In Vivo quantitativa Avaliação da Estrutura do miocárdio, função, perfusão e viabilidade Usando Cardiac Micro-Tomografia Computadorizada

Resumo

Este método descreve o uso da Microtomografia Computadorizada Quântica (MicroCT) para avaliar a morfologia, função, perfusão, metabolismo e viabilidade cardíaca com contraste iodado em camundongos com isquemia miocárdica induzida experimentalmente. A técnica pode ser aplicada para imagens longitudinais in vivo não destrutivas de alto rendimento de vários modelos animais de doenças cardíacas humanas.

Resumo

O uso da Microtomografia Computadorizada (MicroCT) para estudos in vivo de pequenos animais como modelos de doenças humanas aumentou tremendamente devido ao fato de que a MicroCT fornece dados anatômicos tridimensionais (3D) quantitativos de alta resolução de forma não destrutiva e longitudinal. Mais importante ainda, com o desenvolvimento de um novo agente de contraste iodado pré-clínico chamado eXIA160, a avaliação funcional e metabólica do coração tornou-se possível. No entanto, antes do advento dos scanners MicroCT comerciais equipados com tecnologia de detector de tela plana de raios-X e gating cardiorrespiratório fácil de usar, os estudos pré-clínicos de doenças cardiovasculares (DCV) em pequenos animais exigiam um tecnólogo MicroCT com habilidades avançadas e, portanto, eram impraticáveis para implementação generalizada. O objetivo deste trabalho é fornecer um guia prático para o uso do sistema Quantum FX MicroCT de alta velocidade para determinação abrangente da função global e regional do miocárdio, juntamente com a avaliação da perfusão, metabolismo e viabilidade miocárdica em camundongos saudáveis e em um modelo de camundongo com isquemia cardíaca induzida por oclusão permanente da artéria coronária descendente anterior (LAD).

Introdução

Doença isquêmica do coração (DIC) continua a ser a maior causa de morbidade e mortalidade entre homens e mulheres em todo o mundo ^1. Por causa da complexidade e inter-relações que existem entre os órgãos e sistemas no nível do organismo, o uso de todo o animal como um modelo de DIC permanece relevante não só para a nossa melhor compreensão da fisiopatologia da doença, mas também permitindo a avaliação de novas estratégias preventivas e terapêuticas . Modelos do rato, em particular, têm contribuído para o nosso conhecimento do desenvolvimento cardíaco, patogênese do infarto do miocárdio, hipertrofia do miocárdio, miocardite e lesões aneurismáticas ^2-7. Os parâmetros que determinam o desempenho cardíaco e são úteis em termos de prognóstico e escolha da intervenção terapêutica são massa cardíaca e da geometria, função global e regional, distribuição espacial do fluxo de sangue do miocárdio e viabilidade miocárdica.

No entanto, a maioria dos traditional métodos experimentais utilizados em modelos de rato de doença cardíaca envolvem medições invasivas que requerem horas para conclusão, portanto, o animal não podem ser utilizados para medições repetidas, ou o método vai exigir sacrificar animais ^8-12. Por exemplo, para medir a perfusão miocárdica regional, microesferas ou radioactivamente marcados com fluorescência são usados ​​onde a contagem radioactiva ou sinais fluorescentes são detectados sobre um coração fisicamente dissecado ou in situ ^13,14.

Do mesmo modo, a avaliação do tamanho do enfarte em modelos animais de enfarte do miocárdio é mais vulgarmente efectuada por cloreto de trifeniltetrazólio (TTC) de coloração, e a fim de determinar o curso de tempo da evolução de enfarte e o efeito de intervenções terapêuticas, esta técnica requer que os animais precisam ser sacrificada para o coração exame histopatológico em vários pontos de tempo ^15. Como técnicas tais, não destrutivos e humanas que permitam quantitative e análise longitudinal da morfologia cardíaca, função, metabolismo e viabilidade são de suma importância. Neste contexto, a imagem latente pré-clínico é de grande relevância. Entre as modalidades de imagem actualmente disponíveis ressonância magnética (MRI) e ecocardiograma são os mais comumente utilizados ^16,17,18.

No entanto, e apesar do fato de que a RM é considerada a modalidade de referência tanto no trabalho clínico e pré-clínico, o alto custo para adquirir e manter sistemas dedicados de ressonância magnética pequenos animais, bem como a complexidade desta tecnologia para usuários não-avançados para operar , faça MRI proibitivamente caro para uso rotineiro. No que diz respeito a ecocardiografia, existem desvantagens significativas para a forma da função cardíaca é medida. Os dados produzidos pela maioria dos exames são ecocardiográfica bidimensional, e, a fim de derivar os volumes, as suposições geométricas precisam ser feitas ^19. Além disso, a má repr intra e inter-observadoroducibility é outra limitação significativa desta técnica. Imaging radioisótopo com emissão de fóton tomografia único (SPECT) e tomografia por emissão de positrões (PET) são predominantemente utilizados para a avaliação da perfusão miocárdica e metabolismo ^17,20,21. No entanto, restrito resolução espacial destas modalidades de imagem faz imagens cardíacas em ratos desafiantes.

Por outro lado, com o advento da tecnologia de detector de painel plano que permite um melhor sensibilidade de raios-X e os tempos de leitura mais rápidos, o estado actual da técnica, sistemas de microCT podem agora fornecer cardio-respiratória fechado tridimensional (3D) e quatro dimensões ( 4D) imagens de qualidade MRI-grade. Eles são o custo de manutenção praticamente livre e fácil de operar por usuários não-avançados. Assim, tais instrumentos microCT pode ser bem adequado para exame de rotina dos animais pequenos como modelos de doenças humanas. Mais importante ainda, com o desenvolvimento de um novo agente de contraste iodado pré-clínico, savaliação funcional e metabólica imultaneous do coração tornou-se possível ^22-24.

Este agente de contraste contém uma concentração elevada de iodo (160 mg / ml), produzindo forte contraste de lago sanguíneo após a sua administração intravenosa permitindo in vivo de imagens da vasculatura e das câmaras do coração. Dentro de uma hora após a administração, um aumento contínuo em contraste miocárdio associado com a sua absorção metabólica pode ser observada, assim, o mesmo agente de contraste pode ser utilizado para a avaliação do atordoamento do miocárdio e viabilidade.

O objetivo da técnica descrita neste artigo é o de permitir aos investigadores utilizar o sistema MicroCT de alta velocidade com intrínseca gating cardio-respiratória, em conjunto com sangue-pool agente de contraste iodado, para determinação da função global e regional do miocárdio, juntamente com perfusão miocárdica e viabilidade em ratos saudáveis ​​e em um modelo de rato de isquemia cardíaca induzida por oclusão permanenteda artéria descendente anterior coronariana (LAD). Ao utilizar esta técnica modelo animal e de imagem, uma rápida avaliação dos parâmetros cardíacos mais importantes pode ser realizada repetidamente com uma única modalidade de imagem e sem a necessidade de procedimentos invasivos ou da necessidade de sacrificar os animais. A técnica pode ser realizada para avaliar novas estratégias preventivas e terapêuticas.

