Introduction
Utveksling av næringsstoffer, gasser og avfallsprodukter i løpet eutherian svangerskap er mediert av morkaken. I den kvinnelige skjede, livmor arterier er de viktigste rørledninger av blod til livmoren. Etter implantasjon, disse gren inn i spesialiserte fartøy kalt spiralarteriene at spolen gjennom decidua basalis mot fetoplacental enhet. Diameter og elastisitet av disse spiralarteriene, som er omgitt av leukocytter, spesielt uterin natural killer (unk) celler, diktere volumet og hastigheten av blod tilgjengelig for placenta 1,2. Riktig hemodynamiske endringer som følge av ombygging av spiralarteriene er avgjørende for graviditet suksess.
Mens de underliggende mekanismene varierer i detalj mellom menneske og mus graviditet, det endelige resultatet av ombyggingen prosessen i begge artene er utvidet, høy ledningsevne blodkar som mister sin glatt muskulatur lag. I mus, unk celle-avledet interferon (IFN-) γ er nødvendig for å indusere disse endringene på rundt midten av svangerskapet 3-5. Mus som mangler enten NK-celler eller komponenter av IFN-γ signalveien ikke klarer å gjennomgå slike endringer, og dette er forbundet med redusert føtal vekst 6,7, hvilket understreker viktigheten av en adekvat blodtilførsel til fetoplacental enheten. Under tidlig graviditet, interstitiell og endovaskulær invasjon av extravillous trophoblast og deres samspill med Unk cellene er viktig for å indusere vaskulære forandringer og fremme fostervekst 8-10. unk celler kan organisere human trophoblast invasjon gjennom kjemokiner 11 og cytokiner så som granulocytt-makrofag - kolonistimulerende faktor (GM-CSF) 12. Shallow trophoblast invasjonen er assosiert med redusert arteriell ombygging og svangerskapskomplikasjoner som svangerskapsforgiftning 9.
Denne protokollen er basert på den banebrytende arbeidet til Anne Croy som beskrev den viktigerolle i immunsystemet og spesielt NK-avledet IFN-γ for vellykket vaskulær remodellering gjennom immunhistokjemi og elegant overføringseksperimenter 5,13. Her beskriver vi en rask og økonomisk måte å vurdere ombygging status av spiralarteriene. Selv om vår lab vurderer dette rutinemessig på midten av svangerskapet (drektighets dag (gd) 9,5) 14, tar ombygging prosessen sted mellom gd8.5 og 12,5 15. Ankomsten av automatiserte lysbilde skannere har i stor grad vurderingen av fartøyet og lumen områder fra seksjoner og vi fant dette å være en mer reproduserbar tilnærming enn å måle fartøyet diameter. Tilsetning av immunhistokjemisk påvisning av SMA åpner for en grei validering av resultatene oppnådd fra stereological vurdering. Som med alle stereological teknikker, anbefales det å utføre vurderingen som en blindet forsøk med minst to sensorer. For å oppnå dette, kan en randomisering trinn innføres når serielt kutteskaps prøvene slik at etterforskerne vurderer lysbildene ikke vet hvorfra eksperimentelle gruppen prøvene kommer.
Det overordnede målet med denne protokollen er å gi et pålitelig verktøy for å vurdere nøye ombygging av spiralarteriene hos mus med definerte mors og fars genotyper, i sammenheng med musemodeller for svangerskapsrelaterte komplikasjoner. Resultatene streker avhengighet unk celler av denne prosessen, som er avgjørende for normal fostervekst.
Protocol
Alle prosedyrer diskutert i dette manuskriptet er i samsvar med britiske hjemmekontoret forskrifter og er godkjent av Cambridge Ethical Review-panelet.
1. Prøvetaking
- Sett opp tidsbestemte parr hjelp til 8-12 uker gamle kvinnelige C57BL / 6 mus med voksne menn (opp til 2 hunner per hann) i ettermiddag. Sjekk for tilstedeværelsen av vaginal plugger som et tegn på copulation tidlig på morgenen på følgende dager. Tilstedeværelsen av en plugg i morgen markerer gd0.5.
