Nos embriões de Xenopus, as células do teto do blastocele são pluripotentes e podem ser programadas para gerar vários tecidos. Aqui, descrevemos protocolos para usar explantes de telhado de blastocele de anfíbios como um sistema de ensaio para investigar as principais características in vivo e in vitro do desenvolvimento neural inicial.
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Neste artigo
Resumo
Resumo
Compreender os programas genéticos subjacentes ao desenvolvimento neural é um objetivo importante da biologia do desenvolvimento e das células-tronco. Na blástula dos anfíbios, as células do teto do blastocele são pluripotentes. Essas células podem ser isoladas e programadas para gerar vários tecidos por meio da manipulação da expressão de genes ou indução por morfogênios. Neste manuscrito, são descritos protocolos para o uso de explantes de telhado de blastocele de Xenopus laevis como um sistema de ensaio para investigar as principais características in vivo e in vitro do desenvolvimento neural inicial. Esses protocolos permitem a investigação da aquisição do destino, comportamentos de migração celular e propriedades autônomas e não autônomas da célula. Os explantes de telhado de blastocele podem ser cultivados em meio definido sem soro e enxertados em embriões hospedeiros. Este transplante em um embrião permite a investigação do compromisso de linhagem de longo prazo, as propriedades indutivas e o comportamento das células transplantadas in vivo. Esses ensaios podem ser explorados para investigar mecanismos moleculares, processos celulares e redes reguladoras de genes subjacentes ao desenvolvimento neural. No contexto da medicina regenerativa, esses ensaios fornecem um meio de gerar tipos de células derivadas de neurais in vitro que podem ser usados na triagem de medicamentos.
Introdução
O sistema nervoso de vertebrados emerge da placa neural como uma camada homogénea de células neuroepiteliais. Compreender como os programas de desenvolvimento são induzidas, codificado e estabelecido durante regionalização da placa neural é, actualmente, um dos principais objetivos em biologia do desenvolvimento. Em comparação com outros sistemas, o embrião Xenopus experimentalmente receptivo é um modelo de escolha para analisar etapas iniciais de 1,2 desenvolvimento neural. É fácil de obter um grande número de embriões, e desenvolvimento externo dá acesso aos primeiros passos de neurulação 3. Muitas ferramentas estão disponíveis para m....
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Protocolo
Experimentos cumpram a regulamentação nacional e comunitária relativa à protecção dos animais utilizados para fins científicos e com os princípios internacionalmente consagrados de substituição, redução e aperfeiçoamento.
1. Plano-montagem de Xenopus laevis girinos Tubo Neural Anterior Depois de Todo-mount Hibridização In Situ
- Obter X. laevis embriões de acordo com os procedimentos padrão 4 e idade eles até que atinjam neurula fase 26 e mais velhos (de acordo com Nieuwkoop e Faber mesa desenvolvimental 17.
- Fix X. laevis girinos, incubando-as numa solução de par....
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Resultados
Com base em considerações morfológicas em espécies diferentes, manipulações embriológicos, e o padrão de expressão de genes reguladores, um modelo conceptual que prende a placa neural é dividida em segmentos longitudinais e transversais que definem uma grade de desenvolvimento gerar campos histogênica distintas. Na placa neural, o primórdio do cérebro anterior, mesencéfalo, rombencéfalo e medula espinal são já estabelecida ao longo do eixo ântero-posterior (AP), durante a gastrulação (re.......
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Discussão
Desenvolvimento neural é orquestrado por uma complexa interação entre os programas de desenvolvimento celulares e sinais dos tecidos circundantes (revisto em 3,31,32). Descrevemos aqui um conjunto de protocolos que podem ser utilizados em X. laevis embriões para explorar extrínsecos e intrínsecos factores envolvidos na determinação do destino neural e morfogénese neuronal in vitro e in vivo. Estes protocolos podem ser utilizados como tal em X. embriões tropical.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
O autor agradece a Hugo Juraver-Geslin, Marion Wassef e Anne Hélène Monsoro-Burq por sua ajuda e conselhos, e ao Biotério do Institut Curie. O autor agradece a Paul Johnson por seu trabalho de edição no manuscrito. Este trabalho foi apoiado pelo Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS UMR8197, INSERM U1024) e por doações da "Association pour la Recherche sur le Cancer" (ARC 4972 e ARC 5115; FRC DOC20120605233 e LABEX Memolife) e a Fondation Pierre Gilles de Gennes (FPGG0039).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Paraformaldeído | VWR& | nbsp; 20909.290 | Esferas |
| resina de troca aniônica | Biorad | 140- 1231 | |
| Albumina de soro bovino | SIGMA | A-7888 | Para cultura de capa animalpH 7,6 |
| Gentamicina | GIBCO | 15751-045 | antibiótico |
| Albumina de Soro Bovino | SIGMA | A7906 | para preparação de contas |
Referências
- Nieuwkoop, P. D. IIB, Pattern formation in the developing central nervous system (CNS) of the amphibians and birds (English). Proceedings of the Koninklijke Nederlandse Akademie van Wetenschappen. 94, 121-127 (1991).
- Nieuwkoop, P. D.
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Reimpressões e permissões