Protocolo

Todo o trabalho de animais neste estudo foi aprovado pelo comitê de ética de pesquisa animal Erasmus MC. Ao longo dos experimentos, os animais foram mantidos em conformidade com os regulamentos institucionais Erasmus MC. No final da experiência os animais foram sacrificados utilizando uma dose excessiva de anestesia isoflurano inalante. Por favor, procure cuidados com os animais institucional e utilizar aprovação da comissão antes de iniciar este trabalho.

1. Preparação de isquemia cardíaca Modelo

1. Anestesiar o rato (C57BL6, 12 semanas de idade) por inalação de 4% de isoflurano. Entubar o animal usando um G cânula 20 e respirate o mouse em 100 respirações por minuto, com um pico de pressão inspiratória de 18 cm H _{2 O} e uma pressão expiratória final positiva de 4 cm H _{2 O.}
   1. Utilize uma mistura gasosa de O ₂ / N ₂ (v / v = 1/2) contendo 2,5% de isoflurano para manter a anestesia e aplicar colírio para prevenir a dessecação dos olhos, enquanto sob anestesia. Place o mouse sobre uma almofada de aquecimento e medir a temperatura corporal por via retal para manter a temperatura do corpo a 37 ° C durante a cirurgia.
2. Injectar buprenorfina (0,05-0,2 mg / kg) por via subcutânea imediatamente antes da cirurgia e verificar o aperto reflexo toe para assegurar profundidade suficiente de anestesia antes do início do procedimento cirúrgico. Depilar o peito do rato usando creme de depilação e aplicar iodo para a pele.
3. Realizar uma incisão, fazendo um pequeno corte com uma tesoura na pele entre o 2º e 3º costelas esquerdas. Puxar o peitoral menor e o músculo xiphihumeralis, bem como o músculo grande dorsal para o lado usando pequenos ganchos para permitir o acesso para os músculos intercostais.
4. Cuidadosamente cortar o terceiro músculo intercostal, sem prejudicar os pulmões utilizando um 2 milímetros tesoura primavera lâmina curva. Empurrar o pulmão de lado usando um pequeno pedaço de gaze molhada e ruptura do pericárdio.
   NOTA: Tenha cuidado para não danificar o nervo frênico esquerdo.
   1. Repositisobre os pequenos ganchos que prendem o músculo para o interior do tórax e reposicionar-los de modo a que uma grande parte do ventrículo esquerdo (VE) e a parede livre parte do átrio esquerdo são visíveis.
5. Insira uma sutura cirúrgica de seda 7-0 debaixo da artéria coronária esquerda e oclusão da artéria por atar firmemente a sutura.
   Observação: Uma vez que na maioria dos ratinhos da artéria coronária não é visível, determinar a posição da ligadura usando o átrio e sempre ligar a artéria coronária 2 mm abaixo da borda do átrio esquerdo, a fim de normalizar o tamanho do enfarte.
6. Verificar visualmente para indução bem-sucedida do enfarte ao confirmar o empalidecendo da parede livre do ventrículo esquerdo. Quando empalidecendo não for observado, executar uma tentativa adicional para ocluir o LAD.
7. Feche o peito com firmeza usando uma sutura cirúrgica de seda 6-0.
   NOTA: O peito deve ser fechada hermeticamente fechado para permitir a respiração independente após a recuperação.
8. Limpar a ferida com uma solução salina e fechar a pele usandosuturas de seda. Aplique spray ferida na pele para estimular a cicatrização de feridas e prevenir a infecção.
9. Vire o isoflurano e aguarde até que o animal começar a respirar por si mesmo antes de retirar o tubo de ventilação. Coloque o rato em uma gaiola em uma almofada de aquecimento enquanto se recuperava.
   NOTA: Não deixe um animal sem supervisão até que tenha recuperado a consciência suficiente para manter decúbito ventral. Não devolva um animal que foi submetido a uma cirurgia para a companhia de outros animais até que esteja totalmente recuperado.
10. Administrar doses adicionais de buprenorfina cada 8-12 horas após a cirurgia para analgesia pós-operatória. Administrar Buprenorfina (50 ug / kg) por via intraperitoneal.
    NOTA: Verificar os animais por MicroCT (Seção 3) 3-4 horas após a cirurgia para a primeira verificação e 6-7 horas após a cirurgia para o segundo exame.

2. injeção de contraste MicroCT

1. A fim de adquirir informações anatômicas, funcionais e metabólica em dois successivsessões e de imagem MicroCT, use agente de contraste iodado.
2. Expor e tratar a borracha da tampa do frasco utilizando álcool a 70%. Utilizando uma seringa de pouco espaço morto, retirar um volume requerido (5-10 ul / g de peso corporal) do agente de contraste. Para evitar o risco de embolia durante a injecção, purga as bolhas de ar, se for caso disso, através do avanço do êmbolo para trás e para a frente e / ou suavemente batendo no lado da seringa e, lentamente, expulsando o ar para dentro do tecido absorvente estéril até que o fluido aparece na ponta do agulha.
   Nota: A injecção do contraste MicroCT pode ser realizada em animais conscientes ou com sedativos. contenção física devem ser realizados em animais conscientes. Para minimizar o estresse, considere leve sedação ou anestesia isoflurano geral com um sistema de anestesia inalatória.
3. Antes da injecção, pincelar a cauda com álcool a 70%. Aquece-se a cauda com uma lâmpada ou por imersão da cauda em água quente (40-45 ° C) para proporcionar uma melhor dilatação do vaso. Injetar o agente de contraste intravenously (por exemplo, através de uma das veias laterais da cauda) em 5-10 ul / g de peso corporal.
   Nota: Optimizar a dose injectada para um modelo animal em particular ou configurações de aquisição de MicroCT instrumento, como o aumento de contraste pode ser influenciada pelo estado de saúde ou dieta do animal em estudo e o nível de ruído de imagem.