- På gd9.5, avlive dyret ved halshugging og åpne bukhulen. Vær oppmerksom på at aktiv dødshjelp av CO 2 kan føre til vasodilatasjon.
- Bruk tanntråd til å forsiktig ligere livmor arterier (figur 1, stiplede piler). Bind floss rundt arteriene på tuppen av hver livmor horn, proksimale til eggstokkene, samt rundt livmorhalsen.
Merk: Ikke brudd fartøyene, da dette kan føre til kollapset arterier. <li> Disseker livmoren raskt ved hjelp av disseksjon saks, excising hele livmoren distalt til de tre ligeringspunktene på tuppen av livmorhornene og cervix. - Plasser livmoren på en forberedt polystyren stykke slik at begge hornene er innrettet langs samme lengdeakse i motsatte retninger fra livmorhalsen. Forsiktig strekke det og pin på plass ved hjelp av 2-3 25 G nåler.
- Senk polystyren inn i en forberedt 50 ml konisk tube. Topp opp til 50 ml med 10% formalin. Fix for 5-6 timer ved romtemperatur.
- Kast formalinoppløsning og erstatte med 50 ml 1 x fosfatbufret saltvann (PBS) i 5 min.
- Skjære de to uterine horn proksimalt til ligeringspunkt i hver ende, og proksimalt til livmorhalsen i sentrum, trimmer bort overflødig fett rundt implantasjonssteder og vaskes to ganger i PBS i 5 minutter for å fjerne spor av formalin.
- Oppbevar prøvene i 70% etanol ved 4 ° C (i opptil to uker) før behandling.
FORSIKTIG: Ethmetanol tilsettes er meget brannfarlig. - Bruke et automatisert behandlingssystem med parameterne er angitt i tabell 1. Bygg hornene individuelt i parafin, slik at de kan kuttes langs planet vinkelrett på lengdeaksen av livmor. Dette sikrer at det maksimale område for hvert implantasjonsstedet blir utsatt for analyse i midten av blokken (figur 2A).
EKSTRA: Dette er et praktisk tidspunkt for randomisering av blokkene hvis ønskelig. - Ved hjelp av en mikrotom, kuttet seriesnitt av 7 mikrometer tykkelse fra blokkene. Flekk ett avsnitt på hver 49 mikrometer intervall med hematoxylin og eosin (H & E, se punkt 2.1). Lagre de gjenværende delene ved romtemperatur i SMA farging og andre nedstrøms applikasjoner.
| Løsning | Tid | Temperatur |
| 70% etanol | 1 time | 40 ° C |
| 100% etanol | 1 time | 40 ° C |
| 100% etanol | 1 time | 40 ° C |
| 100% etanol | 1 time | 40 ° C |
| 100% etanol | 1 time | 40 ° C |
| 100% etanol | 1 time | 40 ° C |
| 100% etanol | 1 time | 40 ° C |
| 1 time | 40 ° C | |
| Xylen | 1 time | 40 ° C |
| Xylen | 1 time | 40 ° C |
| Parafin | 1 time | 63 ° C |
| Parafin | 1 time | 63 ° C |
| Parafin | 1 time | 63 ° C |
| Parafin | 1 time | 63 ° C |
Tabell 1:. Innstillinger for automatisert vev behandling Oversikt over innstillingen som brukes for behandling av uterinvevet
2. Stereological Assessment
- H & E Farging
- Deparaffinize seksjoner ved å dyppe objektglass montert på et lysbilde stativ i en 100% xylen-bad i 10 minutter ved romtemperatur.
FORSIKTIG: Xylen er brannfarlig og en mistenkt kreftfremkallende som er giftig gjennom kontakt og innånding. Dette arbeidet må foregå på en avtrekkshette, ved hjelp av personlig verneutstyr (PVU). - Fordype lysbilder i bad som inneholder ren xylen i ytterligere 10 min.
- Sekvensielt dyppe objektglass i bad inneholdende 100% etanol, 95% etanol, 70% etanol og renset vann i 5 min hver.
- Dyppe objektglass i 50% Gill No 3 hematoksylin-løsning, fortynnet med renset vann, i 5 min.
