compreensão mais detalhada dos fatores que regulam o sucesso metastático do EOC. No entanto, quantificar a carga tumoral metastática representa um desafio técnico significativo devido ao grande número, pequeno tamanho e ampla distribuição de lesões ao longo do peritônio. Aqui descrevemos um método para análise de metástase EOC usando células marcadas com proteína fluorescente vermelha (RFP) acoplada a imagens multiespectrais in vivo. Após a injeção intraperitoneal de células tumorais marcadas com RFP, os camundongos são fotografados semanalmente até o momento do sacrifício. Nesse momento, a cavidade peritoneal é exposta cirurgicamente e os órgãos são visualizados in situ. Os órgãos dissecados são então colocados em um modelo transparente rotulado e fotografados ex vivo. A remoção da autofluorescência do tecido durante o processamento da imagem usando a separação multiespectral permite a quantificação precisa da carga tumoral relativa. Este método tem utilidade em uma variedade de aplicações, incluindo estudos terapêuticos para avaliar compostos que podem inibir a metástase e, assim, melhorar a sobrevida global.

Introdução

Câncer epitelial de ovário (EOC) é a causa mais comum de morte por neoplasia ginecológica, com uma estimativa de 21,290 novos diagnósticos em os EUA em 2015 e uma estimativa de 14,180 mortes ^1. A grande maioria (> 75%) das mulheres são diagnosticadas com a doença de fase final (fase III ou IV), caracterizado por difuso metástases intra-peritoneal e mau prognóstico. A recorrência da doença na cavidade peritoneal na sequência da primeira linha de quimioterapia também é comum e representa uma das principais causas de mortalidade ^2,3. EOC metastasizes por um único mecanismo envolvendo tanto extensão directa do tumor primário para órgãos peritoneais ....

Protocolo

Todos os estudos in vivo foram aprovados pela Universidade de Notre Dame Animal Care e do Comitê Use e usado feminino camundongos C57 / BL6J.

Cultura de Células 1. Murino cancro do ovário

1. Adicione o meio de cultura ID8 murino ovário de células de cancro da seguinte forma: 1 L de Dulbecco Modified Eagle Médium (DMEM) suplementado com 4% de Soro Bovino Fetal (FBS), 1% de Penicilina / Estreptomicina, 5 ug / ml de insulina, 5 ug / ml de transferrina e 5 ng / ml de selenito de sódio.
2. Transdução ID8 células de câncer de ovário murino ¹³ para expressar Red Fluorescent Protein (RFP), utilizando partículas ....

Resultados

O mecanismo metastático do câncer de ovário é caracterizada por metástase intra-peritoneal altamente difuso composto por numerosas lesões de tamanhos variados, incluindo múltiplas (<2mm) pequenas lesões. Assim, a utilização de células tumorais marcadas com RFP (Figura 1) e imagiologia óptica fornece um método alternativo para a contagem manual e medição do tamanho da lesão. O desenvolvimento do peso do tumor ao longo do tempo pode ser determinada por pesagem semanal d.......

Discussão

Em contraste com os estudos que utilizam células de cancro do ovário humano que devem ser realizados em ratinhos imunocomprometidos, o protocolo descrito acima utiliza imunocompetentes ratinhos C57 / Bl6 e células de cancro do ovário murino singeneicas. Enquanto isto permite avaliar o papel potencial de infiltrados imunes em progressão tumoral e metástases, a presença de cabelo escuro na superfície abdominal torna menos sensível imagiologia. Utilização de um depilatório para remover os pêlos antes da imagem aumenta de a.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Dulbecco's Modified Eagle Medium	Corning	10-014-CM
Soro fetal bovino	Gibco	10437-028
penicilina/estreptomicina
Insulina-transferrina-selenito de sódio suplemento de mídia	Sigma	I-1884
Bruker Xtreme sistema de imagem de pequenos animais	Bruker Corp.
Partículas lentivirais	Bruker Corp
proteína fluorescente vermelha	GenTarget, Inc.	LVP023
tripsina para cultura de células	Corning	25-053-CI
PBS	Corning	21-040-CM
creme depilatório (como a Loção Removedora de Pêlos Nair)	compras em farmácias	n/a
Software ImageJ	http://imagej.nih.gov/ij/		download gratuito
de ferramentas de dissecação (fórceps)	Roboz Surgical Instrument	Ferramentas de dissecação RS 5130
(tesoura)	Instrumento cirúrgico Roboz	RS 5910

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