Imagem 3. MicroCT

1. Antes da injeção de contraste, ligue digitalizador MicroCT premindo o botão de energia do computador. Inicie o software de controle MicroCT, e aquecer o tubo de raios-X, clicando no botão Warm-up mostrado na janela de controle de software.
2. Permitir para o botão de Modo Ao Vivo para aparecer no software de controle, indicando que o warm-up está completo. Insira a tampa furo pequeno e colocar a pequena cama animal.
3. Criar ou selecionar o apropriado banco de dados, estudo e disciplina em que os dados de imagem será salva. Para criar um novo banco de dados, clique no botão Novo banco de dados na janela de banco de dados,digite um nome que deve especificar a nova base de dados, clique no botão Procurar na caixa de diálogo que aparece, navegue até a unidade onde o banco de dados será salvo e clique em OK. Observe o novo banco de dados na janela de banco de dados. Para se conectar a um banco de dados existente, clique no botão Conectar à base de dados na janela banco de dados, e clique duas vezes o nome do banco de dados.
4. Defina as condições de digitalização selecionando os seguintes parâmetros a partir dos menus drop-down da janela de controle de software: tensão do tubo de raios-X, 90 kV; CT X-ray corrente do tubo, 160 mA; raios-X ao vivo corrente do tubo, 80 mA; FOV, 20 mm; técnica de gating, cardio-respiratória; técnica de varredura, 4,5 min.
   NOTA: Este protocolo de imagem permite a reconstrução de conjuntos de dados 3D diastólico e sistólico final, cada uma com um tamanho de matriz de 512 x 512 x 512, com um tamanho voxel isotrópico reconstruído de 40 mm.
5. Depois de injectar o animal com o agente de contraste, anestesiar-lo numa câmara de indução por inalação de 4% de isoflurano.Colocar o animal na cama de animais do scanner com um cone do nariz fornecimento de 1,5-2,0% de isoflurano em uma mistura de oxigénio no ar. Se necessário, ajuste o fluxo de isoflurano para alcançar atividade respiratória estável do animal com ≤ 60 respirações por minuto.
6. Feche a porta de instrumentos deslizando-a para o direito de exercer a trava de segurança. Ligue Modo Ao Vivo clicando no botão Modo Ao Vivo mostrado na janela do software de controle para ver o assunto em tempo real. Observe a janela X-captura e do animal.
   Nota: O instrumento não gera raios-X, a menos que a porta está bem fechado e o bloqueio de segurança está envolvida.
7. Mover a cama dos animais para alinhar o peito rato dentro do campo de visão (FOV) premindo o controlo do eixo Z fase e para trás botões localizados no painel frontal do aparelho. Verifique se o peito está no centro dentro do FOV. Use o LEFT animal controlo de cama e setas para a direita localizada no painel frontal do instrumento para posicionar tEle animal dentro da caixa delimitadora azul.
   1. Gire o pórtico, selecionando "90" da lista suspensa Controle da rotação mostrado na janela do software de controle e clicando no botão Set. Certifique-se de que o animal permanece dentro da caixa delimitadora azul da janela do X-captura. Se necessário, alinhar o animal usando o controle animal cama UP e as setas para baixo localizada no painel frontal do instrumento.
      Nota: Apenas os dados de imagem dentro da caixa delimitadora azul mostrado na janela do X-captura será usado para reconstruir o volume 3D.
8. Na janela Xcapture, redimensionar a região cardio-respiratória de interesse (ROI) com o botão esquerdo do mouse, arrastando o ROI bordas com o cursor do mouse, de modo que os traços cardio-respiratórias são claramente visíveis na vista de sincronização. Certifique-se de que a ROI cobre o diafragma e a parte apical do coração em todas as posições de pórtico. Rodar o pórtico 90 °, tal como descrito no passo 3.6 a certeza de que o carditraços o-respiratória são ainda claramente visíveis.
   NOTA: De modo a evitar a exposição desnecessária a radiações ionizantes, minimizar o tempo durante o qual a posição dos animais e ROI cardio-respiratórias são ajustados.
9. Clique no botão tomografia computadorizada mostrado na janela do software de controle para inicializar a aquisição. Tomografia computadorizada Mensagem de confirmação aparecerá. Clique no botão SIM mostrado na confirmação de mensagem tomografia computadorizada para confirmar. Clique no botão NO para cancelar a digitalização. Uma vez que o botão é pressionado YES, a indicação de energização de raios-X vermelho localizado no instrumento será acesa
   NOTA: A indicação será também visível pelo ícone de tensão piscar de caixa de status do instrumento da janela do software de controle. A verificação será concluído em 4,5 min. O tubo de raios-X será desligado automaticamente e o raio-X indicação de energização vermelho localizado no instrumento e no painel de controle da janela do software de controle escurecerá. As projeções serão classificados automaticamente eo progress será indicado pelas barras de progresso verdes mostrados na janela GetSynchronizedRaw. Os conjuntos de volumes que representam fases finais diastólico e sistólico final do ciclo cardíaco será reconstruída automaticamente dentro de 2-3 min adicional.
   NOTA: Para interromper a pesquisa, clique no botão de parada de emergência no painel de controle da janela do software de controle ou pressione o botão de mecânica de paragem de emergência localizado no painel frontal do instrumento.
10. Observe os pontos de vista transaxiais, coronal e sagital das reconstruções em software 2D Viewer. Demorar alguns segundos para avaliar a qualidade das imagens adquiridas. Procure os sinais de trânsito animal que podem ser causadas por um nível insuficiente de anestesia. Se necessário, fazer as modificações apropriadas e repetir o exame.
    NOTA: Se as estruturas na imagem são o dobro, mostrado com bordas duplas, ou mostrado com estrias, então esses são os habituais "bandeiras vermelhas" que podem indicar que o nível de anestesia pode ser inadequada e queo animal foi transferido durante a varredura. Em tais casos, o nível de anestesia deve ser ajustada e a análise deverá ser readquirido.
11. Remover o animal a partir do scanner e permitir a plena recuperação da anestesia sob supervisão.
12. Adquirir uma varredura MicroCT adicional durante a fase metabólica da captação de contraste (3 a 6 horas após a injecção de contraste).
    NOTA: Mais detalhes sobre os valores do realce do miocárdio médios para C57BL / 6 e BALB / c foram publicadas por Detombe et al e Ashton et al ^22,23..

4. Análise de Dados MicroCT

1. Coloque os dois arquivos de VOX diastólico e sistólico final em Analisar 12 software.
2. Abra cada imagem carregada com o módulo Oblique Secções e realizar a reforma imagem curto-axial.
3. A fim de minimizar o tempo de processamento de imagem considerar cortar as imagens utilizando a função de volume sub-região / pad do módulo Image Calculator. Para ambos os volumes, manter idêntica SubRegion Baixo e Alto X, Y, Z dimensões.
4. Anexar os dois volumes e abra com o módulo Volume Editar. Para uma melhor visualização das estruturas, ajustar a intensidade da imagem, se necessário.
5. Execute segmentação do contorno endocárdico. Na guia semi-automático do módulo Editar Volume Extractor selecione Objeto, definir um ponto de sementes para o ventrículo esquerdo (VE) e ajustar os valores de limite, de modo que a cavidade ventricular esquerda é delineada a partir do miocárdio. Para determinar o valor limite, usam algoritmos de limiar automáticas ou o valor de metade max largura total (FWHM) determinada com o módulo de linha de perfil.
   1. Desenhe um limite ao longo do plano folheto da válvula mitral para evitar que a região se espalhando para a aorta, clique no botão Extrair objeto para completar a segmentação. Ambos os volumes finais diastólico e sistólico final será processada automaticamente. Nome da região (por exemplo, LV Cavity) e salvar o mapa objeto para o diretório do arquivo correspondente.
6. Perfosegmentação do contorno do epicárdio rm. Adicionar um novo objeto e realizar a segmentação da superfície do coração do epicárdio usando ferramentas quer semi-automática ou manual de segmentação do módulo Volume Editar. Certifique-se de que ambos os contornos diastólico e sistólico final estão correctamente identificados. Se necessário, execute o ajuste manual. Nomeie as regiões (por exemplo, LV Miocárdio) e salvar o mapa objeto para o diretório do arquivo correspondente.
   Nota: Imagem filtragem com o módulo de filtros espaciais pode ser realizada, adicionalmente, para melhorar a velocidade ea qualidade das segmentações.
7. Para extrair medições volumétricas dos mapas de objetos (salvo) abrir o volume adicionados com a Região de Interesse módulo. Certifique-se o mapa corrigido é carregado, abra a janela Option da amostra, certifique-se de objetos tanto LV da cavidade e LV Miocárdio são selecionados, e clique no botão Imagens de Amostra. Salve o arquivo de log.
8. Para a análise regional da função cardíaca e metabolismo, utilize o Radial Diferramenta vider da Região do módulo de interesse para subdividir ainda mais os volumes segmentados.