FORSIKTIG: Hematoxylin er skadelig ved svelging og kontakt øynene. Bruk egnet verneutstyr ved håndtering. - Vask lysbilder i en farging trau under rennende vann i 10 minutter.
- Dyppe objektglass i 1% syre / alkohol-løsning (1% 10 M saltsyre i 70% etanol) i 10 sekog vask i en farge trau under rennende vann fra springen.
- Fordype lysbilder i eosin løsning for 30 sek og vaske i en farge trau under rennende vann i 10 minutter.
- Innenfor en avtrekkshette, sekvensielt fordype lysbilder i bad som inneholder 70% etanol, 95% etanol og 100% etanol i 5 min hver.
- Fordype lysbilder i bad som inneholder xylen i 10 min.
- Mount Dekk bruker en xylen-baserte montering medium. Tørk horisontalt og grundig i en avtrekkshette før visualisering lysbildene under et mikroskop.
- Deparaffinize seksjoner ved å dyppe objektglass montert på et lysbilde stativ i en 100% xylen-bad i 10 minutter ved romtemperatur.
- Stereological Vurdering av fartøyets størrelse og renovere Status
- For hver implantasjonsstedet, bestemme hvilke deler seg i nærheten av midsagittal punktet. Den chorioallantoic vedlegg mellom fosteret og utvikle morkaken fungerer som en god indikator på midsagittal punktet.
- Velg 3 seksjoner på 49 mikrometer intervaller nær midsagittal punkt for analysen. Skanne utvalgte lysbilder. For å unngå incLuding årer, noe som har vist seg å være mer perifert plassert i implantasjonssteder 16, begrenser analysen på den sentrale 2/4 hvert implantasjonsstedet (figur 2A).
- For å vurdere lumen størrelse, tegne rundt innsiden av skipene og ta arealet av denne formen. For den totale fartøystørrelse, tegn rundt den ytre vegg av fartøyet, inkludert endotelceller, pericytes og utført leukocytter.
Merk: Forholdet mellom total fartøystørrelse til lumen er en proxy for ombygging status av et fartøy. Når blodkarene spole gjennom planet at delen ble kuttet med, kan det være flere tverrsnitt av den samme arterien i ett lysbilde. Unngå å måle den samme arterie flere ganger. - Spill målingene fra de 5 fartøyene i hvert implantasjonsstedet med de største og roundest lumen. Måle hver implantasjonsstedet i tre eksemplarer (tre seksjoner fordelt 49 mikrometer fra hverandre). Gjennomsnittet av disse 15 målinger represents den midlere diameteren av de største skipene.
- For å unngå overrepresentasjon av større skip i noen prøver, måler samme antall skip i hvert implantasjonsstedet.
3. kvalitativ vurdering Bruke Immunohistochemistry
- Deparaffinization og Utvanning
- Deparaffinize seksjoner ved å dyppe objektglass som er montert i en varmebestandig lysbilde stativ i en 100% xylen-bad i 10 minutter ved romtemperatur.
- Fordype lysbilder i bad som inneholder ren xylen i ytterligere 10 min.
- Sekvensielt dyppe objektglass i bad inneholdende 100% etanol, 95% etanol og 70%, og renset vann i 5 min hver.
- Antigen Retrieval
- Fremstille en 10 mM natriumcitratbuffer i renset vann og juster til pH 6 ved anvendelse av 10 M saltsyre.
- Fyll en varmebestandig beholder som kan inneholde 600 ml med 400 ml natriumcitratbuffer og plasser i en innenlandsk trykkoker inneholder tilstrekkelig water å senke halvparten av beholderen. Løst feste lokket på trykkokeren og varme til koking.
- Sted glide kurven i natriumcitratbuffer og tett feste lokket til trykkokeren. Når trykksatt, tillater å koke i 3 minutter.
- Depressurize trykkokeren og fjerne den indre beholderen. Tillat lysbilder avkjøles i natriumsitrat buffer i 10 minutter ved romtemperatur.
- Vask glir i et bad inneholdende renset vann i 5 min.
