Aqui, apresentamos um protocolo para a operação e otimização da coluna Active Flow Technology (AFT) no modo Curtain flow (CF) para melhorar o desempenho de separação.
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Artigo de método
Cortina Fluxo Coluna: Optimização da Eficiência e Sensibilidade
Neste artigo
Resumo
Resumo
A tecnologia de fluxo ativo (AFT) é uma forma de tecnologia de coluna que aumenta o desempenho de separação de uma coluna de HPLC por meio do uso de um (s) encaixe (s) de extremidade multiportas especialmente construído. As colunas de fluxo de cortina (CF) pertencem ao conjunto de colunas AFT, especificamente a coluna CF é projetada para que a amostra seja injetada na região central radial do leito e um fluxo de cortina de fase móvel ao redor da injeção de soluto evita a dispersão radial da amostra para a parede. A coluna funciona como uma coluna de 'diâmetro infinito'. O objetivo do projeto é superar a heterogeneidade radial do leito da coluna e, ao mesmo tempo, maximizar a carga da amostra na região central radial do leito da coluna, o que serve para aumentar a sensibilidade de detecção. O protocolo descrito aqui descreve a configuração do sistema e da coluna CF e o processo de ajuste para uma coluna 'virtual' de diâmetro infinito otimizada.
Introdução
Nos últimos anos a tecnologia de coluna para cromatografia líquida de alta resolução (HPLC) avançou muito; capacidades de pico aumentou consideravelmente em grande parte devido à utilização de menores tamanhos de partículas e as partículas de casca de núcleo mais eficazes. Uma vez que as separações são geralmente mais eficientes, um fluxo em efeito tem havido um aumento na sensibilidade desde picos são agora mais acentuada e, portanto, mais alto 1-8.
No entanto, a heterogeneidade cama radial ainda é um fator limitante no desempenho de todas as colunas, mas esta não é uma nova história desde cromatógrafos já sabem disso há muito....
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Protocolo
Cuidado: Por favor, consulte as fichas de dados de segurança de material (MSDS) para todos os materiais e reagentes antes do uso (ou seja, MSDS para o metanol). Garantir a utilização de todas as práticas de segurança adequadas ao manusear solventes e High Performance Liquid Chromatography (HPLC) eluente. Assegurar o uso apropriado de controles de engenharia de HPLC, analítica equilíbrio e detector de instrumentação, e assegurar o uso de equipamentos de proteção individual (óculos de segurança, luvas, jaleco, calça de corpo inteiro, e sapatos fechados).
Nota: Este protocolo contém instruções sobre como utilizar uma coluna de CF, a....
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Resultados
AFT colunas foram desenvolvidas utilizando um design de frita especializado (Figura 1) na coluna de múltiplas extremidades de cabos para superar a heterogeneidade do leito da coluna e melhorar o desempenho da separação. Um estudo inter-laboratório sobre o desempenho separação de colunas de cromatografia CF (Figura 2) foi realizada com um sistema de bombas duplas configurado (Figura 3B), conforme descrito na seção 3 deste protocolo 2.......
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Discussão
Este estudo envolveu a análise inter-laboratorial de colunas de cromatografia CF para testar o desempenho analítico em termos de eficiência e sensibilidade. A coluna CF foi criada com um sistema de bombeamento dupla como descrito na secção «3. sistema de bomba dupla configurar 'para alcançar uma relação de fluxo de 40:60 (centro: periférica) na entrada da coluna CF. O 40:60 (centro: periférica) razão de fluxo foi conseguida ajustando a velocidade de fluxo de cada bomba para o valor que representa 40% e 60% do caudal.......
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Divulgações
Este trabalho foi apoiado pela UWS e ThermoFisher Scientific.
Agradecimentos
Um dos autores (DK) confirma o recebimento de um Prêmio Australiano de Pós-Graduação.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Bomba | |||
| da HPLC | |||
| Coluna de HPLC de fluxo de cortina | Thermo Fisher Scientific | Não definido | Em breve a ser comercializado |
| Metanol | Qualquer marca | Tubulação de PEEK de grau HPLC | |
| Qualquer marca | Vários comprimentos e i.d. | ||
| Cortador de tubos PEEK | Qualquer marca | ||
| Balança Analítica Balança | Qualquer marca | ||
| Cronômetro | Qualquer marca | ||
| Recipientes de coleta de eluentes | Qualquer marca | Frascos de amostra de 1-2 ml podem ser usados como recipientes de coleta de eluentes | |
| Peça em T | Qualquer marca |
Referências
- Camenzuli, M., et al. The use of parallel segmented outlet flow columns for enhanced mass spectral sensitivity at high chromatographic flow rates. Rapid Commun. Mass Sp. 26 (8), 943-949 (2012).
- Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A.
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Reimpressões e permissões