5. Cálculo da Global e parâmetros regionais do coração

1. Para calcular o volume de ejeção do ventrículo esquerdo (VSVE), subtrair o volume ventricular esquerdo sistólico final (VSF) do volume diastólico final do ventrículo esquerdo (VDFVE):
   VSVE = VDFVE - LVESV;
2. Para calcular a fração de ejeção ventricular esquerda (FEVE), dividir o volume de ejeção do ventrículo esquerdo (VSVE) pelo volume diastólico final do ventrículo esquerdo (VDFVE) e multiplicar por 100%:
   FEVE = VSVE / VDFVE * 100%;
3. Para calcular o débito cardíaco (CO), multiplicar o volume de ejeção do ventrículo esquerdo (VSVE) pela frequência cardíaca (FC):
   CO = VSVE * HR;
4. Para calcular a massa miocárdica ventricular esquerda (LVMM), subtrair o volume parede miocárdica ventricular esquerda vinculado à superfície endocárdica (LVMV _ENDO) do Ventr esquerdaicular volume de parede miocárdica vinculado à superfície epicárdica (LVMV _EPI), e multiplicar pela gravidade específica do miocárdio, 1,05 g / cm ^3:
   LVMM = (LVMV _{EPI -} LVMV _ENDO) * 1,05;
5. Para calcular o índice de massa do miocárdio ventricular esquerda (LVMMI), divida a massa miocárdica ventricular esquerda (LVMM) pelo peso corporal do rato (BW):
   LVMMI = LVMM / BW;
6. Para calcular a porcentagem do tamanho do miocárdio ventricular esquerdo infarto (% LVMIS), dividir o volume ventricular esquerdo do miocárdio infartado (LVMV _MI) pelo volume do miocárdio ventricular esquerdo total (LVMV _TOTAL), e multiplicar por 100%:
   % LVMIS = LVMV _{MI /} LVMV _TOTAL * 100%;
   Nota: Para LVMM, LVMMI, e% cálculos LVMIS, use medições de volume endo e epicárdio a partir dos correspondentes conjuntos de dados de fim de diastólica ou fim-sistólica. Denunciar sistólico final médio e de fim-diíndices astolic.
7. Para calcular as anormalidades parede segmentar do ventrículo esquerdo de movimento (LVWM), subtrair a segmentar deixou diâmetro de parede sistólico final ventricular (LVESWD) do segmentar ventricular esquerda diâmetro de parede diastólica final (LVEDWD):
   LVWM = LVEDWD - LVESWD;
   Exibir os resultados como mapas polares circunferenciais (Bulls olho gráficos polares).
8. Para calcular o espessamento da parede ventricular esquerda segmentar (% LVWTh), subtrair a segmentar deixou espessura da parede diastólica final ventricular (LVEDWTh) do segmentar deixou espessura da parede sistólico final ventricular (LVESWTh), divida pelo segmentar deixou parede diastólica final do ventrículo espessura (LVEDWTh), e multiplicar por 100%:
   LVWTh% = (LVESWTh - LVEDWTh) / LVEDWTh * 100%;
   Exibir os resultados como mapas polares circunferenciais (Bulls olho gráficos polares).
9. Para o cálculo da fração de ejeção regionais (% REF), subtrair a praça de segmentar do ventrículo esquerdo no final da sístolediâmetro de parede (LVESWD) da praça de segmentar ventricular esquerda diâmetro de parede diastólica final (LVEDWD), dividir pelo quadrado da segmentar ventricular esquerda diâmetro de parede diastólica final (LVEDWD), e multiplicar por 100%:
   % ref = (LVEDWD ² - LVESWD ²⁾ / ² * LVEDWD 100%;
   Exibir os resultados como mapas polares circunferenciais (Bulls olho gráficos polares).
10. Para apresentar a absorção de perfusão e contraste miocárdico regional, converter os valores de intensidade média em números CT (unidades Hounsfield, HU). Converter ambos os conjuntos de dados finais diastólico e sistólico final por rescaling ar seleccionados da região seleccionada para fora do animal - 1000 HU, e água a 0 HU usando um pequeno tubo de rádio-transparente cheio de água. Exibir os resultados como mapas polares circunferenciais (Bulls olho gráficos polares).

6. Análise Estatística

1. Representar todos os dados de exibição trama polares como média e desvio ± padrão (SD). Avaliar o statusdiferença istical usando one-way análise de variância (ANOVA) ou outra técnica adequada.

Resultados

MicroCT Aquisição, Imagem a Reconstrução e Imagem Avaliação da Qualidade.

Quatro camundongos C57BL / 6, três com oclusão e LAD permanente um, com sucesso recuperado da cirurgia e completaram o protocolo de imagem que consistia de uma administração intravenosa em bolus único agente de contraste e duas aquisições microCT cardio-respiratória 4,5-mínimo de operação simulada. A freqüência cardíaca média durante os estudos microCT era de 385 ± 18 batimentos por minuto. Diastólica final e reconstrução da imagem sistólico final usado gating baseada em imagem intrínseca proprietário, no qual dedica dispositivos respiratórios e monitorização cardíaca, como derivações de ECG e sensor de pneumática respiratória não eram necessários. Após a reconstrução, a qualidade de imagem de ambos os conjuntos de dados finais diastólico e sistólico final foi inspecionado usando software de visualização 2D. A qualidade de imagem foi considerado satisfatório e não houve necessidadepara realizar aquisições de imagens adicionais. Assim, todos os dados relatados foram obtidos a partir de duas leituras por rato; a primeira verificação efectuadas 10 minutos após a injecção durante a fase de acumulação de sangue do contraste, e a segunda verificação adquirida pós-injecção durante 3-4 horas a fase de fixação metabólica do contraste. Representante de sangue piscina curta-axiais secções transversais finais diastólico e sistólico final de um coração mouse com infarto do miocárdio (Figura 1) e de um coração mouse sem infarto do miocárdio (Figura 2) demonstrou excelente delineação cavidade ventricular esquerda com pouco ruído de fundo , permitindo a avaliação anatômica e funcional preciso. Áreas de rarefacção contraste correspondentes a enfarte do miocárdio foram bem demarcadas em imagens curto-axiais do coração de rato submetido a LAD ligação da artéria coronária (Figura 1), mas não no animal simulada operar (Figura 2).

avaliação quantitativa do Ventrículo Esquerdo Função.

segmentações 3D baseado em limiares foram realizados em ambos os volumes diastólico e sistólico finais para determinar o volume ventricular esquerda diastólica final (VDF) e do volume sistólico final do ventrículo esquerdo (VSF) em cada animal. O volume sistólico do ventrículo esquerdo (VSVE), fracção de ejecção ventricular esquerda (FEVE), e o débito cardíaco (CO) foram calculados a partir de VDF e VsfVE de acordo com as fórmulas descritas na Secção 5. Os resultados das medições de volume e funcionais globais estão resumidos na Tabela 1 . Três horas após a ligação, o normalizada para o peso corporal do animal significa VDFVE não foi diferente entre o grupo de enfarte do miocárdio e o animal operação simulada (2,8 ± 0,23 vs 2,3). No entanto, o peso corporal médio normalizado VsfVE foi maior no grupo de enfarte do miocárdio (2,1 ± 0,31 vs. 0,92). CorrespondenteLY, a FEVE média e o débito cardíaco (CO) em ratos com oclusão da artéria coronária LAD foram mais baixos quando comparado com o rato operação simulada (23,1% ± 7,1% vs 60,5%, e 0,26 ml ± 0,08 ml vs. 0,55 ml, respectivamente, ).