- Omringe delene ved hjelp av en hydrofob barriere penn.
- Vask objektglass ved å nedsenke i PBS i 5 min.
- Blokkering Endogen peroksidase og ikke-spesifikk binding
- Inkuber seksjoner med 3% hydrogenperoksid fortynnet i renset vann i et fuktet kammer i 30 min ved romtemperatur.
FORSIKTIG: Hydrogenperoksid er svært irriterende på øyne, hud og ved inntak. Bruk egnet verneutstyr. - Tapp av overflødig hydrogen peroxide løsningen og vask SLIdes to ganger ved å nedsenke i Tris-bufret saltvann (TBS) i 2 minutter hver.
- Inkuber seksjoner med museimmunoglobulin blokkerer reagens fra musen på mus kit utarbeidet i henhold til produsentens instruksjoner.
- Vask glir to ganger i TBS i 2 minutter hver.
- Inkuber seksjoner med 3% hydrogenperoksid fortynnet i renset vann i et fuktet kammer i 30 min ved romtemperatur.
- Immundeteksjon av glatt muskulatur Actin
- Forbered antistoff fortynningsløsning (følger med kit) og inkuberes med seksjoner i 5 min ved romtemperatur, eller i henhold til produsentens instruksjoner.
- Fortynn 1: 100 muse-anti-human glattmuskel aktin (DAKO M0851) i antistoff fortynningsløsning. Fortynn mus IgG2a isotype kontroll-antistoff i fortynningsløsning, slik at sluttkonsentrasjonen immunoglobulin er tilsvarende i begge løsninger.
- Kranen skytende antistoff fortynningsløsning og dekkseksjoner med enten utvannet antistoff eller isotypekontroll løsninger. Inkuber i et fuktet kammer i 30 min ved romtemperatur.
- Vask glir to ganger i TBS for2 minutter hver.
- Fortynn biotinylert anti-muse-sekundært antistoff og inkuberes seksjoner i 10 minutter ved romtemperatur, eller i henhold til produsentens instruksjoner.
- Vask glir en gang hver med TBS og PBS i 2 minutter, respektivt.
- Forbered 3,3'-Diaminobenzidin (DAB) løsning i henhold til produsentens instruksjoner. Dekk seksjoner med DAB-løsning og inkuberes i opptil 4 min, noe som sikrer å overvåke deler for å unngå overflødig farge utvikling.
FORSIKTIG: DAB er brannfarlig og en mistenkt kreftfremkallende som er giftig gjennom kontakt og innånding. Bruk egnet verneutstyr ved håndtering. - Dyppe objektglass i renset vann når ønsket intensitet av farging er nådd.
- Counterstain med 50% Gill No. 3 hematoxylin for 20 sek og vaske i en farge trau under rennende vann inntil vannet er klart.
- Dehydrering og Montering
- Innenfor en avtrekkshette, sekvensielt fordype lysbilder i bad som inneholder minst 70% ethmetanol tilsettes, 95% etanol og 100% etanol i 5 min hver.
- Fordype lysbilder i bad som inneholder xylen i 10 min.
- Mount Dekk bruker en xylen-baserte montering medium. Tørk horisontalt og grundig i en avtrekkshette før visualisere lysbildene under et mikroskop
Representative Results
Rag2 - / - IL2rg - / - mus mangler alle modne lymfocytter, inkludert NK-celler 17, og deres livmor arterier unnlater å gjennomgå de vaskulære endringer sett i congenic villtype C57BL / 6 (WT) mus rundt midten av svangerskapet 5,14. Som et resultat av denne reduserte remodeling Rag2 - / - IL2rg - / - mus viser signifikant mindre luminale overflatearealer, som indikerer total mindre fartøy som kan visualiseres med H & E-fargede seksjoner og kvantifisert stereologically (figur 2). Videre er den relative veggtykkelse (fartøy til lumen ratio) høyere i spiralarteriene i disse mus, noe som tyder på nedsatt tilførsel av blod og blod høyere hastighet.
