Imagiologia Fibras Serotoninérgicos na medula espinhal mouse usando o CLARIDADE / Técnica CUBIC

Huazheng Liang; Emma Schofield; George Paxinos

doi:10.3791/53673

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Artigo de método

Imagiologia Fibras Serotoninérgicos na medula espinhal mouse usando o CLARIDADE / Técnica CUBIC

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DOI:

10.3791/53673

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26 de fevereiro de 2016

Huazheng Liang¹^,² , Emma Schofield¹ , George Paxinos¹^,²

¹Brain Structure and Function Group, Neuroscience Research Australia, ²School of Medical Sciences, The University of New South Wales

Neste artigo

Resumo

As projeções supraespinhais são importantes para a percepção da dor e outros comportamentos, e as fibras serotoninérgicas são um desses sistemas de fibras. O presente estudo teve como foco a aplicação do protocolo combinado CLARITY/CUBIC à medula espinhal de camundongos, a fim de investigar a terminação dessas fibras serotoninérgicas.

Resumo

fibras descendentes longos para a medula espinhal são essenciais para a locomoção, a percepção da dor, e outros comportamentos. O padrão de terminação da fibra na medula espinal da maioria destes sistemas de fibra não foram cuidadosamente investigados em qualquer espécie. fibras serotoninérgicos, que se projectam para a espinal-medula, foram estudados em ratos e em secções histológicas marsupiais e o seu significado funcional foi deduzida com base no seu padrão de terminação da fibra na medula espinal. Com o desenvolvimento de clareza e técnicas cúbicos, é possível investigar este sistema de fibra e a sua distribuição na medula espinal, a qual é susceptível de revelar características anteriormente desconhecidos de vias supraespinhais serotoninérgicos. Aqui, nós fornecemos um protocolo detalhado para geração de imagens das fibras serotoninérgicos na medula espinhal de rato usando o CLAREZA combinados e técnicas cúbicos. O método envolve a perfusão de um rato com uma solução de hidrogel e clarificação do tecido com uma combinção de limpar reagentes. tecido da medula espinhal foi liberado em pouco menos de duas semanas, e a coloração de imunofluorescência subsequente contra a serotonina foi concluída em menos de dez dias. Com um microscópio de fluorescência multi-fotão, o tecido foi digitalizado e uma imagem 3D foi reconstruído usando software Osirix.

Introdução

As projeções supraespinhais são responsáveis pela modulação de diversos comportamentos, como a percepção da dor. Uma das projeções com informações nociceptivas contém fibras serotoninérgicas, que se originam da rafe do rombencéfalo e dos núcleos reticulares adjacentes^1,2. Estudos fisiológicos e farmacológicos demonstraram um aumento da liberação de serotonina no corno dorsal da medula espinhal após estimulação elétrica dos núcleos da rafe no rombencéfalo^3-5. No rato e no gambá, as fibras rafespinal serotoninérgicas têm terminais densos, não apenas no corno dorsal^6-8, mas também na zona intermediária^7,9,10, no corno ventral