Artigo de método

Quantitativa de autofluorescência de Avaliação de Doenças da retina

DOI:

10.3791/53577

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11 de março de 2016

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1Department of Ophthalmology, NYU School of Medicine, 2Harkness Eye Institute, Columbia University

Neste artigo

Resumo

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O epitélio pigmentar da retina (EPR) suporta a retina sensorial por meio da reciclagem de subprodutos do ciclo visual, que se acumulam como lipofuscina. Esses produtos são autofluorescentes e podem ser fotografados qualitativamente in vivo. Aqui, descrevemos um método para obter imagens quantitativas da lipofuscina RPE usando oftalmoscopia a laser de varredura confocal.

Resumo

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O epitélio pigmentar da retina (EPR) é justaposto à retina sensorial sobrejacente e suporta a função do sistema visual. Entre as tarefas desempenhadas pelo EPR estão a fagocitose e o processamento de segmentos fotorreceptores externos por meio de organelas derivadas de lisossomos. Esses produtos de degradação, armazenados e chamados de grânulos de lipofuscina, são compostos parcialmente por bisretinóides, que possuem amplos espectros de absorção e emissão de fluorescência que podem ser detectados clinicamente como autofluorescência do fundo com oftalmoscopia a laser de varredura confocal (cSLO). O acúmulo de lipofuscina está associado ao aumento da idade, mas também é encontrado em vários padrões em doenças degenerativas adquiridas e hereditárias da retina. Assim, estudar seu padrão de acúmulo e correlacionar esses padrões com alterações na retina sensorial sobrejacente são essenciais para entender a fisiopatologia e a progressão da doença da retina. Aqui, descrevemos uma técnica empregada por nosso laboratório e outros que usa cSLO para quantificar o nível de lipofuscina RPE em olhos saudáveis e doentes.

Introdução

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O epitélio do pigmento da retina (EPR) suporta a função da retina sensorial através de numerosos processos 1. degeneração macular relacionada com a idade (AMD) é a causa mais importante de cegueira intratável em países industrializados e é caracterizada por alterações na EPR, incluindo perda de pigmento, perda de função e atrofia. Em AMD e no envelhecimento normal, o RPE acumula organelas fluorescentes, derivadas do lisossoma contendo fragmentos fotorreceptoras fagocitado, referidos como grânulos de lipofuscina. A acumulação de lipofuscina EPR foi pensado para indicar disfunção oxidativo 1, mas estudos recentes têm demonstrado que a morfologia d....

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Protocolo

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Declaração de Ética: Todos os pacientes incluídos nestes estudos foram feitos lo de acordo com aprovado revisão institucional de supervisão bordo no New York University School of Medicine.

1. Seleção de Pacientes e preparação inicial para criação de imagens

Nota: Os seguintes materiais são necessários: 0,5% solução oftálmica tropicamida, 2,5% solução oftálmica fenilefrina, cSLO equipado com espectral de tomografia de coerência óptica (SD-OCT), e referência interna de fluorescência.

  1. Antes de imagiologia, adequadamente configurado cSLO para aquisição de dados de acordo com as instruções do fabricante.....

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Resultados

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Esta técnica foi utilizada para estudar QAF em ambos os saudáveis ​​13 e doença estados 10-12. Em olhos saudáveis ​​(Figura 1), AF emitida a partir da EPR é distribuído relativamente uniforme por todo o fundo (Figura 1A). intensidade reduzida é visto na região macular central devido ao bloqueio da luz pelo pigmento macular, e para os lados e cantos da imagem devido a óptica do olho e câmera. Vasos aparecem escuras e deve estar em fo.......

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Discussão

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distribuição de lipofuscina EPR anormal, quer aumentada ou diminuída, é um marcador sensível da doença da retina e é geralmente associada com a perda da função retina sensorial. Aqui, nós descrevemos a aplicação de Qaf para a avaliação de lipofuscina EPR. Incorporação de uma referência fluorescente interna para corrigir a variável de potência do laser e um detector de sensibilidade 9 juntamente com a nossa técnica de imagem padronizada permite a quantificação confiável dos níveis de AF. É nosso objetivo que e.......

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Divulgações

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STA: sem divulgações, JPG: sem divulgações, RTS: consultor, Ocata Therapeutics.

Agradecimentos

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Gostaríamos de agradecer aos nossos colaboradores, Francois Delori, Tomas Burke, e Tobias Duncker.

Apoio à Pesquisa: NIH / NEI R01 EY015520 (RTS, JPG), e os fundos irrestritas de Investigação para Prevenir Cegueira (RTB).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Spectralis HRA + OCTHeidelberg Engineering
0,5% soluçãoQualquer marca pode ser usada
soluçãoQualquer marca pode ser usada
Referência fluorescente internaHeidelberg Engineering
IGOR Pro softwareWaveMetrics
oftálmica tropicamida oftálmica de fenilefrina 2,5%

Referências

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  1. Strauss, O. The retinal pigment epithelium in visual function. Physiological reviews. 85, 845-881 (2005).
  2. Ach, T., et al. Quantitative autofluorescence and cell density maps of the human retinal pigment epithelium. In....

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Fundus AutofluorescenceRetinal Pigment EpitheliumConfocal Scanning Laser OphthalmoscopyLipofuscin QuantificationAge Related Macular DegenerationGeographic Atrophy AnalysisHigh Speed Image AcquisitionMean of 9 FramesInternal Fluorescent ReferencePupil Dilation Protocol

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