Dette kvantitativ vurdering ble bekreftet ved hjelp av immunhistokjemisk påvisning av SMA. Det er karakteristisk for WT mus å miste mesteparten av SMA inne i det vaskulære mediaav spiralarteriene innen midten av svangerskapet. Hvis denne NK-celle-drevet prosessen ikke finner sted, forblir SMA i media av karene, og kan lett detekteres immunhistokjemisk som ringer rundt blodkar (figur 3).
Figur 1: Mouse livmor på gd9.5, skjematisk oversikt Tegning som viser de relative posisjonene til livmor horn, livmorhals (blå) og hoved livmor arterier (rød).. Indikert er den lange aksen av livmorhornene (piler) og ligeringspunktene (stiplede piler). Seksjonene for immunhistokjemi er stanset ut langs planet av visningen.
Figur 2:. Stereological vurdering av arteriell ombygging på midten av svangerskapet (A) Eksempel assevurdering av luminal og totale fartøy områder på H & E farget seksjoner fra WT kvinner i sentrale 2/4 av decidua basalis (avgrensa av den vertikale sorte stiplede linjer) på gd9.5. I skipene ved høyere forstørrelse, den røde stiplede linjen avgrenser totalt fartøy området, gul stiplet linje avgrenser lumen området. Bar = 500 mikrometer (til venstre), 50 mikrometer (til høyre). Den lange aksen av uterus er en horisontal linje i denne retning. (B) Kvantifisering av luminale områder (venstre panel) og forholdet mellom luminal området til total fartøy området (høyre panel) fra WT (C57BL / 6) og Rag2 - / - Il2rg - / - mus (på C57BL / 6 bakgrunn). Hvert datapunkt representerer gjennomsnittet av 15 målinger (5 målinger per seksjon, 3 seksjoner per implantasjonsstedet). Barer representerer gjennomsnittet av n = 11-13 implantasjoner fra 4 graviditeter per gruppe; p-verdi fra en to-tailed, uparet Mann-Whitney test. WT: villtype.
Fig. 3: Immunohistokjemisk påvisning av glatt muskulatur aktin i decidua basalis Representative SMA flekker på WT (øverst) og Rag2 - / - IL2rg - / - mus (på C57BL / 6 bakgrunn, bunn) på gd9.5. Bar = 100 mikrometer. WT: villtype.
Discussion
Protokollen som presenteres her er utformet for å tilveiebringe en reproduserbar metode for å vurdere de vaskulære endringer som er nødvendig for vellykket svangerskap. Kritisk for å lykkes med denne evalueringen er kvaliteten på vevssnitt. Både nøyaktig bestemme gestasjonsalder av implantasjoner samt pålitelig ligere livmor arterier er avgjørende skritt. Endringer i parametere som tid for fiksering, vev-behandlingsprotokoll, etc., kan også påvirke resultatet. For en objektiv vurdering stereological, er det viktig å måle det samme antall fartøy i hvert implantasjonsstedet. Det anbefales å måle 5 skip per implantasjonsstedet og hver implantasjonsstedet i tre eksemplarer. Gjennomsnittet av disse 15 målingene representerer den midlere størrelse av de 5 største skipene.
Videre til data fra alymphoid Rag2 - / - IL2rg - / - mus vist her, fant vi denne protocol nyttig for en rekke modeller av utilstrekkelig mors immunforsvar, deriblant en av hemmet NK-celler 14. Defekter i arteriell ombygging har også vært vist i modeller av svekket trophoblast invasjon 18 og teknikkene som er beskrevet her kan være nyttig for å vurdere blodkar i disse tilfellene. Vi optimalisert og validert denne protokollen for undersøkelse av decidual vaskulær remodellering ved midten av svangerskapet hos mus, men det er også tenkelig å tilpasse denne protokollen til å arbeide i andre modellsystemer (f.eks rotter) eller i andre organer. Mens vi finner at NK-avhengige ombygging kan robust vurderes til gd9.5, kan det endres for andre tidspunkter som gd12.5, når morens blodkar er fullstendig ombygd. På dette tidspunkt, er endovaskulær trophoblast invasjon dypere og 16 dette tidspunkt kan være mer egnet for undersøkelser av rollen som trophoblast for vaskulære endringer. Hvis ytterligere kvantitative avlesninger er ønsket,søkere kan også øke antallet seksjoner farget for SMA og vurdere den prosentandel av delvis ombygde skip innen hvert implantasjonsstedet.