Avaliação quantitativa do LV do miocárdio missa e Enfarte Tamanho.

Ambos massa ventricular esquerda do miocárdio (LVMM) e índice de massa miocárdica ventricular esquerda (LVMMI) foram determinados com base em epicárdio e endocárdio segmentações incluindo músculos papilares e trabéculas. Ambas as reconstruções diastólico e sistólico final foram processados ​​e os valores para ambos os grupos infarto do miocárdio e o animal operação simulada estão resumidos na Tabela 1. Volumes de infarto do miocárdio foram determinados com base na rarefação contraste usando baseado em limiares volumetria 3D. Como mostrado na Tabela 1, três horas após a LAD Coronary ligação da artéria as áreas de risco (AAR) em rato 1, 2 e 3 foram 22,4%, 13,3% e 15,8% do LVMM respectivamente.

Perfusão Miocárdica Imagem (MPI).

Representante circunferenciais enredo exibe polares finais sistólico (parcelas polares Bulls Eye) de perfusão miocárdica em um rato com infarto do miocárdio (Rato 1) e um mouse sem infarto do miocárdio (Rato 4) diastólica final e são mostrados nas Figuras 3 e 4. As imagens usadas para produzir as parcelas foram adquiridas 10 minutos após a administração de contraste e 3 horas após a ligadura LAD. Os valores homosegmental diastólico e sistólico final obtidos a partir do mesmo animal não eram diferentes. No entanto, hypoenhancement foi observado em meados de anterior, mid-inferolateral, mid-ântero-lateral, anterior apical, e segmentos laterais apicais de um rato com miocárdio eminfarto, demonstrando deficiências no fluxo sanguíneo coronariano causados ​​pela oclusão da artéria LAD (Figura 3). Sem essa degradação pôde ser observada no coração do animal operação simulada (Figura 4).

Miocárdio Viabilidade e Metabolismo.

Representante circunferenciais enredo exibe polares finais sistólico (parcelas polares Bulls Eye) de captação miocárdica metabólica em um rato com infarto do miocárdio (Rato 1) e um mouse sem infarto do miocárdio (Rato 4) diastólica final e são mostrados nas Figuras 7 e 8. As imagens usadas para produzir os lotes foram adquiridos 3-4 horas após a administração de contraste e 5-6 horas após a ligadura LAD. captação de contraste do miocárdio dissimilares poderiam também ser observado visualmente em seções transversais curtas-axial de um coração de rato que sofreu oclusão da artéria coronária LAD ( (Figura 6). Os valores homo-segmentares diastólico e sistólico final obtidos a partir do mesmo animal não eram diferentes. As parcelas circunferenciais polares mostraram anormalidades específicas do segmento (Figura 7) com um padrão semelhante ao mostrado nos mapas de perfusão do miocárdio (Figura 2). Sem defeitos captação de contraste foram vistos nas parcelas polares circunferenciais do mouse operação simulada (Figura 8).

Avaliação quantitativa da LV Função Regional.

A qualidade da imagem foi satisfatório para realizar a avaliação visual do movimento do ventrículo esquerdo e espessamento de reconstruções diastólico e sistólico final em todos os ratinhos fotografada. As pontuações de movimento da parede do VE, espessantes e fração de ejeção regional, para cada segmento de um rato com e sem a minha enfarte ocardial são apresentados na Figura 9 e na Figura 10. Como era esperado, a ligação da artéria coronária LAD, resultou numa diminuição acentuada de LV índices funcionais regionais (Figura 9), enquanto não se observou nenhum efeito no rato operação simulada (Figura 10).

Figura 1. Representante sangue-piscina curta-axial diastólica final (A) e sistólico final (B) secções transversais de um coração mouse com infarto do miocárdio (Rato 1). As imagens foram adquiridas 3 horas após a oclusão da artéria coronária LAD e 10 min após a administração de contraste. O contraste negativo observado por setas amarelas é devido à falta de opacificação contraste na região infartada.

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Figura 2. Representante de sangue piscina curta-axial diastólica final (A) e sistólico final (B) secções transversais de um coração de rato sem infarto do miocárdio (Rato 4). As imagens foram adquiridas 3 horas após sham-operação e 10 min após a administração de contraste. Contraste opacificação é uniformemente presente em todas as fatias do miocárdio.

Figura 3. Representante circunferenciais enredo exibe polares finais sistólico (parcelas Bulls Eye polares) de perfusão miocárdica em um rato com infarto do miocárdio (mouse 1) diastólica final e. (A) O ventrículo esquerdo é subdividido em basal, mid-cavidade, e porções curtas-axial apicais de acordo com o de 17 segmentos modelo AHA ^25. perfusão Dissimilar é claramente visível em meados de anterior, mid-inferolateral, médioântero-lateral, anterior apical, e segmentos laterais apicais. Os valores apresentados representam a segmentar significa em unidades Hounsfield ± desvio padrão. (B) Os mapas de perfusão miocárdica são mostrados sem subdivisão em 17 segmentos. O centro da trama correspondente ao ápice cardíaco (segmento 17) não é mostrado.

Figura 4. Representante circunferenciais enredo exibe polares finais sistólico (parcelas Bulls Eye polares) de perfusão miocárdica em um mouse sem infarto do miocárdio (Rato 4) diastólica final e. (A) O ventrículo esquerdo é subdividido em basal, mid-cavidade, e porções curtas-axial apicais de acordo com o de 17 segmentos modelo AHA ^25. perfusão semelhante está presente em todos os segmentos. Os valores apresentados representam a segmentar significa em unidades Hounsfield ± desvio padrão. (B) mapas de perfusão miocárdica são mostrados sem subdivisão em 17 segmentos. O centro da trama correspondente ao ápice cardíaco (segmento 17) não é mostrado.

Figura 5. absorção metabólica Representante curto-axial diastólica final (A) e sistólico final (B) secções transversais de um coração mouse com infarto do miocárdio (Rato 1). As imagens foram adquiridas 6-7 horas após a oclusão da artéria coronária LAD e 3-4 horas após a administração de contraste. O contraste negativo observado por setas brancas é devido à falta de captação de contraste metabólica na região infartada.

Figura 6. absorção metabólica Representante curto-axial diastólica final ( (B) secções transversais de um coração de rato sem infarto do miocárdio (Rato 4). As imagens foram adquiridas 6-7 horas após sham-operação e 3-4 horas após a administração de contraste. absorção metabólica do miocárdio de contraste é uniformemente presente em todas as fatias.

Figura 7. representativos diastólica final e sistólico final circunferenciais enredo exibe polares (parcelas polares Bulls Eye) de absorção metabólica do miocárdio em um rato com infarto do miocárdio. (A) O ventrículo esquerdo é subdividida em basal, mid-cavidade, e apical curto porções -axial de acordo com o de 17 segmentos modelo AHA ^25. absorção metabólica Dissimilar é claramente visível em meados de ântero-lateral, anterior apical, apical inferior, e segmentos laterais apicais. Os valores apresentados representam os meios segmentares em Hounsfield units ± desvio padrão. (B) Os mapas de captação metabólicas miocárdicas são mostrados sem subdivisão em 17 segmentos. O centro da trama correspondente ao ápice cardíaco (segmento 17) não é mostrado.

