Coleta de Leite no Rato Usando Capilar Tubos e Estimativa da gordura do leite por conteúdo crematócrito

Summary

O leite é a principal fonte de nutrição para o recém-nascido. A análise dos componentes do leite pode fornecer informações sobre os fatores maternos que afetam a saúde da prole. Este protocolo descreve um método manual de coleta de amostras de leite do rato em lactação, que pode ser usado para análises posteriores a jusante.

Abstract

O leite, como única fonte de nutrição para o mamífero recém-nascido, fornece os nutrientes e a energia necessários para o crescimento e desenvolvimento da prole. Ele também contém um grande número de compostos bioativos que afetam muito o desenvolvimento do recém-nascido. A análise dos componentes do leite ajudará a elucidar os principais fatores que ligam o metabolismo e a saúde materna ao crescimento e desenvolvimento da prole. O rato de laboratório representa um organismo modelo popular para estudos maternos, e o leite de rato pode ser usado para examinar o efeito de várias intervenções fisiológicas, nutricionais e farmacológicas maternas nos componentes do leite, o que pode afetar a saúde da prole. Aqui, é descrito um método simples de coleta manual de leite do rato em lactação, que pode ser realizado por um único investigador, não requer equipamento especializado de vácuo ou sucção e fornece leite suficiente para análise subsequente a jusante. Um método para estimar o teor de gordura do leite medindo a porcentagem de creme dentro da amostra de leite, conhecido como crematócrito, também é apresentado. Esses métodos podem ser usados para aumentar a percepção da saúde materno-infantil e elucidar os fatores maternos envolvidos no crescimento e desenvolvimento adequados da prole.

Introduction

O leite é a única fonte de nutrição para mamíferos recém-nascidos, fornecendo energia e nutrientes para o crescimento e desenvolvimento infantil ^1,2. Quando o leite é constituído principalmente por células, lípidos e proteína ^1, que também contém uma pletora de compostos bioactivos que modulam o desenvolvimento vida precoce da descendência, incluindo enzimas, hidratos de carbono, hormonas, anticorpos, factores de crescimento, citocinas, exossomas, microvesículas, e pequenos RNAs tais como microARN ^1,2. O papel fundamental do leite materno na criação da prole imunitário e saúde intestinal ^3, juntamente com evidências de que ....

Protocol

Este protocolo foi aprovado pelo Comitê da Universidade de Calgary Animal Care e conformado com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório.

1. Dam Separe Offspring

1. Separa-se a barragem de sua prole para um mínimo de 5 min antes da ordenha ^12.
   NOTA: A represa pode ser ordenhadas até 5-6 horas após a separação ^1,6,13, no entanto períodos de separação mais do que 4 horas podem alterar a composição do leite ^14. Enquanto tempo de separação não parece afetar coleção volume de leite ^12, é aconselhável que um tempo de separação consistentes ser mantida dura....

Results

O leite foi recolhido como descrito no desmame de fêmeas Wistar (cerca de 22 semanas de idade, pesando 350 a 400 g) que consumiram um controlo (AIN-93G, n = 5), elevado teor de proteínas (40% de caseína p / p, n = 5) , ou alta fibra pré-biótica (21,6% p / p, 1: 1 razão de oligofrutose e inulina, n = 4) dieta durante a gravidez e lactação. A dose de oxitocina foi de 2 UI. O leite foi recolhido utilizando tubos capilares, e um tubo foi centrifugado usando um spinner hematócrito para determinar crematócrito (Figura.......

Discussion

As investigações sobre os componentes do leite materno aumentaram à medida que aumenta o interesse na pesquisa de desenvolvimento no início da vida. Como única fonte de nutrição durante o período neonatal, os compostos bioativos do leite são essenciais para o crescimento e desenvolvimento ideais, especialmente no contexto da saúde intestinal e imunológica³. O método apresentado aqui é um método simples e não invasivo de coleta de leite do rato lactante em quantidades suficientes para análise a jusante, como o .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Equipment - Ordenha
Seringas de 1 ml	BD-Canada	309602
agulhas de 25 G	BD-Canada	305122
agulhas de 18 G	BD-Canada	305196
50 μ l Tubos capilares microdispensadores	Fisher Scientific	21-169D
Ocitocina (20 unidades USP/ml)	Bimeda-MTC	1OXY015
PPC Vet Isoflurano Anestésico para inalação, 250 ml	Fresenius Kabi	M60302	Usado por ordem de um veterinário Almofada de
preparação de álcool estéril	Dukal	853
Almofada de bancada absorvente	VWR	82020-845
Manta Maxi-Therm Hyper/Hypothermia	Cincinnati Sub-Zero	274
Máquina de Anestesia para Roedores com Vaporizador	Benson Medical Industries Inc.		Sujeito às necessidades individuais do laboratório
Máscaras de animais	Benson Medical Industries Inc.	50100/50102
Tubos de Microcentrífuga	Axygen	MCT-060-C
ChroMini Aparador Profissional	Wahl
Equipment - Creamatocrit
StatSpin SafeCrit Tubos de Microhematócrito de Plástico (Não Tratado)	Fisher Scientific	22-274-914
Critoseal Bandeja de selante de tubo capilar	VWR	470161-478
Centrífuga de microhematócrito StatSpin	CritSpin Beckman Coulter, Inc	X00-004999-001