En begrensning av denne protokollen er beskrivende natur histologiske undersøkelser. Funksjonelle analyser, men er bare langsomt blir tilgjengelig (slik som Doppler ultralyd 19). Disse teknikkene krever teknisk kompetanse og mye høyere utgifter til anskaffelse og vedlikehold av utstyr, men har fordelen av å gi en langsgående in vivo avlesning for effekten av endringene som kan observeres histologisk. En mulig ulempe med alle stereological eksamener er subjektivitet etterforskerne. For å oppnå dette, kan ved hjelp av to uavhengige sensorer som analyserer alle prøver uavhengig bidra til å unngå dette problemet. Mens protokollen skissert her gir innsikt i hvor mye blod kan nå fetomaternal grensesnittet, kan det være en fordel å kombinere det med komplementary tilnærming for å vurdere den totale mengden av blod til enhver tid i blodkar gjennom plast kaster 16.
Styrken i denne protokollen er at den kombinerer to uavhengige tilnærminger. Vaskulær endringen er først kvantitativt vurdert av stereology og resultatet blir deretter validert kvalitativt hjelp immunhistokjemi. Påliteligheten av resultatene kan bli ytterligere styrket ved randomisering prøvene. Prøvene forberedt for denne protokollen kan lett brukes til å også undersøke andre parametere av svangerskapet som decidualisation, utvikling av mesometrial lymfoid summen av svangerskapet (MLAp) eller immundeteksjon av celler av interesse, å strengt vurdere en graviditet fenotype ved midgestation.
Arteriell ombygging er et kritisk punkt for ukompliserte svangerskap hos kvinner og unnlatelse av disse endringene underbygger de store fødselssyndromer (GOS), nemlig svangerskapsforgiftning, begrensning fostervekst ogdødfødsel. Vi presenterer her teknikker for å nøye vurdere en graviditet fenotype i musemodeller som etterligner noen av egenskapene til patofysiologien ved GOS.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| C57BL/6 mice (8-12 weeks old) | Charles River | ||
| Dental floss | |||
| Polystyrene | Used for holding tissue in place | ||
| Straight dissection scissors | EMS | 72940 | |
| 25 G needles | BD | 300600 | Used for holding tissue in place |
| 50 ml conical tubes | Falcon | 352070 | |
| Formalin solution, neutral buffered, 10% | Sigma | HT501128-4L | |
| Phosphate buffered saline | Sigma | P3813-10PAK | |
| Ethanol | Sigma | 32221-2.5L | |
| Paraffin | Sigma | 327204-1KG | |
| Xylene | Fisher Scientific | X/0250/17 | |
| Automated tissue processor | Sakura | 6032 | |
| Microtome | Leica | RM2245 | |
| Slide rack | Sigma | Z710989 | |
| Coplin jar | Sigma | S5891 | |
| Purified water | |||
| Hematoxylin solution, Gill No. 3 | Sigma | GHS332-1L | |
| Eosin Y solution | Sigma | HT110116-500ML | |
| Fume hood | |||
| Xylene-based mounting media | VWR | 361254D | |
| Slide scanner | Hamamatsu | NanoZoomer | |
| Slide scanner software | Hamamatsu | NDP viewer | |
| Sodium citrate tribasic dihydrate | Sigma | 32320 | Make 10 mM solution and adjust pH to 6 |
| Pressure cooker | Used for antigen retrieval | ||
| Heating plate | Used for antigen retrieval | ||
| Hydrophobic barrier pen | Vector | H-4000 | |
| Hydrogen peroxide | Fisher Scientific | H/1800/15 | |
| Tris buffered saline | Sigma | T6664-10PAK | |
| Mouse on mouse kit | Vector | BMK-2202 | Significantly reduces background |
| Mouse anti-human smooth muscle actin | DAKO | M0851 | Cross-reacts with mouse |
| IgG2a isotype control | DAKO | X0943 | |
| Humidified chamber | Sigma | H6644 | |
| 3,3’-Diaminobenzidine solution | Sigma | D4293-5SET | |
| Hydrochloric acid | Fisher Scientific | H/1050/PB17 |
References
- Burton, G. J., Woods, A. W., Jauniaux, E., Kingdom, J. C. Rheological and physiological consequences of conversion of the maternal spiral arteries for uteroplacental blood flow during human pregnancy. Placenta. 30 (6), 473-482 (2009).