Figura 8. Mandatário diastólica final e sistólico final circunferenciais enredo exibe polares (parcelas polares Bulls Eye) de absorção metabólica do miocárdio em um mouse sem infarto do miocárdio. (A) O ventrículo esquerdo é subdividida em basal, mid-cavidade, e apical curto porções -axial de acordo com o de 17 segmentos modelo AHA ^25. absorção metabólica Dissimilar é claramente visível em meados de ântero-lateral, anterior apical, apical inferior, e segmentos laterais apicais. Os valores apresentados representam a segmentar significa em unidades Hounsfield ± desvio padrão. (B) Metaboli do Miocárdiomapas c captação são mostrados sem subdivisão em 17 segmentos. O centro da trama correspondente ao ápice cardíaco (segmento 17) não é mostrado.

Figura 9. movimento Representante parede miocárdica (mm), espessamento da parede (%) e fração de ejeção regionais (%) circunferenciais enredo exibe polares (gráficos polares Bulls Eye) de um rato com infarto do miocárdio. (A) O ventrículo esquerdo é subdividida em basal, mid-cavidade, e porções curtas-axial apicais de acordo com o de 17 segmentos modelo AHA ^25. A presença de, e regiões discin�icos acinéticos hipocinéticas em meados de cavidade e apical denotam grande defeito do miocárdio. (B) Os mapas de medição do miocárdio regionais são mostrados sem subdivisão em 17 segmentos. O centro da trama correspondente ao apex cardíaco (segmento 17) estánão mostrado.

Figura 10. Representante movimento da parede miocárdica (mm), espessamento da parede (%) e fração de ejeção regionais (%) circunferenciais enredo exibe polares (gráficos polares Bulls Eye) de um mouse sem infarto do miocárdio. (A) O ventrículo esquerdo é subdividida em basal, mid-cavidade, e porções curtas-axial apicais de acordo com o de 17 segmentos modelo AHA ^25. Nenhuma anormalidade aparente é detectado. (B) Os mapas de medição do miocárdio regionais são mostrados sem subdivisão em 17 segmentos. O centro da trama correspondente ao ápice cardíaco (segmento 17) não é mostrado.

Tabela 1. volumes do ventrículo esquerdo e globais índices funcionais meas. ured em três ratos 3 horas após a oclusão da artéria coronária LAD e em um mouse operação simulada * BPM, bate por minuto; VDFVE, deixou o volume diastólico final ventricular; LVESV, deixou volume sistólico final ventricular; VSVE, o volume sistólico do ventrículo esquerdo; FEVE, fração de ejeção do ventrículo esquerdo; CO, débito cardíaco; LVMV _TOTAL, o volume total do ventrículo esquerdo do miocárdio; LVMM, massa miocárdica do ventrículo esquerdo; LVMMI, ventricular esquerda índice de massa do miocárdio; LVMV _MI, ventricular esquerda volume de enfarte do miocárdio; % LVMIS,% do ventrículo esquerdo tamanho do infarto do miocárdio.

Discussão

Ao longo dos últimos anos MicroCT tornou-se a modalidade de muitas pesquisas considerados para a caracterização da estrutura e função cardíaca em pequenos animais ^26-29,30. No entanto, a instrumentação utilizada no trabalho anterior foi construído sob encomenda, quer ou não comercialmente disponíveis. Como tal, este estudo teve como objetivo fornecer um protocolo simples e abrangente para o uso do sistema MicroCT de alta velocidade com intrínseca gating cardio-respiratória para determinar a função global e regional cardíaca juntamente com perfusão e viabilidade miocárdica em pequenos animais como modelos de coração humano doença.

Um dos requisitos mais importantes para o estudo da estrutura e função do coração é a capacidade do scanner para explicar movimentos cardíacos fisiológicas. Para este fim, ECG baseado em técnicas de propagação prospectivos e retrospectivos pode ser usado. No entanto, prospectivo gating (passo e disparar) se baseia em um intervalo pré-determinado do ciclo cardíaco, para o exameple durante a diástole, quando o movimento do coração é menos. Com esta abordagem só uma imagem por ciclo cardíaco é obtido e apenas uma fase do ciclo cardíaco possa ser reconstruída. Como tal, além de ser demorado para gerar, reconstruções prospectivamente fechado produzir apenas um conjunto de dados, que é privado de informação funcional. gating retrospectiva, por outro lado, permite a reconstrução de múltiplos conjuntos de dados em cada parte do ciclo cardíaco, permitindo assim a análise funcional ventricular esquerda global e regional.

O presente trabalho empregada reconstruções cardiorrespiratórias com gating retrospectiva intrínseco. Gating retrospectiva intrínseca utiliza software baseado na imagem proprietário para reconstruir as fases cardíacas diastólico e sistólico finais, sem necessidade de respiratória dedicado e dispositivos de monitorização cardíaca ^29,31,32. Uma excelente concordância dos intrínseca gating retrospectiva retrospectivo e extrínseca ECG-dependente para studying função cardíaca em ratos e ratazanas foi demonstrado pelo Dinkel et ai. ^29. Durante este presente trabalho, gating retrospectiva intrínseca não só minimizado significativamente o tempo necessário para configurar a digitalização, mas também eliminou a dependência de hardware de monitoramento, como derivações de ECG e sensor de pneumática respiratória, bem como as habilidades do operador adicional para configurá-lo adequadamente para cima.

Após a reconstrução, a qualidade de imagem de ambos os conjuntos de dados finais diastólico e sistólico final foi considerado satisfatório para a análise cardíaca. Durante o exame das imagens, foi dada particular atenção aos artefatos de movimentação que podem ocorrer durante um nível insuficiente de anestesia, listando os artefatos que podem acontecer como resultado de projeções ausentes em animais com artefatos alta taxa de respiração, baixa atenuação que são comumente causadas por estruturas ósseas e pode imitar defeitos de perfusão e artefatos anel que podem surgir de mis-calibração ou falha de um ou mais detector ELEmentos.

A capacidade de MicroCT para produzir informação estrutural e funcional cardíaca também é dependente da disponibilidade do agente de contraste intravascular adequado. Mais actualmente contrastes microCT disponíveis comercialmente podem ser geralmente divididos em partículas de macrófagos não metabolizável específica e polidispersos contrastes à base de iodo metabolizável ^23,33-36. Embora os agentes de partículas oferecem maior opacificação de raios-X devido ao seu elevado número atómico (bário, Z = 56; e ouro, Z = 79), eles não podem ser utilizados para a avaliação metabólica. Além disso, estes agentes são considerados nocivos para o organismo e removidos pelos macrófagos hepáticos (células de Kupffer), que limpam as células do sistema reticuloendotelial (RES). Devido à sua natureza não metabolizável, estes agentes de induzir alterações na microcirculação hepática concomitante com danos no fígado ^37.