- Pijnenborg, R., Vercruysse, L., Hanssens, M. The uterine spiral arteries in human pregnancy: facts and controversies. Placenta. 27 (9-10), 939-958 (2006).
- Ashkar, A. A., Croy, B. A. Interferon-gamma contributes to the normalcy of murine pregnancy. Biol Reprod. 61 (2), 493-502 (1999).
- Ashkar, A. A., Croy, B. A. Functions of uterine natural killer cells are mediated by interferon gamma production during murine pregnancy. Semin Immunol. 13 (4), 235-241 (2001).
- Ashkar, A. A., Di Santo, J. P., Croy, B. A. Interferon gamma contributes to initiation of uterine vascular modification, decidual integrity, and uterine natural killer cell maturation during normal murine pregnancy. J Exp Med. 192 (2), 259-270 (2000).
- Ashkar, A. A., et al. Assessment of requirements for IL-15 and IFN regulatory factors in uterine NK cell differentiation and function during pregnancy. J Immunol. 171 (6), 2937-2944 (2003).
- Barber, E. M., Pollard, J. W. The uterine NK cell population requires IL-15 but these cells are not required for pregnancy nor the resolution of a Listeria monocytogenes infection. J Immunol. 171 (1), 37-46 (2003).
- Colucci, F., Boulenouar, S., Kieckbusch, J., Moffett, A. How does variability of immune system genes affect placentation. Placenta. 32 (8), 539-545 (2011).
- Pijnenborg, R., Vercruysse, L., Brosens, I.
- Colucci, F., Kieckbusch, J. Maternal uterine natural killer cells nurture fetal growth: in medio stat virtus. Trends Mol Med. 21 (2), 60-67 (2015).
- Hanna, J., et al. Decidual NK cells regulate key developmental processes at the human fetal-maternal interface. Nat Med. 12 (9), 1065-1074 (2006).
- Xiong, S., et al. Maternal uterine NK cell-activating receptor KIR2DS1 enhances placentation. J Clin Invest. 123 (10), 4264-4272 (2013).
- Croy, B. A., Zhang, J., Tayade, C., Colucci, F., Yadi, H., Yamada, A. T. Analysis of uterine natural killer cells in mice. Methods Mol Biol. 612, 465-503 (2010).
- Kieckbusch, J., Gaynor, L. M., Moffett, A., Colucci, F. MHC-dependent inhibition of uterine NK cells impedes fetal growth and decidual vascular remodelling. Nat Commun. 5, (2014).
- Zhang, J., Chen, Z., Smith, G. N., Croy, B. A. Natural killer cell-triggered vascular transformation: maternal care before birth. Cell Mol Immunol. 8 (1), 1-11 (2010).
- Adamson, S. L., et al. Interactions between trophoblast cells and the maternal and fetal circulation in the mouse placenta. Dev Biol. 250 (2), 358-373 (2002).
- Colucci, F., Soudais, C., Rosmaraki, E., Vanes, L., Tybulewicz, V. L. J., Di Santo, J. P. Dissecting NK cell development using a novel alymphoid mouse model: Investigating the role of the c-abl proto-oncogene in murine NK cell differentiation. J Immunol. 162 (5), 2761-2765 (1999).
- Hu, D., Cross, J. C. Ablation of Tpbpa-positive trophoblast precursors leads to defects in maternal spiral artery remodeling in the mouse placenta. Dev Biol. 358 (1), 231-239 (2011).
- Zhang, J. H., Croy, B. A. Using Ultrasonography to Define Fetal-Maternal Relationships: Moving from Humans to Mice. Comparative Med. 59 (6), 527-533 (2009).