contrastes à base de iodo metabolizável, por outro lado, não são targeted para a remoção-RES específicas, portanto, deve oferecer um melhor perfil de segurança e evitar a toxicidade do fígado. Em adição ao seu melhor perfil de segurança, estes contrastes são absorvidos pelos tecidos metabolicamente activos, assim, pode ser utilizado para a avaliação da viabilidade ^22,23. Para este fim, o agente de contraste iodado foi selecionada para o presente estudo. O contraste foi administrado a uma dose de 5 ou 10 ml por grama de peso corporal do animal por injecção intravenosa em bolus único. Embora ambas as doses do realce produzido resultados satisfatórios, foi observado um aumento dependente da dose na ventricular esquerda e níveis de contraste do miocárdio quando 10 ul / g do contraste foi injectado. De interesse, com a dose maior, a duração da poça de sangue foi prolongado e o pico de captação de contraste do miocárdio foi adiada. Um animal (rato 1) foi seguido por 10 semanas após a cirurgia e durante este período foi fotografada a cada duas semanas. A partir da experiência, nenhum efeito adverso relacionado com o contraste (total de 5 emprojecções) ou relacionados com a exposição de raios-X (total de 10 varreduras microCT) foram observados neste mouse durante o período de acompanhamento. Um dos efeitos adversos mais comumente reportados de exposição de iodo longo prazo é distúrbio da glândula tireóide que não foi observado macroscopicamente nos exames post-mortem. Mannheim et al. Os níveis de tiroxina estudada após 3 administrações contraste consecutivos e não encontraram nenhuma diferença quando os níveis foram comparados com os controles ^37. Com a utilização dos mesmos conjuntos de dados microCT, não há sinais de fibrose pulmonar induzida por radiação foram detectados nesse animal (dados não mostrados), conformando-se a segurança do processo.

Avaliação da função global e regional do coração ventricular é considerado o mais forte determinante do desempenho cardíaco e importante em termos de prognóstico e escolha da intervenção terapêutica ^38,39. Os índices funcionais do ventrículo esquerdo globais incluem esquerda volume diastólico final ventricular (VDFVE), o volume ventricular esquerdo sistólico final (VSF), o volume de esquerda curso ventricular (VSVE), fração de ejeção do ventrículo esquerdo (FEVE) e débito cardíaco (CO). Estudos anteriores microCT confirmou que a avaliação quantitativa da função cardíaca global é viável em modelos de doenças cardiovasculares murino e que diminuição acentuada na função cardíaca mundial tem lugar logo após a oclusão da artéria LAD. Estes resultados estão de acordo com os relatórios anteriores em que a redução acentuada na VSVE, FEVE, e CO já ocorreu no dia 1 após a oclusão ^29,40-43. É digno de nota mencionar que o desempenho funcional cardíaca é dependente do tipo e do grau de anestesia, assim, para medições precisas da frequência cardíaca durante a aquisição de imagem deve ser mantido o mais fisiológico possível ^44.

avaliação quantitativa da massa miocárdica ventricular esquerda (LVMM) é importante para a avaliação da hipertrofia ventricular esquerda e foi conduzido principalmente usando MRI ^11,43,45,46. LVMM é frequentemente corrigido para peso corporal e apresentado como ventricular esquerda índice de massa do miocárdio (LVMMI) para permitir a normalização do peso cardíaco entre ratos de diferentes idades e habitus. Estimativa exacta destes parâmetros é importante, pois os ratos com infarto do miocárdio desenvolver hipertrofia significativa ^47. Avaliação da geometria LVMM, LVMMI, e LV também é importante para o diagnóstico de hipertrofia cardíaca e displasia ^11. Como tal, a determinação destes parâmetros será adicionalmente benéfico para diferenciar as condições, tais como a hipertrofia concêntrica, hipertrofia excêntrica, ou remodelação concêntrica. No presente trabalho, tanto valores LVMMI LVMM e foram determinados em ratos submetidos a ligadura da artéria LAD e no animal operação simulada. Subsequentemente, o tamanho do enfarte do miocárdio foi identificada e utilizada para calcular a percentagem do tamanho do enfarte. Embora durante a cirurgia da ligadura da artéria coronária LAD foi applied ao mesmo nível, a oclusão gerado enfartes com alguma variabilidade: 13,3%, 15,8%, e 22,4% (Tabela 1). Uma possível explicação para essa variabilidade pode emanar de diferenças na anatomia das artérias coronárias e seu suprimento de sangue territorial entre os animais, e de acordo com relatórios anteriores ^48. A forma mais comum de avaliação de tamanho do enfarte num modelo de rato de enfarte do miocárdio é por ex vivo coloração do cloreto de trifenil tetrazólio (TTC), a técnica que não iria permitir a monitorização longitudinal da doença no mesmo animal. No contexto do trabalho anterior de Ashton et al. ^{22 e} do presente, é de salientar que MicroCT em conjunto com agentes de contraste iodados pode fornecer um método alternativo e não-destrutivo de determinar o tamanho do enfarte longitudinalmente.

Uma vantagem adicional da técnica de MicroCT reside na determinação muito precisa da isquemia regional. Like em seres humanos da artéria coronária esquerda das divisões mouse em uma artéria descendente (LAD) e um ramo septal (LCX). No entanto, em ratos, a anatomia dos ramos laterais da LAD e LCX difere consideravelmente entre os animais ^48. Grandes ramos da LCX, por vezes, têm semelhança com o LAD e desde as artérias coronárias de ratos são intra-miocárdica e, portanto, não visível, braçadeiras laterais da LCX são, por vezes acidentalmente, mas inevitavelmente incluídos na oclusão coronária durante o procedimento de rato-enfarte. Como tal, o mapa polar circumferentional obtido após MicroCT pode ser usado para determinar exatamente qual artérias coronárias foram ocluído, uma vez que a perfusão e contraste captação nos setores 2, 3, 8 e 9 são afetados pela LCX enquanto setores 7, 10, 11, 12 , 13, 15, 16 e 17 são fornecidos pela LAD. Assim, o mapa polar é de grande benefício para a determinação exacta das artérias obstruídas e, consequentemente, ajuda importante na correta interpretação dos efeitos da myocainfarto rdial da função cardíaca e progressão da doença.

O modelo do miocárdio rato enfarte usado altamente imita a situação clínica humana, onde os vasos coronários tornar-se de repente ocluído como resultado de uma ruptura aguda da placa e, como tal, de grande benefício para estudar o desenvolvimento da doença do coração infartado ^49. Enquanto nos países desenvolvidos o tratamento países ocidentais de doentes com enfarte de miocárdio é destinada a restabelecer rapidamente a recirculação do vaso coronário, em muitas ocasiões, especialmente em países economicamente menos desenvolvidos, onde a incidência de infarto do miocárdio está a aumentar rapidamente, a oclusão não pode ser anulado em tempo de ^1,50. Isso induz em grandes infartos ventriculares que na maioria das vezes vai levar à insuficiência cardíaca crônica e são um tremendo fardo para a saúde pública. Consequentemente, métodos diagnósticos não invasivos longitudinais usando um modelo de infarto do miocárdio com occ artéria coronária permanenteLusion e um grande infarto ventricular são de grande importância para o desenvolvimento de novas estratégias de tratamento contra esta doença.

Miocárdio imagem de perfusão CT é uma técnica rápida evolução que permite avaliação quantitativa das alterações do fluxo sanguíneo coronário regionais e sua relevância para a função cardíaca e viabilidade. Mais recentes estudos em animais pequenos reduziu a diferença entre MicroCT e SPECT, a modalidade de escolha para perfusão e viabilidade de avaliação ^22. Com o objectivo de avaliar o grau de comprometimento do fluxo sanguíneo regional provocado pela oclusão da artéria coronária LAD, os dados microCT também foram avaliados quanto à informação de perfusão miocárdica. A artéria LAD ligado é conhecido para proporcionar o fornecimento de sangue para a parede livre, que faz parte do septo, e a região apical do ventrículo esquerdo. defeitos de perfusão miocárdica (áreas hypoenhanced) de rato 1 são mostrados em uma polar sistema e óbvia coordenadas em meados de anterior, mid-inferolateral, mid-ântero-lateral, apicalanterior, e segmentos laterais apicais, os resultados são consistentes com a mesma distribuição coronária (Figura 3). Não há diferença entre defeitos de perfusão derivados de imagens de fim de diastólica e sistólica final de foi encontrado em homosegments. Os diastólica final e sistólico finais de perfusão do miocárdio polares mapa mostra do animal operação simulada são mostrados na Figura 4. Pequenas diferenças no fluxo sanguíneo do miocárdio entre os segmentos do animal de controle são insignificantes em ambas as representações diastólico e sistólico final . Curiosamente, as áreas de hypoenhancement pode ser visto visualmente em imagens de secção transversal de curto-axiais (Figura 1) e pode ser facilmente quantificados, como mostrado na Figura 3. Isto não era possível no estudo de Befeda et ai., E podia ser explicado pela maior ruído do instrumento MicroCT utilizado ^22. A fim de ser distinguidos visualmente, as diferenças de sinal deve ser, pelo menos, três a cinco vezes maiorque o ruído (desvio padrão) na imagem ^51. Baixo nível de ruído do MicroCT utilizada neste estudo permitiu a detecção de uma pequena diferença de sinal entre miocárdio prejudicada e normalmente perfundido (127HU ± 23HU vs. 217HU ± 29HU), permitindo avaliação positiva dos defeitos padrão de perfusão do miocárdio.

Uma das principais vantagens da utilização de agentes de contraste iodados, é a capacidade de avaliar a viabilidade do miocárdio e o metabolismo devido ao reforço do miocárdio contraste, relacionado. Para o nosso conhecimento, a capacidade do contraste para melhorar miocárdio foi primeiramente descrita por Detombe et al. ^{23 e} seu primeiro uso para geração de imagens infarto do miocárdio foi relatada por Ashton et al. ^22. Embora o grupo indicou que o miocárdio perfundido nos ratos com enfarte do miocárdio mostrou um acessório semelhante aos controlos, e que o miocárdio enfartado não mostrou qualquer melhoramento, avaliação quantitativa do miocárdio e segmentarnhancement não foi relatada. Para investigar se realce miocárdico pode ser avaliada quantitativamente, todos os ratinhos foram reimaged utilizando o mesmo protocolo de imagem 3 - 4 horas depois da administração de contraste, quando o acessório do miocárdio em relação à cavidade foi máxima.

Defeitos de captação de contraste do miocárdio foram visualmente observados em imagens de seção transversal curta-axial diastólica final e sistólico finais de um coração mouse com infarto do miocárdio (Figura 5), mas não no animal operação simulada (Figura 6). Captação miocárdica foi avaliada quantitativamente em cada segmento do miocárdio de ambas as reconstruções diastólico e sistólico final e apresentados em um sistema coordenado polar (Figura 7 e 8). Os valores homosegmental diastólico e sistólico final obtidos a partir do mesmo animal não eram diferentes. No entanto, os gráficos polares circunferenciais mostrou alterações específicas do segmento (Figure 7) com padrões semelhantes aos mostrados nos mapas de perfusão miocárdica (Figura 2). Sem defeitos captação de contraste foram vistos nas parcelas polares circunferenciais do mouse operação simulada (Figura 8). Os dados de absorção do miocárdio eram de qualidade suficiente para realizar análise funcional global e avaliação quantitativa da massa miocárdica do VE e tamanho do infarto (não mostrado). Apesar de não ser pertinente para o modelo atualmente utilizado com oclusão da artéria coronária LAD permanente, acreditamos que a extração do miocárdio contraste pode estar relacionada não só às alterações no fluxo sanguíneo do miocárdio regional, mas também para o estado de cardiomiócitos (por exemplo, cicatrizes, atordoado e miocárdio hibernado) . Para testar esta hipótese, o trabalho futuro vai empregar o modelo com isquemia miocárdica temporária e reperfusão.

contração ativa dos resultados do miocárdio em movimento parede miocárdica e espessamento que servem como marcadores importantes da f sistólicaunção e viabilidade miocárdica. Avaliação de movimento de parede regional, espessamento, e fração de ejeção ajuda a discernir o movimento da parede sistólica passiva de contração do miocárdio ativa. A fim de possibilitar a quantificação padronizada da extensão e gravidade da lesão, o movimento da parede, espessamento da parede, e fração de ejeção regionais são comumente mapeado em mapas polares. Anormalidades de movimento da parede ventricular regionais são importantes marcadores de isquemia miocárdica que são mais comumente avaliados por ressonância magnética ^52. As contagens de movimento da parede ventricular esquerda, espessamento e a fracção de ejecção regionais para cada segmento de um rato, com e sem enfarte do miocárdio são apresentados na Figura 9 e na Figura 10. Como era esperado, a ligação da artéria coronária LAD, resultou numa diminuição acentuada dos índices funcionais regionais LV ( a Figura 9), enquanto não se observou nenhum efeito no rato operação simulada (Figura 10). Estes resultados estão em concordância comdados relatados anteriormente.

Em conclusão, este trabalho demonstrou o primeiro uso bem sucedido de um sistema MicroCT de alta velocidade para determinação abrangente de parâmetros funcionais globais e regionais do miocárdio, juntamente com a avaliação da perfusão e viabilidade miocárdica em saudável e em um modelo de rato de enfarte do miocárdio. Este trabalho pode ser ainda estendido para caracterização de outros modelos de doença cardiovascular, permitindo a avaliação precisa e não-destrutiva de alterações funcionais e fisiopatológicos cardíacas, e para a avaliação de novas estratégias preventivas e terapêuticas.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Sistema de imagem Quantum FX MicroCT	PerkinElmer, Hopkinton, MA, EUA		Sistema de microtomografia computadorizada
XGI-8 Sistema de anestesia	PerkinElmer, Hopkinton, MA, EUA	Cat. No. 118918	Sistema de Anestesia com Gás
Analyze 12.0 Software	Analyze Direct, Overland Park, KS, EUA		Software de Visualização e Análise para Imagem
eXIA160 MicroCT Contrast	Binitio Biomedical, Ottawa, ON, CANADÁ	Cat. Não. eXIA160-01; eXIA160-02; eXIA160-03; eXIA160-04; eXIA160-05	Radiocontraste à base de iodo para imagens MicroCT
Isoflurano	Pharmachemie BV, Haarlem, Holanda	Cat. No. 45.112.110	anestesia inalatória
1/2CC U-100 28G1/2 Seringa de insulina	Becton Dickinson and Company, USA	Cat. Nº 329461	Seringas de insulina com interior estéril
Microscópio Leica tipo M80	Leica Microsystems BV, Eindhoven, Holanda		Microscópio estéreo com zoom